液體活檢(liquid biopsy)在腫瘤臨床診斷治療領(lǐng)域的應(yīng)用日益廣泛，是實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤"個(gè)體化精準(zhǔn)醫(yī)療"的重要手段。為科學(xué)規(guī)范液體活檢技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用，中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會(huì)、國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心共同制定了《液體活檢在臨床腫瘤診療應(yīng)用和醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)踐中的專家共識(shí)》，并廣泛征求了臨床腫瘤專家和醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專家的意見(jiàn)柏靶。
本應(yīng)用建議最后經(jīng)中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會(huì)和國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心組織專家進(jìn)行討論修改后，由中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會(huì)溃论、國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心共同發(fā)布屎蜓。鑒于液體活檢技術(shù)發(fā)展迅速，本應(yīng)用建議將適時(shí)修訂钥勋，以適應(yīng)醫(yī)學(xué)發(fā)展和滿足臨床應(yīng)用的需求梆靖。
液體活檢是指利用人體體液作為標(biāo)本來(lái)源檢測(cè)獲取腫瘤相關(guān)信息的技術(shù)控汉。相比于傳統(tǒng)侵入式組織活檢，液體活檢具有依從性佳返吻、標(biāo)本易獲取姑子、特異性好等優(yōu)勢(shì)；更重要的是测僵，其能有效克服腫瘤異質(zhì)性街佑，可有效實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的腫瘤輔助診斷、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)捍靠、療效評(píng)價(jià)及預(yù)后判斷沐旨。因此，液體活檢有望成為癌癥早期輔助診斷榨婆、伴隨診斷磁携、治療監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估的理想技術(shù)。液體活檢主要包括循環(huán)腫瘤DNA(circulating tumor DNA良风，ctDNA)谊迄、循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell，CTC)和外泌體等檢測(cè)烟央，其中ctDNA與CTC是目前最受關(guān)注的兩類液體活檢靶標(biāo)统诺。ctDNA是指人體血液循環(huán)中攜帶有腫瘤特異性基因突變、缺失疑俭、插入粮呢、重排、拷貝數(shù)變異及甲基化等信息的DNA片段钞艇，其主要來(lái)源于壞死或凋亡的腫瘤細(xì)胞啄寡、循環(huán)腫瘤細(xì)胞或者腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體。CTC是指自發(fā)或被動(dòng)地從實(shí)體腫瘤病灶脫落進(jìn)入到血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞哩照。作為腫瘤轉(zhuǎn)移/復(fù)發(fā)的"種子"挺物，CTC攜帶有大量與腫瘤發(fā)生、發(fā)展葡秒、轉(zhuǎn)移以及耐藥相關(guān)的信息。
在臨床實(shí)踐過(guò)程中應(yīng)該謹(jǐn)慎評(píng)估液體活檢的分析有效性顶瞒、臨床有效性以及臨床實(shí)用性场斑。本專家共識(shí)圍繞CTC和ctDNA兩種靶標(biāo)诚亚，綜合近年來(lái)發(fā)表的液體活檢領(lǐng)域重要研究成果、結(jié)合我國(guó)腫瘤液體活檢的臨床實(shí)踐需求学少，就相關(guān)的臨床常用檢測(cè)技術(shù)的實(shí)施和質(zhì)量管理提供常規(guī)指導(dǎo)原則。
本共識(shí)主要分為兩大部分：(1)液體活檢的臨床應(yīng)用秧骑，(2)液體活檢的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)踐版确。
第一部分 液體活檢的臨床應(yīng)用
一扣囊、液體活檢技術(shù)的選擇
(一)ctDNA檢測(cè)技術(shù)的選擇
目前，實(shí)驗(yàn)室常用的ctDNA檢測(cè)技術(shù)包括擴(kuò)增受阻突變體系(amplification refractorymutation system绒疗，ARMS)侵歇、二代測(cè)序(next－generation sequencing，NGS)吓蘑、數(shù)字PCR(digital PCR惕虑，dPCR)和核酸質(zhì)譜檢測(cè)等。ARMS方法是目前獲得中國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(China Food and DrugAdministration磨镶，CFDA)批準(zhǔn)可用于臨床ctDNA檢測(cè)的方法溃蔫，在臨床實(shí)踐中應(yīng)用相對(duì)普及。由于NGS方法在技術(shù)與成本方面存在瓶頸琳猫，使得ARMS在檢測(cè)諸如EGFR等已知突變中具有明顯優(yōu)勢(shì)伟叛。針對(duì)未知突變的發(fā)掘，NGS方法則具有其他方法無(wú)可比擬的技術(shù)優(yōu)勢(shì)脐嫂。包括Nature Medicine统刮、Lancet Oncology及New England Journal of Medicine在內(nèi)諸多頂級(jí)期刊所報(bào)道的多項(xiàng)臨床試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)NGS在耐藥監(jiān)測(cè)中具有重要的臨床價(jià)值：通過(guò)NGS監(jiān)測(cè)可有效發(fā)掘耐藥新突變，及時(shí)調(diào)整干預(yù)措施雹锣，切實(shí)提高靶向治療療效网沾。dPCR和基于質(zhì)譜的核酸檢測(cè)方法盡管可應(yīng)用于已知突變ctDNA的檢測(cè)，但僅限于實(shí)驗(yàn)室自建蕊爵，尚缺乏高等級(jí)循證醫(yī)學(xué)證據(jù)的支持辉哥，目前仍難以進(jìn)入臨床實(shí)踐≡苌洌基于上述研究結(jié)果與臨床實(shí)際醋旦，專家組認(rèn)為檢測(cè)已知、單個(gè)靶向治療敏感或耐藥型突變時(shí)会放，建議使用ARMS方法饲齐；檢測(cè)已知、多個(gè)平行臨床治療靶點(diǎn)或發(fā)現(xiàn)未知基因咧最、探索臨床價(jià)值與相關(guān)機(jī)制時(shí)建議使用NGS方法捂人；dPCR具有驗(yàn)證NGS檢測(cè)結(jié)果的潛能，但在應(yīng)用前應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格評(píng)估其檢測(cè)性能與臨床意義矢沿。
(二)CTC檢測(cè)技術(shù)
CellSearch平臺(tái)是目前唯一被CFDA批準(zhǔn)用于定性檢測(cè)循環(huán)血中上皮來(lái)源腫瘤細(xì)胞的技術(shù)滥搭。其在判斷轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌、乳腺癌及前列腺癌患者預(yù)后的臨床應(yīng)用價(jià)值具有高等級(jí)循證醫(yī)學(xué)證據(jù)支持捣鲸。但此檢測(cè)技術(shù)存在漏檢率較高瑟匆、富集后CTC活性差難以進(jìn)行后續(xù)基因組分析等缺點(diǎn)。其他檢測(cè)技術(shù)如免疫磁珠法和微孔過(guò)濾法等栽惶，盡管在多方面展現(xiàn)出優(yōu)良的CTC檢測(cè)性能愁溜，但目前仍缺乏足夠的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)支持其臨床應(yīng)用疾嗅。故臨床常規(guī)檢測(cè)CTC，建議各實(shí)驗(yàn)室選擇適合自身?xiàng)l件的檢測(cè)技術(shù)冕象，在充分評(píng)估其檢測(cè)性能后代承，應(yīng)用于日常工作
臨床實(shí)踐中選擇液體活檢技術(shù)：
共識(shí)1檢測(cè)患者ctDNA是否含有已知的、單個(gè)靶向治療敏感或耐藥型突變時(shí)交惯，建議使用ARMS方法次泽。
共識(shí)2檢測(cè)患者ctDNA已知的部分或全部臨床藥物治療靶點(diǎn)譜或耐藥指示靶點(diǎn)譜，或發(fā)現(xiàn)患者基因未知突變席爽、探索臨床價(jià)值與相關(guān)機(jī)制時(shí)建議使用NGS方法意荤。
共識(shí)3臨床常規(guī)檢測(cè)CTC，建議各實(shí)驗(yàn)室選擇適合自身?xiàng)l件的檢測(cè)技術(shù)只锻，在充分評(píng)估其檢測(cè)性能后玖像，應(yīng)用于日常工作。
二齐饮、液體活檢的應(yīng)用范圍
(一)腫瘤早期輔助診斷
1．ctDNA早期輔助診斷價(jià)值：
隨著檢測(cè)技術(shù)敏感度提高捐寥，目前ctDNA已可在早期肝癌、結(jié)直腸癌祖驱、乳腺癌握恳、胰腺癌以及肺癌患者循環(huán)中被檢出，提示ctDNA對(duì)于這幾種惡性腫瘤具有早期輔助診斷潛能捺僻。必須注意的是乡洼，特定突變例如P53突變可在健康人群中被檢出；此外匕坯，可用于早期診斷輔助ctDNA分子譜在不同癌種變異度較大且都未經(jīng)過(guò)大樣本臨床驗(yàn)證束昵，實(shí)際效能仍不明確。因此葛峻，需要探索更加特異的ctDNA分子譜并設(shè)計(jì)大規(guī)模前瞻性臨床試驗(yàn)證實(shí)其價(jià)值锹雏，目前距離真正臨床應(yīng)用還有較大距離。
2．CTC早期輔助診斷價(jià)值：
既往CTC研究多集中于其轉(zhuǎn)移/復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值术奖。近年來(lái)研究證實(shí)CTC的釋放是一種腫瘤早期事件礁遵，提示CTC對(duì)腫瘤早期輔助診斷具有重要價(jià)值。然而非腫瘤患者例如炎癥性腸炎或慢性肝炎患者體中可檢出低水平的假陽(yáng)性結(jié)果采记。由此可見(jiàn)佣耐，目前CTC并非一種完美的早期輔助診斷靶標(biāo)。此外挺庞，目前也缺乏CTC展現(xiàn)出優(yōu)于影像學(xué)診斷的臨床證據(jù)晰赞。綜上稼病，現(xiàn)階段CTC仍不適合單獨(dú)用于腫瘤早期輔助診斷选侨，需要更多的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)證明其價(jià)值掖鱼。
(二)指導(dǎo)臨床用藥
1．ctDNA的臨床用藥指導(dǎo)作用：
腫瘤精準(zhǔn)治療可通過(guò)檢測(cè)腫瘤相應(yīng)的基因信息，選擇合適的靶向藥物用于后續(xù)治療援制。故ctDNA檢測(cè)可提供十分重要的參考信息戏挡。截止2018年3月，主要腫瘤相關(guān)基因改變的靶向藥物選擇如表1所示晨仑。
表1?腫瘤相關(guān)基因改變與靶向藥物選擇
需要注意的是褐墅，目前ctDNA檢測(cè)僅在非小細(xì)胞肺癌中被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(Food and DrugAdministration，F(xiàn)DA)批準(zhǔn)用于指導(dǎo)EGFR酪氨酸激酶抑制劑選擇并寫入美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(National Comprehensive Cancer Network洪己，NCCN)指南妥凳。對(duì)于其他藥物選擇，目前仍處于探索階段答捕，尤其在檢測(cè)T790M時(shí)逝钥，對(duì)陰性結(jié)果應(yīng)盡可能通過(guò)后續(xù)的組織檢測(cè)進(jìn)行確認(rèn)。因此拱镐，未來(lái)還需要更多前瞻性循證醫(yī)學(xué)證據(jù)來(lái)支撐ctDNA的指導(dǎo)作用艘款。
2．CTC的臨床用藥指導(dǎo)作用：
CTC作為完整細(xì)胞，具有多種來(lái)源的腫瘤信息沃琅，包括蛋白哗咆、DNA突變、編碼及非編碼RNA信息等益眉。針對(duì)CTC的體外培養(yǎng)與藥敏實(shí)驗(yàn)被證明可用于篩選靶向藥物晌柬，具有巨大的臨床轉(zhuǎn)化潛能。但是呜叫，現(xiàn)有臨床CTC檢測(cè)體系在活性CTC分離問(wèn)題上仍存在關(guān)鍵性的技術(shù)瓶頸空繁，尚不能滿足提供多元化信息以指導(dǎo)靶向用藥的臨床需求；其他CTC分離檢測(cè)技術(shù)或指導(dǎo)價(jià)值不明確或短時(shí)間內(nèi)難以轉(zhuǎn)化朱庆。故盡管CTC檢測(cè)對(duì)于指導(dǎo)臨床實(shí)行精準(zhǔn)治療具有重要的潛在價(jià)值盛泡，但在更先進(jìn)的技術(shù)和更可靠的臨床證據(jù)出現(xiàn)之前，不鼓勵(lì)在實(shí)際臨床工作中用其指導(dǎo)靶向化療娱颊。
(三)靶向藥物伴隨診斷
1．ctDNA在靶向藥物伴隨診斷中的應(yīng)用：
靶向藥物使用過(guò)程中實(shí)行伴隨診斷有助于確保藥物安全性與有效性傲诵，是執(zhí)行"精準(zhǔn)醫(yī)療"理念的核心步驟之一。因此箱硕，伴隨診斷在臨床腫瘤綜合管理中的價(jià)值愈發(fā)顯著拴竹。截至2018年4月，已有多種靶向藥物伴隨診斷系統(tǒng)被FDA批準(zhǔn)用于實(shí)際臨床工作剧罩，常見(jiàn)適用伴隨診斷的藥物及其靶點(diǎn)如表2所示栓拜。
表2?常見(jiàn)適用伴隨診斷的藥物及其靶點(diǎn)
ctDNA檢測(cè)相對(duì)于常規(guī)組織活檢具有非侵入性、患者依從性好、異質(zhì)性低幕与、可反復(fù)取材等優(yōu)勢(shì)挑势，其在靶向藥物伴隨診斷中具有很大的優(yōu)勢(shì)。目前啦鸣，ctDNA檢測(cè)應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌EGFR靶向治療伴隨診斷已被NCCN寫入指南潮饱。未來(lái)伴隨著更先進(jìn)技術(shù)以及更多臨床證據(jù)的出現(xiàn)，將會(huì)有越來(lái)越多ctDNA檢測(cè)用于靶向藥物伴隨診斷诫给。
2．CTC在靶向藥物伴隨診斷中的應(yīng)用：
目前并無(wú)循證醫(yī)學(xué)證據(jù)提示CTC可應(yīng)用于伴隨診斷香拉，但小規(guī)模研究顯示CTC分子譜分析對(duì)于靶向藥物伴隨診斷具有積極意義。未來(lái)需要更多的高級(jí)別臨床證據(jù)充分探索CTC在伴隨診斷中的作用中狂。
(四)實(shí)時(shí)療效監(jiān)測(cè)
1．ctDNA實(shí)時(shí)療效監(jiān)測(cè)價(jià)值：
相比傳統(tǒng)的影像學(xué)與血清蛋白類腫瘤標(biāo)志物凫碌，ctDNA在反映療效方面具有更好的特異性與敏感度，理論上可準(zhǔn)確反映機(jī)體腫瘤負(fù)荷的細(xì)微變化胃榕。已有小規(guī)模隊(duì)列研究證實(shí)連續(xù)監(jiān)測(cè)腫瘤患者體內(nèi)ctDNA突變豐度的變化可反映治療后個(gè)體腫瘤負(fù)荷變化证鸥，及時(shí)提示臨床更換有效的治療策略。但是勤晚，目前ctDNA檢測(cè)存在重復(fù)性不佳枉层、不同實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)結(jié)果一致性較差、檢測(cè)結(jié)果在不同實(shí)驗(yàn)室間互換性低赐写、缺乏量化DNA負(fù)荷的最佳單位等缺陷鸟蜡，嚴(yán)重制約了ctDNA在臨床實(shí)踐中的應(yīng)用價(jià)值。因此挺邀，檢測(cè)ctDNA反映實(shí)時(shí)腫瘤療效仍處于臨床前階段揉忘，亟待技術(shù)進(jìn)步與大規(guī)模RCT研究來(lái)充分驗(yàn)證其價(jià)值。
2．CTC實(shí)時(shí)療效監(jiān)測(cè)價(jià)值：
CTC在反映療效中的優(yōu)勢(shì)在于其信息的多維性端铛，除數(shù)量變化外還可提供豐富的參數(shù)供臨床分析泣矛，從而系統(tǒng)地描繪出腫瘤演進(jìn)分子圖譜。研究顯示CTC動(dòng)態(tài)變化與療效顯著相關(guān)禾蚕，且較影像學(xué)與蛋白類標(biāo)志物展現(xiàn)出更好的敏感度與特異性您朽。但是，在現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)條件下其療效評(píng)估效能略遜于ctDNA换淆，且CTC檢測(cè)存在諸如重復(fù)性較差哗总、循環(huán)空間異質(zhì)性、缺乏理想分離方案等缺陷倍试，限制其大規(guī)模臨床應(yīng)用讯屈。因此，CTC暫時(shí)不是一種可直接應(yīng)用于臨床療效監(jiān)測(cè)的理想靶標(biāo)县习，其轉(zhuǎn)化有待更好的檢測(cè)技術(shù)出現(xiàn)與更多的臨床證據(jù)證實(shí)涮母。
(五)腫瘤進(jìn)展與不良預(yù)后早期預(yù)警
1．ctDNA早期預(yù)警作用：
ctDNA檢測(cè)對(duì)于包括肺癌谆趾、結(jié)直腸癌、乳腺癌在內(nèi)的多種實(shí)體瘤進(jìn)展具有重要預(yù)警價(jià)值叛本，其豐度改變可早于影像學(xué)發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移灶棺妓。這意味著可通過(guò)ctDNA檢測(cè)篩選出復(fù)發(fā)/進(jìn)展高風(fēng)險(xiǎn)的患者，為其在臨床進(jìn)展前創(chuàng)造干預(yù)治療的機(jī)會(huì)炮赦。此外，ctDNA豐度也與腫瘤患者無(wú)病生存期(disease free survival样勃，DFS)以及總體生存期(overall survival吠勘，OS)密切相關(guān)，特定亞克隆ctDNA的檢出對(duì)預(yù)測(cè)患者預(yù)后具有重要預(yù)測(cè)價(jià)值峡眶。但是剧防，目前大部分報(bào)道為小樣本研究，缺乏大樣本辫樱、多中心峭拘、前瞻性設(shè)計(jì)的臨床試驗(yàn)；此外亦缺乏高級(jí)別循證醫(yī)學(xué)證據(jù)支持患者能夠從ctDNA指導(dǎo)的臨床決策中獲得比常規(guī)腫瘤管理更多的臨床收益狮暑。因此鸡挠，臨床轉(zhuǎn)化ctDNA用于腫瘤進(jìn)展與不良預(yù)后早期預(yù)警仍需要更多的高級(jí)別循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。
2．CTC早期預(yù)警作用：
CTC檢測(cè)被FDA審批可用于預(yù)警轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌搬男、轉(zhuǎn)移性乳腺癌拣展、轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者的疾病進(jìn)展/不良預(yù)后。對(duì)其他實(shí)體惡性腫瘤例如惡性黑色素瘤缔逛、肝癌备埃、胃癌等，CTC也展現(xiàn)出良好的預(yù)測(cè)價(jià)值褐奴。但是按脚，目前仍缺乏足夠的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)支持CTC檢測(cè)在其他惡性腫瘤中的早期預(yù)警價(jià)值。未來(lái)需要更多設(shè)計(jì)良好的臨床試驗(yàn)來(lái)證實(shí)CTC在腫瘤進(jìn)展/不良預(yù)后早期預(yù)警中的價(jià)值敦冬。
(六)耐藥機(jī)制探索
1．ctDNA在耐藥機(jī)制探索中的應(yīng)用：
ctDNA在反映靶向治療獲得性耐藥中具有天然優(yōu)勢(shì)辅搬，通過(guò)高靈敏度方法追蹤ctDNA變異情況，進(jìn)而繪制腫瘤獲得性耐藥基因變化演進(jìn)圖譜有助于揭示耐藥新機(jī)制脖旱，發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)伞辛；在發(fā)現(xiàn)特定亞克隆與耐藥關(guān)聯(lián)性的基礎(chǔ)上，深入分析耐藥克隆亞群并探究其分子機(jī)制夯缺，可為逆轉(zhuǎn)獲得性耐藥提供充分的轉(zhuǎn)化依據(jù)蚤氏。因此，ctDNA是一種非常理想的耐藥機(jī)制探索切入點(diǎn)踊兜。需要注意的是竿滨，目前此領(lǐng)域的研究正處于起步階段，還不足以引入臨床實(shí)踐。
2．CTC在耐藥機(jī)制探索中的應(yīng)用：
CTC本身作為腫瘤轉(zhuǎn)移/復(fù)發(fā)的"種子"于游，其展現(xiàn)出的干細(xì)胞樣特征毁葱、上皮－間充質(zhì)轉(zhuǎn)化特征、以及極強(qiáng)的耐受能力都提示其是腫瘤演進(jìn)過(guò)程中耐受治療的生力軍與基石贰剥。已有研究證實(shí)通過(guò)分析CTC基因譜可揭示化療耐受的具體機(jī)制倾剿，并藉此逆轉(zhuǎn)耐藥。但是目前此領(lǐng)域研究仍局限于極小部分的患者蚌成，對(duì)腫瘤的異質(zhì)性與復(fù)雜性考慮并不充分前痘，廣泛性仍有待驗(yàn)證。
液體活檢應(yīng)用范圍：
共識(shí)4推薦液體活檢應(yīng)用于無(wú)法獲取組織標(biāo)本的患者担忧。
共識(shí)5ctDNA檢測(cè)可應(yīng)用于指導(dǎo)肺癌EGFR靶向藥物選擇與伴隨診斷芹缔，ctDNA可能用于療效監(jiān)測(cè)、早期輔助診斷及腫瘤進(jìn)展與不良預(yù)后早期預(yù)警瓶盛，但現(xiàn)階段僅限于科研探索最欠。
共識(shí)6CTC檢測(cè)可用于轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌、乳腺癌與前列腺癌的進(jìn)展/不良預(yù)后早期預(yù)警惩猫，但其指導(dǎo)用藥芝硬、療效監(jiān)測(cè)、靶向藥物伴隨診斷及早期輔助診斷作用現(xiàn)階段僅限于科研探索轧房。
第二部分 液體活檢的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)踐
一吵取、實(shí)驗(yàn)室的總體要求
(一)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求
液體活檢實(shí)驗(yàn)室對(duì)于場(chǎng)地的空間、環(huán)境(溫度锯厢、濕度皮官、電壓、水質(zhì))和分區(qū)有嚴(yán)格要求实辑。建議根據(jù)開(kāi)展項(xiàng)目預(yù)留出儀器和輔助設(shè)備的裝載空間捺氢，以及操作和數(shù)據(jù)處理的工作空間。儀器不可直接安裝于空調(diào)下方和陽(yáng)光直射處剪撬，四周應(yīng)留出適當(dāng)空間便于日常操作摄乒、定期維護(hù)保養(yǎng)和檢修。實(shí)驗(yàn)室溫濕度等環(huán)境因素應(yīng)嚴(yán)格參照廠商建議的最適工作條件設(shè)定残黑，以保證儀器正常運(yùn)行馍佑。為保證儀器檢測(cè)性能的穩(wěn)定和可靠，建議配備穩(wěn)壓的連續(xù)不間斷電源梨水。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)實(shí)際用途拭荤，制定適宜的水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，定期質(zhì)檢疫诽。
涉及核酸檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室舅世，各工作區(qū)空氣及人員流向需嚴(yán)格參照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》配置旦委，工作中有嚴(yán)格避免污染的措施：
(1)前處理和建庫(kù)時(shí)，建議避免低濃度標(biāo)本與高濃度標(biāo)本分開(kāi)雏亚，如胸腔積液缨硝、腹腔積液標(biāo)本與血液、腦脊液和尿液標(biāo)本分開(kāi)罢低，避免標(biāo)本間的交叉污染查辩；
(2)擴(kuò)增前后的操作步驟分開(kāi)，避免擴(kuò)增產(chǎn)物污染非擴(kuò)增區(qū)网持；
(3)影響檢測(cè)結(jié)果的特異處理步驟應(yīng)獨(dú)立分區(qū)宜岛。樣品制備區(qū)及其他分區(qū)需要時(shí)應(yīng)配備通風(fēng)柜或超凈臺(tái)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配置固定和移動(dòng)紫外線燈翎碑，波長(zhǎng)為254 nm，照射時(shí)離實(shí)驗(yàn)臺(tái)的高度一般為60～90 cm之斯。
涉及細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)日杈，操作人員必須更換、穿戴好工作服佑刷、鞋莉擒、帽和口罩方能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。有關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)的操作均在超凈臺(tái)上完成瘫絮，嚴(yán)格按無(wú)菌程序操作涨冀，所有進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室的人員都必須遵守實(shí)驗(yàn)室有關(guān)的規(guī)章制度。
(二)實(shí)驗(yàn)室安全要求
依據(jù)《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)－臨床實(shí)驗(yàn)室安全準(zhǔn)則》麦萤、《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》和《危險(xiǎn)化學(xué)品安全管理?xiàng)l例》等相關(guān)文件鹿鳖，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定適當(dāng)?shù)陌踩雷o(hù)措施。實(shí)驗(yàn)室需安裝安全沖淋設(shè)施和洗眼器壮莹。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的化學(xué)危險(xiǎn)品應(yīng)貼有成分標(biāo)簽翅帜，按說(shuō)明要求分類儲(chǔ)存、雙人雙鎖命满。依據(jù)《醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢棄物管理辦法》涝滴，結(jié)合實(shí)際情況，對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的固體胶台、液體危險(xiǎn)廢棄物的收集歼疮、存放和處理原則。建議實(shí)驗(yàn)室責(zé)任人定期組織實(shí)施安全評(píng)估诈唬。
(三)人員要求和資質(zhì)
實(shí)驗(yàn)室管理者應(yīng)監(jiān)督液體活檢項(xiàng)目的順利實(shí)施和開(kāi)展韩脏，為臨床提供精準(zhǔn)的個(gè)體化醫(yī)療服務(wù)，并確保實(shí)驗(yàn)室設(shè)備設(shè)施的完善铸磅、分區(qū)環(huán)境和生物安全符合相關(guān)法規(guī)和條例骤素，同時(shí)指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室人員的規(guī)范化流程培訓(xùn)和教育匙睹。
建議開(kāi)展液體活檢項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室根據(jù)需求配備具有臨床檢驗(yàn)、臨床腫瘤學(xué)济竹、遺傳學(xué)痕檬、分子生物學(xué)、及生物信息分析學(xué)科背景的多類跨學(xué)科的人員送浊。實(shí)驗(yàn)操作人員需熟練掌握分子生物學(xué)理論與技術(shù)梦谜、經(jīng)技術(shù)相關(guān)的理論和操作實(shí)踐培訓(xùn)，通過(guò)技能考核袭景，獲得上崗資質(zhì)后才能正式上崗唁桩，在崗期間仍需定期培訓(xùn)和考核。特殊技術(shù)人員(如CTC形態(tài)學(xué)觀察人員等)在崗期間除定期個(gè)人培訓(xùn)和考核耸棒，還需完成人員間比對(duì)考核荒澡。初學(xué)人員建議在有經(jīng)驗(yàn)人員的指導(dǎo)下完成操作。生物信息分析人員應(yīng)兼具生物信息學(xué)与殃、分子生物學(xué)和(或)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)背景单山。報(bào)告簽發(fā)需由獲得中級(jí)及以上職稱，具備分子生物學(xué)幅疼、遺傳學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)等多種專業(yè)背景米奸，從事腫瘤液體活檢相關(guān)工作2年及以上，經(jīng)培訓(xùn)合格的本單位執(zhí)業(yè)醫(yī)師或者授權(quán)簽字人(高級(jí)職稱或醫(yī)學(xué)博士學(xué)位)執(zhí)行爽篷。
(四)規(guī)范化文件
1．實(shí)驗(yàn)室必須根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理體系與法規(guī)要求撰寫規(guī)范化文件悴晰。實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化文件如表3所示。
表3?實(shí)驗(yàn)室規(guī)范文件列表
2．液體活檢實(shí)驗(yàn)方法的執(zhí)行：實(shí)驗(yàn)室主任需要確保液體活檢實(shí)驗(yàn)方法在開(kāi)展前完成檢測(cè)性能確立與臨床應(yīng)用評(píng)估逐工、建立完善的質(zhì)量控制體系铡溪、編寫從標(biāo)本采集到結(jié)果解釋全過(guò)程的規(guī)范化操作規(guī)程并且簽字許可新的液體活檢實(shí)驗(yàn)方法認(rèn)證報(bào)告以及執(zhí)行。
二泪喊、體液標(biāo)本選擇佃却、采集和預(yù)處理
(一)體液標(biāo)本選擇一般規(guī)律
在臨床實(shí)踐過(guò)程中，應(yīng)綜合考慮到患者病灶累及部位窘俺、轉(zhuǎn)移情況的復(fù)雜性饲帅、不同體液標(biāo)本的特征，優(yōu)先選擇液體活檢靶標(biāo)最易檢出部位標(biāo)本(例如廣泛腹腔/盆腔轉(zhuǎn)移患者可優(yōu)選腹水瘤泪；中樞轉(zhuǎn)移性腫瘤可優(yōu)選腦脊液)灶泵；針對(duì)難以判斷的患者，建議聯(lián)合多種體液標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果对途，為臨床勾勒腫瘤演化的全貌赦邻，提供多維的腫瘤患者診療的圖譜。體液標(biāo)本選擇一般規(guī)律如表4所示：
表4?體液標(biāo)本選擇一般規(guī)律
液體活檢實(shí)驗(yàn)室建立要求：
共識(shí)7臨床液體活檢實(shí)驗(yàn)室必須遵循相關(guān)法規(guī)实檀，有嚴(yán)格避免污染的措施并且定期核查評(píng)估惶洲。
共識(shí)8建議開(kāi)展液體活檢項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室根據(jù)需求配備多類跨學(xué)科人員按声。
共識(shí)9報(bào)告的審核和發(fā)布須由從事液體活檢相關(guān)工作2年及以上、經(jīng)培訓(xùn)合格的本單位執(zhí)業(yè)醫(yī)師或者授權(quán)簽字人(高級(jí)職稱或醫(yī)學(xué)博士學(xué)位)執(zhí)行恬吕。
(二)標(biāo)本的采集和預(yù)處理
體液中存在較強(qiáng)的背景干擾签则，加之液體活檢的信息源極其微量，易在分析過(guò)程中出現(xiàn)偏差铐料，因此液體活檢對(duì)分析全過(guò)程的要求相對(duì)較高渐裂，尤其在標(biāo)本預(yù)處理步驟需避免背景細(xì)胞或核酸ctDNA和CTC的稀釋作用，同時(shí)進(jìn)一步防止對(duì)CTC的破壞和對(duì)ctDNA片段化以及降解钠惩，導(dǎo)致最終假陰性結(jié)果柒凉。
1．體液ctDNA：
臨床實(shí)驗(yàn)室能實(shí)現(xiàn)多種不同體液標(biāo)本內(nèi)ctDNA的檢測(cè)，本應(yīng)用建議僅概述常見(jiàn)體液標(biāo)本處理的基本原則篓跛，對(duì)于其他體液標(biāo)本的處理建議參考權(quán)威文獻(xiàn)或抽提試劑盒的說(shuō)明膝捞。
(1)血漿：目前研究表明最佳的標(biāo)本類型為血漿，且最好采用含細(xì)胞穩(wěn)定劑的抗凝管或者EDTA抗凝管采集血液愧沟。常規(guī)采集流程如下：肘部采集靜脈血10 ml(采血量視具體情況而定蔬咬，建議不少于10 ml，避免因標(biāo)本量不足導(dǎo)致假陰性結(jié)果)央渣，避免凝血计盒、溶血及空腹?fàn)顟B(tài)渴频。若選擇EDTA－K2抗凝采血管芽丹，采血后輕柔顛倒8～10次，采集完畢即刻送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室卜朗，建議冰浴送檢拔第，防止白細(xì)胞裂解。建議2 h內(nèi)進(jìn)行兩步離心完成血漿分離场钉，分離后的血漿可直接進(jìn)行抽提或保存于－80 ℃冰箱直至抽提蚊俺；若選擇Streck采血管(特殊抗凝劑和保護(hù)劑)，采血后輕柔顛倒8～10次逛万，采集完畢無(wú)需即刻送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室(可室溫保存3～5 d)泳猬，常溫轉(zhuǎn)運(yùn)保存即可。建議在7 d內(nèi)進(jìn)行兩步離心完成血漿分離宇植，分離后的血漿可直接進(jìn)行抽提或保存于－80 ℃冰箱直至抽提得封。兩步離心法：在低溫(4 ℃)條件下，先以1 900×g轉(zhuǎn)速將標(biāo)本離心10 min指郁，吸取上清忙上，再以16 000×g轉(zhuǎn)速離心10 min，最終獲得無(wú)細(xì)胞的血漿標(biāo)本闲坎。
(2)胸腔積液疫粥、腹腔積液：臨床醫(yī)師通過(guò)胸膜腔或腹腔穿刺術(shù)茬斧，采集胸腔積液或腹腔積液20 ml置于預(yù)添加EDTA抗凝劑的無(wú)菌容器中(采集量視具體情況而定)，采集完畢應(yīng)即刻送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室梗逮，常溫保存项秉。建議2 h內(nèi)完成兩步離心分離上清(同血漿分離步驟)，分離后的上清可直接進(jìn)行抽提或保存于－80 ℃冰箱直至抽提库糠。
(3)尿液：留取隨機(jī)中段尿20 ml置于無(wú)菌容器(采集量視具體情況而定)伙狐，采集完畢應(yīng)即刻送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，常溫保存瞬欧。建議2 h內(nèi)完成兩步離心分離上清(同血漿分離步驟)贷屎，分離后的上清可直接進(jìn)行抽提或保存于－80 ℃冰箱直至抽提。
(4)腦脊液：臨床醫(yī)生通過(guò)腰椎穿刺術(shù)艘虎，采集腦脊液2～5 ml置于無(wú)菌容器(采集量視具體情況而定)唉侄，采集完畢應(yīng)即刻送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，常溫保存野建。建議2 h內(nèi)完成兩步離心分離上清(同血漿分離步驟)属划，分離后的上清可直接進(jìn)行抽提或保存于－80 ℃冰箱直至抽提。
(5)唾液：患者在標(biāo)本采集前1 h內(nèi)應(yīng)禁食候生、禁飲同眯、禁煙以及禁止口腔清理程序。采集早晨9～10點(diǎn)的唾液標(biāo)本置于無(wú)菌容器唯鸭，采集完畢應(yīng)即刻送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室须蜗，常溫保存。建議2 h內(nèi)完成低溫2 600×g離心15 min并分離上清目溉，分離后的上清可直接進(jìn)行抽提或保存于－80 ℃冰箱直至抽提明肮。
2．外周血CTC：
肘部采集靜脈血10 ml(采血量視具體情況而定，建議不少于10 ml缭付，避免因標(biāo)本量不足導(dǎo)致假陰性結(jié)果)柿估，避免凝血或溶血。采血完畢應(yīng)即刻送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室陷猫，常溫保存秫舌。若選擇EDTA－K2抗凝采血管，建議24 h內(nèi)完成檢測(cè)绣檬；若選擇專用細(xì)胞保存采血管足陨，建議72 h內(nèi)完成檢測(cè)。
三河咽、液體活檢技術(shù)的優(yōu)化和驗(yàn)證
在正式應(yīng)用于臨床前钠右，應(yīng)對(duì)檢測(cè)技術(shù)或?qū)嵤┝鞒讨鸩絻?yōu)化，并完成相關(guān)性能驗(yàn)證或確認(rèn)忘蟹。各實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行性能驗(yàn)證時(shí)飒房，可結(jié)合自身特點(diǎn)與檢測(cè)項(xiàng)目需求搁凸，在本章節(jié)設(shè)定框架下制定合適的性能驗(yàn)證流程。若優(yōu)化實(shí)施要素狠毯，建議對(duì)檢測(cè)技術(shù)或?qū)嵤┝鞒踢M(jìn)行再驗(yàn)證或確認(rèn)护糖，以保證優(yōu)化后的性能符合檢驗(yàn)和臨床要求。再驗(yàn)證或確認(rèn)的程度和范圍視優(yōu)化的要素和程度而定嚼松。驗(yàn)證或確認(rèn)必須貫穿整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程嫡良。
體液標(biāo)本選擇、采集和預(yù)處理：
共識(shí)10體液標(biāo)本選擇時(shí)應(yīng)綜合考慮腫瘤來(lái)源献酗、腫瘤部位寝受、播散途徑、以及不同體液標(biāo)本的特征罕偎，綜合考慮以期提高檢驗(yàn)效率很澄。
共識(shí)11標(biāo)本預(yù)處理應(yīng)遵循快速、穩(wěn)定的原則颜及，針對(duì)不同標(biāo)本采用不同方案進(jìn)行處理甩苛，盡可能保證待測(cè)物質(zhì)的穩(wěn)定性和濃度，確保檢測(cè)質(zhì)量俏站。
(一)基于PCR方法(包括ARMS和dPCR)ctDNA檢測(cè)體系的性能驗(yàn)證
分析性能驗(yàn)證項(xiàng)目應(yīng)包括特異性讯蒲、敏感度、測(cè)定下限肄扎、重復(fù)性墨林、準(zhǔn)確性、抗干擾能力六項(xiàng)反浓。驗(yàn)證具體內(nèi)容應(yīng)遵循CLSI相關(guān)文件指示萌丈，具體參考如表5所示赞哗。
表5?ARMS定性檢測(cè)方法性能驗(yàn)證參考文件
(二)基于NGS方法ctDNA檢測(cè)體系的性能確認(rèn)
NGS方法性能確認(rèn)須包含陽(yáng)性預(yù)期值(Positive Predictive Value, PPV)雷则、陽(yáng)性百分比一致性、重復(fù)性肪笋、可報(bào)告范圍/參考范圍月劈、最低檢出限、抗干擾性能藤乙、臨床有效性猜揪、及生信分析流程確認(rèn)。確認(rèn)具體內(nèi)容應(yīng)遵循CAP相關(guān)共識(shí)文獻(xiàn)指示坛梁，具體參考如表6所示而姐。
表6?NGS檢測(cè)方法性能驗(yàn)證參考文獻(xiàn)
對(duì)已完成性能確認(rèn)的檢測(cè)體系進(jìn)行改進(jìn)或改動(dòng)時(shí)，僅需依據(jù)體系改變部分作出相應(yīng)驗(yàn)證即可划咐，無(wú)需重新進(jìn)行完整系統(tǒng)驗(yàn)證拴念。
(三) CTC檢測(cè)體系的性能驗(yàn)證
CTC檢測(cè)體系應(yīng)依據(jù)相應(yīng)EP文件對(duì)其精密度钧萍、正確度、可報(bào)告范圍政鼠、參考范圍進(jìn)行性能驗(yàn)證风瘦，具體參考如表7所示。
表7?CTC檢測(cè)體系性能驗(yàn)證參考文件
液體活檢技術(shù)優(yōu)化和驗(yàn)證：
共識(shí)12商品化ARMS方法的檢測(cè)體系應(yīng)當(dāng)遵循相關(guān)EP文件驗(yàn)證其敏感度公般、特異性万搔、測(cè)定下限、重復(fù)性官帘、準(zhǔn)確性瞬雹、以及抗干擾能力。
共識(shí)13基于NGS方法檢測(cè)體系須行陽(yáng)性預(yù)期值刽虹、陽(yáng)性百分比一致性挖炬、重復(fù)性、可報(bào)告范圍/參考范圍状婶、最低檢出限意敛、抗干擾性能、臨床有效性膛虫、及生信分析流程確認(rèn)草姻；如對(duì)已完成性能確認(rèn)的檢測(cè)體系進(jìn)行改進(jìn)，僅需依據(jù)體系改變部分作出相應(yīng)驗(yàn)證即可稍刀，無(wú)需重新進(jìn)行系統(tǒng)驗(yàn)證撩独。
共識(shí)14CTC檢測(cè)體系應(yīng)當(dāng)遵循相關(guān)EP文件驗(yàn)證其精密度、準(zhǔn)確度账月、可報(bào)告范圍综膀、參考區(qū)間；如基于其他方法的CTC檢測(cè)體系則須在前述基礎(chǔ)上再行檢出限局齿、干擾及攜帶污染驗(yàn)證剧劝。
四、質(zhì)量管理
實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系分為質(zhì)量保證和質(zhì)量控制抓歼，需貫穿液體活檢的整個(gè)實(shí)施流程讥此，即從分析前、分析中到分析后谣妻。完善的質(zhì)量管理和控制用于確保檢測(cè)系統(tǒng)穩(wěn)定性和結(jié)果可靠性萄喳，有效避免誤差，為臨床腫瘤診療提供更為準(zhǔn)確的證據(jù)蹋半。
(一)質(zhì)控品的選擇
質(zhì)控品選擇在質(zhì)量管理中具有關(guān)鍵性作用他巨。應(yīng)按照定性或定量的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的質(zhì)控品，以期達(dá)到理想的質(zhì)量管理質(zhì)量。質(zhì)控品選擇標(biāo)準(zhǔn)如表8所示染突。
表8?液體活檢質(zhì)控品選擇標(biāo)準(zhǔn)
(二)分析前質(zhì)量管理
關(guān)注患者狀態(tài)匪傍，標(biāo)本采集時(shí)的患者狀態(tài)將影響檢測(cè)結(jié)果，如基礎(chǔ)狀態(tài)觉痛、治療方案役衡、腫瘤轉(zhuǎn)移情況，因此選擇適當(dāng)?shù)牟杉瘯r(shí)間點(diǎn)極為重要薪棒。確笔中患者在標(biāo)本采集前兩周前未進(jìn)行化療或放療，以避免假陰性的結(jié)果俐芯；對(duì)存在嚴(yán)重炎癥的腫瘤患者棵介，建議在白細(xì)胞恢復(fù)正常水平后再行檢測(cè)，以避免假陰性結(jié)果吧史；推薦早晨空腹采取靜脈血邮辽，以防止油脂影響DNA提取和檢測(cè)。標(biāo)本采集贸营、運(yùn)輸和預(yù)處理：嚴(yán)格按照液體活檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序(standardoperating procedure, SOP)實(shí)施吨述，如有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)與臨床聯(lián)系和反饋。避免標(biāo)本存在溶血钞脂、凝塊和脂血等情況揣云，以保證后續(xù)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確和可靠。
(三)分析中質(zhì)量管理
抽提模板質(zhì)控：凡下游涉及PCR或測(cè)序等方法冰啃，建議采用多種方法對(duì)模板核酸的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估邓夕，包括純度、濃度和完整性阎毅，以確保滿足檢測(cè)平臺(tái)的最低要求紊馏。
1．室內(nèi)質(zhì)控：
為監(jiān)測(cè)分析過(guò)程中的每個(gè)步驟奋献，要求質(zhì)控品與標(biāo)本的操作步驟基本相一致烤低。建議優(yōu)選商品化的質(zhì)控品蒋畜，若缺乏商品化產(chǎn)品悦荒，實(shí)驗(yàn)室可嘗試自建驰徊。質(zhì)控品的選擇和構(gòu)建首先需注意與臨床患者標(biāo)本的模擬度垛贤，同時(shí)保證組份穩(wěn)定且均一真朗，數(shù)量充足雌团，便于長(zhǎng)時(shí)間分析：(1)質(zhì)控品配制：建議由經(jīng)驗(yàn)豐富的專業(yè)人員在專門區(qū)域進(jìn)行構(gòu)建燃领、配制和分裝，切勿在臨床標(biāo)本操作區(qū)域锦援。自建質(zhì)控品要求采用高靈敏的檢測(cè)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)猛蔽；
(2)質(zhì)控要求：對(duì)于定性檢測(cè)項(xiàng)目，建議運(yùn)行弱陽(yáng)性、陰性質(zhì)控品以及空白對(duì)照曼库；對(duì)于定量檢測(cè)項(xiàng)目区岗，建議運(yùn)行定值、陰性質(zhì)控品以及空白對(duì)照毁枯〈鹊蓿考慮到每個(gè)檢測(cè)平臺(tái)的實(shí)際成本和臨床可操作性，實(shí)驗(yàn)室可自行規(guī)定質(zhì)控頻率和質(zhì)控覆蓋位點(diǎn)种玛；
(3)質(zhì)控規(guī)則：無(wú)論是商品化或自建質(zhì)控品藐鹤，實(shí)驗(yàn)室需建立質(zhì)控的可接受標(biāo)準(zhǔn)。定量檢測(cè)項(xiàng)目建議使用質(zhì)控圖和設(shè)定的質(zhì)控規(guī)則赂韵。
2．質(zhì)間質(zhì)評(píng)：
(1)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(extemal quality assessment, EQA)：通過(guò)參加國(guó)內(nèi)外相關(guān)的EQA評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力娱节，分析和總結(jié)能力比對(duì)的結(jié)果，關(guān)注評(píng)價(jià)結(jié)果的趨勢(shì)或改變祭示；
(2)其他評(píng)價(jià)方式：對(duì)于無(wú)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)計(jì)劃的檢測(cè)項(xiàng)目肄满，建議與外部實(shí)驗(yàn)室相同或相近的方法比對(duì)。
3．NGS檢測(cè)平臺(tái)的重要參數(shù)：
(1)文庫(kù)質(zhì)量：構(gòu)建的文庫(kù)在上機(jī)測(cè)序前需進(jìn)行質(zhì)量分析质涛，應(yīng)設(shè)定每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的文庫(kù)質(zhì)量要求稠歉，明確接受或拒絕的標(biāo)準(zhǔn)；
(2)測(cè)序芯片：測(cè)序時(shí)根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本量和質(zhì)量要求選擇合適的芯片汇陆，以保證測(cè)序質(zhì)量和靶區(qū)覆蓋深度轧抗；
(3)生物信息分析質(zhì)量指標(biāo)：?jiǎn)螇A基質(zhì)量、堿基質(zhì)量中位數(shù)瞬测、重復(fù)reads百分比横媚、包含接頭序列的reads數(shù)量、回貼reads百分比月趟、目標(biāo)區(qū)域reads百分比灯蝴、目標(biāo)區(qū)域的平均深度、目標(biāo)區(qū)域測(cè)序均一度孝宗。
(四)分析后質(zhì)量管理
分析后質(zhì)量管理涉及多方面因素穷躁，需聯(lián)合生物信息學(xué)、分子生物學(xué)因妇、遺傳學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)背景的多人合作完成報(bào)告簽發(fā)和臨床解釋问潭。
液體活檢質(zhì)量管理：
共識(shí)15質(zhì)量管理體系構(gòu)建應(yīng)嚴(yán)格參照CNAS－CL36：2012文件的要求設(shè)定相應(yīng)質(zhì)量控制程序并驗(yàn)證，以達(dá)到預(yù)期的結(jié)果質(zhì)量婚被。
共識(shí)16質(zhì)控品應(yīng)按實(shí)際需求綜合考量狡忙，選擇最合適的質(zhì)控品。
共識(shí)17質(zhì)控管理實(shí)施應(yīng)貫穿檢測(cè)整個(gè)過(guò)程(分析前址芯、分析中灾茁、分析后)窜觉。
五、數(shù)據(jù)分析與檢測(cè)報(bào)告注釋
(一)液體活檢報(bào)告注釋
依據(jù)檢測(cè)靶標(biāo)和技術(shù)的不同北专，液體活檢的報(bào)告內(nèi)容也有所差異禀挫，但原則上檢測(cè)報(bào)告一般應(yīng)體現(xiàn)以下內(nèi)容：
(1)檢測(cè)名稱，如xx腫瘤xx基因變異檢測(cè)報(bào)告拓颓；xx腫瘤CTC檢測(cè)報(bào)告等语婴；
(2)患者基本信息：姓名、性別驶睦、年齡腻格、住院號(hào)、送檢科室及醫(yī)生等啥繁；
(3)標(biāo)本基本信息：標(biāo)本類型(血漿菜职、胸腹水、腦脊液旗闽、尿液等)酬核、標(biāo)本性狀(是否存在凝塊、溶血适室、脂血等)嫡意、采樣時(shí)間、收樣時(shí)間捣辆、送檢日期和報(bào)告日期蔬螟；
(4)病理診斷信息：腫瘤組織類型、TNM分期等汽畴；
(5)檢測(cè)方法和平臺(tái)以及其重要的參數(shù)說(shuō)明旧巾；
(6)檢測(cè)結(jié)果和cut－off值(基于檢測(cè)技術(shù)的性能或臨床建議)；
(7)臨床意義解讀：臨床意義解讀應(yīng)客觀平實(shí)地描述忍些，對(duì)于疾病相關(guān)性只描述既往研究中的療效或預(yù)測(cè)鲁猩，不能出現(xiàn)使用何種治療手段或策略的語(yǔ)言，同時(shí)報(bào)告中應(yīng)附上相關(guān)的權(quán)威指南罢坝、參考文獻(xiàn)廓握、專業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析工具網(wǎng)址；
(8)備注：若檢測(cè)項(xiàng)目嘁酿、方法隙券、平臺(tái)和結(jié)果等存在局限性，建議在報(bào)告中明確指出闹司，避免不必要的診療誤差娱仔；
(9)若檢測(cè)失敗，應(yīng)闡述檢測(cè)失敗的原因开仰；
(10)最終報(bào)告應(yīng)由報(bào)告檢測(cè)者拟枚、制定審核者和報(bào)告簽發(fā)人聯(lián)合審定簽發(fā)薪铜。
(二)檢測(cè)報(bào)告解讀
液體活檢的報(bào)告解讀建議實(shí)驗(yàn)室人員和臨床醫(yī)生共同完成众弓，報(bào)告解釋應(yīng)綜合考慮：
(1)患者基本狀態(tài)：標(biāo)本采集前的治療情況恩溅、標(biāo)本采集與治療時(shí)間間隔、是否存在嚴(yán)重炎癥等谓娃；
(2)疾病基本狀態(tài)：分子病理結(jié)果脚乡、腫瘤組織類型和分期、進(jìn)展情況等滨达；
(3)檢測(cè)方法和平臺(tái)的特征奶稠，包括檢測(cè)敏感度和特異性以及檢測(cè)過(guò)程中的影響因素等；(4)檢測(cè)結(jié)果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)捡遍，如非典型腫瘤細(xì)胞和循環(huán)腫瘤微栓的判斷和報(bào)告锌订；數(shù)字PCR檢測(cè)過(guò)程中陽(yáng)性液滴的設(shè)門和空白限的設(shè)定；生物信息分析過(guò)程中對(duì)特殊標(biāo)本測(cè)序數(shù)據(jù)的過(guò)濾和軟件參數(shù)的調(diào)整画株。
數(shù)據(jù)分析與檢測(cè)報(bào)告注釋：
共識(shí)18檢測(cè)報(bào)告中除了患者與標(biāo)本基本信息外辆飘，還應(yīng)納入檢測(cè)體系信息與臨床意義。
共識(shí)19液體活檢的報(bào)告解讀建議實(shí)驗(yàn)室人員和臨床醫(yī)生共同完成谓传，報(bào)告解釋應(yīng)綜合考慮多方面信息蜈项。
展 望
液體活檢技術(shù)正以前所未有的速度向前發(fā)展。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷革新续挟，液體活檢檢測(cè)的靈敏度與特異性也不斷提高紧卒，使其成為未來(lái)對(duì)抗腫瘤的一大"利器"。未來(lái)液體活檢發(fā)展將集中于三個(gè)方面：
(1)新臨床應(yīng)用拓展诗祸，例如CTC體外培養(yǎng)聯(lián)合藥敏篩選個(gè)體化治療藥物跑芳、獲得的CTC進(jìn)一步用于各種方法(如ARMS、FISH直颅、NGS等)檢測(cè)腫瘤基因突變聋亡、ctDNA克隆進(jìn)化分析揭示化療獲得性耐藥機(jī)制、以及液體活檢技術(shù)指導(dǎo)生物免疫治療际乘；
(2)新的檢測(cè)靶標(biāo)發(fā)掘坡倔，外泌體、血小板以及循環(huán)非編碼RNA已經(jīng)展現(xiàn)出巨大臨床應(yīng)用潛能脖含，有待更加深入系統(tǒng)的研究證實(shí)其價(jià)值罪塔；
(3)新檢測(cè)技術(shù)開(kāi)發(fā)與轉(zhuǎn)化應(yīng)用，包括單細(xì)胞測(cè)序养葵、質(zhì)譜技術(shù)征堪、微流控芯片及多普勒光譜等尖端技術(shù)正逐步走出基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)室关拒，依賴這些技術(shù)將切實(shí)提高液體活檢的質(zhì)量佃蚜。
我們應(yīng)從檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的角度出發(fā)庸娱，立足于"準(zhǔn)確性"與"臨床有效性"這兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，對(duì)液體活檢項(xiàng)目的檢驗(yàn)性能與臨床意義進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)估谐算，為指導(dǎo)臨床精準(zhǔn)診療提供充分的理論基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化依據(jù)熟尉。我們需要不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，不斷提高認(rèn)識(shí)洲脂，進(jìn)一步加強(qiáng)規(guī)范斤儿，提高檢測(cè)質(zhì)量，積極推進(jìn)液體活檢的發(fā)展恐锦，助力腫瘤精準(zhǔn)診療往果。
來(lái)源：中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志?
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