隨著基因工程和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，將siRNA導(dǎo)入真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染技術(shù)嵌灰，已成為研究基因功能弄匕、調(diào)控基因表達(dá)和突變分析等生物學(xué)試驗(yàn)的一種重要手段颅悉。目前沽瞭，能夠?qū)iRNA導(dǎo)入細(xì)胞的方法主要有物理介導(dǎo)（電穿孔法、顯微注射和基因槍）剩瓶、化學(xué)介導(dǎo)（磷酸鈣共沉淀法驹溃、載體轉(zhuǎn)染等）以及生物介導(dǎo)（原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染城丧、病毒轉(zhuǎn)染）三種途徑。但由于物理介導(dǎo)法對(duì)細(xì)胞的傷害很大且需要借助特殊設(shè)備豌鹤，而生物介導(dǎo)法的準(zhǔn)備程序又比較復(fù)雜亡哄，并且常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性，因此布疙，化學(xué)介導(dǎo)法成為實(shí)驗(yàn)室最常用的方法蚊惯，其中又以載體轉(zhuǎn)染法最為普遍。

市面上大多數(shù)的轉(zhuǎn)染載體都是脂質(zhì)體類載體灵临，這類載體對(duì)細(xì)胞的毒性比較大截型，轉(zhuǎn)染效果有時(shí)也不夠理想。但隨著納米生物材料的發(fā)展儒溉，利用該種材料研發(fā)的轉(zhuǎn)染載體不僅擁有極低的細(xì)胞毒性宦焦，在轉(zhuǎn)染效率上也有非常不錯(cuò)的表現(xiàn)，以下是幾種目前實(shí)驗(yàn)室最常用的siRNA轉(zhuǎn)染試劑顿涣。

一波闹、Lipofectamine 3000

Lipofectamine 3000是一款市場(chǎng)占有率和知名度都很高的轉(zhuǎn)染試劑。該款產(chǎn)品采用了脂肪納米微粒技術(shù)涛碑，它屬于一種脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑精堕。大家都知道Lipofectamine 2000原先是十分受歡迎的，但由于細(xì)胞毒性較為明顯蒲障，其推廣應(yīng)用受到較大影響锄码。Lipofectamine 3000較Lipofectamine 2000在成分上做了優(yōu)化，細(xì)胞毒性和Lipofectamine 2000相比晌涕，要小了很多滋捶。盡管如此，Lipofectamine 3000對(duì)部分細(xì)胞還是存在較為明顯的細(xì)胞毒性的余黎。雖然其說(shuō)明書表述該試劑對(duì)細(xì)胞作用溫和重窟、轉(zhuǎn)染后非必需換液，但大多數(shù)科研者在分享轉(zhuǎn)染經(jīng)驗(yàn)時(shí)還是建議轉(zhuǎn)染后6-8小時(shí)更換培養(yǎng)液惧财，如果不及時(shí)更換新鮮的培養(yǎng)基巡扇，細(xì)胞死亡率還是比較高的，可達(dá)20-30%左右垮衷。不過(guò)厅翔，對(duì)于一些耐受性強(qiáng)的細(xì)胞，Lipofectamine 3000還是有比較不錯(cuò)的轉(zhuǎn)染效率的搀突。因而刀闷，研究者在選擇使用Lipofectamine 3000時(shí)，需要考慮所要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的毒性是否耐受。

此外甸昏，使用Lipofectamine 3000進(jìn)行轉(zhuǎn)染復(fù)合物配制時(shí)顽分，需要使用特殊培養(yǎng)基--Opti-MEM減血清培養(yǎng)基，來(lái)分別稀釋轉(zhuǎn)染試劑與小核酸進(jìn)行配制施蜜。實(shí)驗(yàn)者需要額外購(gòu)買這種減血清培養(yǎng)基卒蘸。

二、Lipofectamine RNAi MAX

Lipofectamine RNAi MAX翻默，是目前國(guó)際公認(rèn)的最為權(quán)威的siRNA轉(zhuǎn)染試劑之一缸沃。在賽默飛現(xiàn)售的所有轉(zhuǎn)染試劑中，RNAi MAX的轉(zhuǎn)染密度要求是最低的修械，細(xì)胞融合度在30-50%時(shí)就可以進(jìn)行轉(zhuǎn)染和泌，而像Lipofectamine 2000/3000都要求融合度在70-90%之間轉(zhuǎn)染。其實(shí)祠肥，要想知道一個(gè)轉(zhuǎn)染試劑的毒性通過(guò)它的轉(zhuǎn)染密度要求就能看出來(lái)武氓，這也從側(cè)面反應(yīng)出，RNAi MAX的細(xì)胞毒性是更低的仇箱。

并且县恕，相較Lipofectamine 3000，RNAi MAX做到了低siRNA濃度下就可獲得優(yōu)良的轉(zhuǎn)染效果剂桥，轉(zhuǎn)染性能又上了一個(gè)臺(tái)階忠烛。但是，實(shí)驗(yàn)者使用RNAi MAX轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行siRNA轉(zhuǎn)染权逗，轉(zhuǎn)染后一般無(wú)需換液美尸，但配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)依舊需要額外購(gòu)買Opti-MEM培養(yǎng)基。

作為這樣一款高性能的siRNA轉(zhuǎn)染試劑斟薇，RNAi MAX的售價(jià)自然不菲师坎，其一支1.5mL規(guī)格的轉(zhuǎn)染試劑，定價(jià)已逾萬(wàn)堪滨，這點(diǎn)對(duì)于很多經(jīng)費(fèi)有限的實(shí)驗(yàn)者來(lái)說(shuō)往往需要考慮再三胯陋。

三、RFect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑

RFect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑是在RFect siRNA轉(zhuǎn)染試劑基礎(chǔ)上的升級(jí)產(chǎn)品袱箱，目前受到很多實(shí)驗(yàn)室的肯定遏乔。該試劑以新型可降解納米材料為主要成分研發(fā)而成，區(qū)別于市場(chǎng)上的脂質(zhì)體類轉(zhuǎn)染試劑如Lipofectamine 3000发笔、RNAi MAX盟萨。

升級(jí)后的RFect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑在各方面都有顯著的提升。細(xì)胞毒性上了讨，使用RFect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑在細(xì)胞融合度30-50%之間進(jìn)行轉(zhuǎn)染捻激，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡率只有5%左右制轰，比RFect要更低，似乎還略優(yōu)于RNAi MAX铺罢。轉(zhuǎn)染效率上艇挨，Rfect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑盒里配置有專研的siRNA轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑残炮，能夠有效降低細(xì)胞膜的免疫排異反應(yīng)韭赘，從而提升siRNA轉(zhuǎn)染的效率。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示势就，Rfect V2在很多貼壁細(xì)胞中的mRNA敲除效率可高達(dá)95%左右泉瞻，比Rfect小核酸轉(zhuǎn)染試劑要高出5-30%。我們將RFect V2和RNAi MAX分別轉(zhuǎn)染小核酸NC-FAM到Hela細(xì)胞中苞冯，比較兩個(gè)試劑的轉(zhuǎn)染效率袖牙，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩者的轉(zhuǎn)染效率皆達(dá)到了90%以上舅锄，難分伯仲鞭达。

另外，使用RFect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑不需要搭配如Opti-MEM這類特殊的培養(yǎng)基皇忿，其siRNA轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑可完全替代無(wú)血清培養(yǎng)基配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物畴蹭，轉(zhuǎn)染效果更好。同時(shí)鳍烁，血清對(duì)Rfect V2的轉(zhuǎn)染效果也沒(méi)有影響叨襟，也不必在轉(zhuǎn)染4-6小時(shí)后換液，這些方面增加了實(shí)驗(yàn)的方便性幔荒，更有利于研究者使用糊闽。