十五征候、結(jié)核病原（分枝桿菌、抗酸染色+家夺、卡介苗、結(jié)核菌素“OT伐弹、PPD”試驗(yàn)--遲發(fā)超敏反應(yīng)）

結(jié)核桿菌：分枝桿菌屬內(nèi)-主要致病菌（結(jié)核分枝桿菌拉馋、牛分枝桿菌）
直or稍彎曲細(xì)長(zhǎng)桿菌，呈V惨好、Y形or條索狀煌茴、短鏈狀排列，抗酸染色陽(yáng)性
生長(zhǎng)很緩慢日川！培養(yǎng)8d↑~8weeks
專性需氧（菌膜生長(zhǎng)）蔓腐、營(yíng)養(yǎng)要求較高。抵抗力較強(qiáng)
慢性感染逗鸣、引起肉芽腫
診斷依據(jù)：

1. 臨床表現(xiàn)
2. X線檢查
3. 結(jié)核菌痰涂片
4. 結(jié)核菌素試驗(yàn)

涂片陽(yáng)性--病人是重要傳染源
結(jié)核感染or接種卡介苗（減毒活疫苗）→產(chǎn)生特異性免疫（感染免疫合住、又稱有菌免疫）
機(jī)體抵抗依賴“細(xì)胞免疫”，伴隨“遲發(fā)超敏反應(yīng)”→結(jié)核菌素試驗(yàn)：用結(jié)核菌素測(cè)定能否引起皮膚遲發(fā)超敏反應(yīng)撒璧。
（結(jié)核菌素）簡(jiǎn)稱“結(jié)素”透葛，是通稱：舊結(jié)核菌素OT、結(jié)核菌素純蛋白衍生物PPD卿樱。
用于接種質(zhì)量考核僚害、篩選預(yù)防對(duì)象、感染率調(diào)查、輔助診斷萨蚕。
試驗(yàn)方法：前臂掌側(cè)中央靶草、0.1 ml 結(jié)核菌素溶液、5~6 mm皮丘岳遥、72 h檢查奕翔、50 IU/ml制劑硬結(jié)直徑5 mm↑為+

• 陰性(-)意義：①未受結(jié)核菌感染②已感染但處變態(tài)反應(yīng)前期③免疫系統(tǒng)受干擾④結(jié)核性腦膜炎和粟粒性肺結(jié)核等使“免疫功能低下”。
• 陽(yáng)性(+)意義：①結(jié)核病患者②結(jié)核菌感染但未患埠迫亍③卡介苗接種④非結(jié)核分枝桿菌感染交叉反應(yīng)

十六派继、麻風(fēng)病原（分枝桿菌、胞漿泡沫狀--麻風(fēng)細(xì)胞捻艳、抗酸染色--改良Fite染色法）

麻風(fēng)分枝桿菌：多形性驾窟、抗酸性、聚簇性认轨。
典型胞內(nèi)菌绅络、麻風(fēng)細(xì)胞：胞漿泡沫狀
體外培養(yǎng)失敗
診斷應(yīng)及時(shí)&慎重。皮膚切刮法涂片查菌嘁字、組織病理學(xué)檢查
涂片染色顯微鏡檢查：鼻黏膜or皮損處取材恩急、抗酸染色（改良的Fite染色法）

十七、空腸彎曲菌CJ拳锚、GBS相關(guān)假栓、人畜共患、G-

CJ夏秋季高發(fā)霍掺、旅行者腹瀉主要病因之一
學(xué)齡前兒童發(fā)病高匾荆，與吉蘭-巴雷綜合征GBS密切相關(guān)，人畜共患病杆烁。

1. 標(biāo)本采集
   糞便牙丽、肛拭，保存于運(yùn)送培養(yǎng)基中兔魂，4 h內(nèi)送檢or保存液-20℃↓
2. 分離培養(yǎng)
   采樣棉拭子→空彎選擇性血平皿→42℃微需氧（85%N2烤芦、10%CO2、5%O2析校、燭缸法）2~3 d构罗。
   可疑菌落：不溶血、灰色智玻、扁平遂唧、濕潤(rùn)、有光澤吊奢、像水滴盖彭、1_{2mm、邊緣完整發(fā)亮）陰性繼續(xù)7}10 d
3. 病原鑒定
   氧化酶&過(guò)氧化氫試驗(yàn)+→革蘭染色：G-、S形召边、螺旋形铺呵、紡錘形→初步確定
   以下試驗(yàn)5%微需氧培養(yǎng)
4. 42℃&25℃生長(zhǎng)試驗(yàn)：接種2管布氏桿菌肉湯、42/25℃--48 h隧熙、
   （42℃生長(zhǎng)片挂、25℃不長(zhǎng)）
5. H2S產(chǎn)生試驗(yàn)≌甓ⅲ空彎宴卖、結(jié)腸彎曲菌+；胎兒彎曲菌-
6. 馬尿酸鹽水解試驗(yàn)：空彎+邻悬、結(jié)腸彎曲菌-。
7. 深入鑒定
   PCR證實(shí)

十八随闽、幽門(mén)螺桿菌HP（大量高活性尿素酶父丰、cagA基因陽(yáng)性）

螺桿菌屬（從彎曲菌分出來(lái)）。急慢性胃炎掘宪、消化性潰瘍最主要病因蛾扇；胃癌、胃淋巴瘤 密切相關(guān)魏滚。

1. 標(biāo)本采集
   胃鏡镀首、胃黏膜活檢組織、保存液（100g/L蔗糖鼠次、500ml/L小牛血清）0_8℃12 d更哄；-20℃1~2 m；-80℃ 1 y腥寇。冷凍后不可凍融成翩，干冰轉(zhuǎn)運(yùn)。
2. 鏡檢
   涂片or病理組織S-W銀染色赦役，敏感性&特異性低麻敌。
3. 病原分離
   布氏培基or腦心浸液血瓊脂+5%_{10%羊血&馬血、85%N2掂摔、10%CO2术羔、5%O2（orH2）、37℃3}7 d→針尖狀or 1 mm↓半透明菌落
4. 病原鑒定
   HP重要特性：大量高活性尿素酶乙漓。觸酶&氧化酶+级历、快速分解尿素、堿性磷酸酶&γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性簇秒、硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)陰性鱼喉。三糖鐵瓊脂不產(chǎn)H2S。
5. 深入鑒定
   cagPAI右側(cè)末端DNA--分為 Ⅰ~Ⅴ型
   我國(guó)均為cagA基因陽(yáng)性
6. 快速檢測(cè)
   尿素呼吸試驗(yàn)--簡(jiǎn)單快捷，敏感度高扛禽。C13非同位素锋边、可用于兒童孕婦。貴编曼！
7. 抗體檢測(cè) HP IgG變換慢豆巨，多用于流調(diào)

十九、軍團(tuán)菌（G-桿菌掐场、無(wú)莢膜往扔、水解馬尿酸、BCYE-α培養(yǎng)基:焦磷酸鐵&L-半胱氨酸→GVPC(-Cys)選擇性培養(yǎng)基熊户、尿標(biāo)本中Lp抗原）

嗜肺軍團(tuán)菌：G-桿菌萍膛、無(wú)莢膜、無(wú)芽孢嚷堡。不產(chǎn)酸蝗罗、有鞭毛（鍍銀染色法）、能動(dòng)蝌戒。
不易著色串塑、吉姆尼茨染色法or鍍銀染色
分離時(shí)需要"L-半胱氨酸，鐵鹽"促生長(zhǎng)北苟。
水解馬尿酸鹽--特征

1. 采取標(biāo)本
   血液桩匪、痰（60℃加熱2mins）、尿液
   環(huán)境污染調(diào)查：應(yīng)取水樣--空調(diào)冷卻水友鼻、1L傻昙、玻璃、聚乙烯瓶子桃移、使用前洗凈&121℃高壓20mins屋匕。
   水樣中生物殺滅劑？容器中+過(guò)量滅活劑借杰，6~18℃避光隔熱運(yùn)送过吻、濃縮培養(yǎng)時(shí)間＜14 d。
2. 病原分離
   10^5/L可直接接種蔗衡、否則先濃縮纤虽。過(guò)濾、離心→濾出物绞惦、沉積物少量水中懸浮逼纸。
   樣品→3份：none、酸處理（+等量酸緩沖液搖勻济蝉、靜置5±0.5 mins）杰刽、熱處理（50±1℃水中30±2 mins）
   BCYE-α培養(yǎng)基:焦磷酸鐵&L-半胱氨酸
   GVPC培養(yǎng)基（選擇性）在BCYE-α加入甘氨酸菠发、多粘菌素B、萬(wàn)古霉素贺嫂、放線菌酮滓鸠。
   3種標(biāo)本→3個(gè)GVPC平板→平板倒置、潮濕第喳、36±1℃糜俗、2~5%CO2
   10 d后計(jì)數(shù)、3平板上各種不同菌落每種2~3個(gè)在BCYE & BCYE-Cys（no半胱氨酸）傳代曲饱，BCYE生長(zhǎng)&BCYE-Cys不長(zhǎng) 即認(rèn)為軍團(tuán)菌
3. 病原鑒定：免疫熒光方法證實(shí)
4. 尿抗原檢測(cè)：急性期悠抹、恢復(fù)期尿標(biāo)本中Lp抗原。
5. 抗體檢測(cè)應(yīng)用：IFA檢測(cè)血清中抗體扩淀，滴度4倍↑or單份≥1:256

二十楔敌、流感嗜血桿菌(G-球桿菌、有莢膜驻谆！含V梁丘、X因子才生長(zhǎng)、衛(wèi)星現(xiàn)象）

寄生于鼻咽部旺韭、冬季多。3個(gè)月~3歲嬰幼兒易感掏觉、引起腦膜炎占2/3(神經(jīng)后遺癥)区端、小兒肺炎(第2位病原菌)等等各種炎癥。呼吸道傳播澳腹。本菌抵抗力弱织盼、100℃立即死亡、干燥痰48 h酱塔。

1. 采集標(biāo)本
   腦脊液沥邻、血液、胸水中檢出→臨床意義羊娃；耳鼻咽拭子唐全、痰→流行意義
2. 鏡檢：G-球桿菌
3. 病原分離
   巧克力血瓊脂、37℃蕊玷、pH 7.6邮利、5%CO2、含V&X因子培養(yǎng)基（由血紅蛋白提供的X因子（factors X垃帅；血晶素 hemin）和由復(fù)合維生素提供的V因子（NAD））才生長(zhǎng)
   <u>血平板上不溶血</u>延届。
   生長(zhǎng)在血培養(yǎng)基上金葡菌周圍--衛(wèi)星現(xiàn)象
4. 病原鑒定
   裂解馬紅細(xì)胞能力→從溶血性嗜血桿菌中區(qū)分流感嗜血桿菌、從副溶血嗜血桿菌中區(qū)分副流感嗜血桿菌贸诚。
   吲哚試驗(yàn)方庭、尿素反應(yīng)厕吉、鳥(niǎo)氨酸代謝→流感嗜血桿菌分為8個(gè)生物型，大部分ⅠⅡⅢ型(Ⅰ械念、Ⅲ型為主)
   有莢膜的為可分型头朱、不可分型（無(wú)血清型、來(lái)自鼻咽部）
   依據(jù)莢膜多糖抗原不同→<u>a~f 血清型</u>订讼；b型流感嗜血桿菌引起絕大多數(shù)侵襲性嗜血桿菌感染
5. 深入鑒定
   具莢膜菌株都包含“莢膜多糖基因”cap基因簇髓窜、ⅠⅡⅢ部分組成、Ⅱ區(qū)為合成血清型特異性基因欺殿。依據(jù)cap序列設(shè)計(jì)引物寄纵，鑒別流感嗜血桿菌。
   有6種主要外膜蛋白OMP1-6脖苏，重要的毒力因子程拭。外膜蛋白電泳圖譜→菌株分類
6. 抗體檢測(cè)
   保護(hù)性最低抗體水平0.05~0.15μg/ml；發(fā)病早期＞0.15μg/ml具有“否定”診斷意義棍潘，抗體4倍↑--支持診斷

二十一恃鞋、克雷伯桿菌（肺炎桿菌、G-較粗短桿菌亦歉、有較厚莢膜恤浪、多數(shù)有菌毛、K抗原-莢膜腫脹實(shí)驗(yàn)）磚紅色肴楷、膠凍樣痰液

肺炎桿菌水由、G-桿菌、有較厚莢膜赛蔫、呼吸道腸道定殖菌砂客、條件致病菌。老年呵恢、營(yíng)養(yǎng)不良鞠值、慢性酒精中毒、慢性支氣管-肺渗钉、全身衰竭彤恶。占細(xì)菌性肺炎2%、病死率30%鳄橘。

1. 采集標(biāo)本
   主要：痰液-來(lái)自下呼吸道合格標(biāo)本粤剧、也可其他
2. 病原分離
   痰→鹽水洗滌3次→1%胰酶溶液、37℃水中90 mins：均質(zhì)化
   血瓊脂培養(yǎng)基挥唠、麥康凱抵恋，37℃、24 h→血瓊脂上菌落大宝磨、黏液型弧关、光亮盅安、黏稠、可拉絲世囊。
3. 病原鑒定
   選擇性培養(yǎng)基上--發(fā)酵乳糖
   <u>O抗原别瞭、K抗原</u>--用以分型（莢膜腫脹實(shí)驗(yàn)）3、12型
   magA基因--高黏性表型株憾、用作診斷蝙寨。rmpA基因--輔助診斷

二十二、衣原體-細(xì)胞內(nèi)寄生嗤瞎、還有立克次體（G-墙歪、通過(guò)細(xì)胞濾器、McCoy細(xì)胞贝奇、免疫熒光-包涵體\吉姆薩(暗視野顯微鏡觀察)比碘染敏感）

非運(yùn)動(dòng)性細(xì)菌虹菲、有細(xì)胞壁、G-掉瞳、廣泛寄生動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)毕源、僅少數(shù)致病性
無(wú)合成ATP、GTP能力陕习、能量寄生物霎褐、能通過(guò)*細(xì)胞濾器、嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生该镣、原核細(xì)胞型
周期2個(gè)階段：原生小體elementary body感染階段-感染力瘩欺；網(wǎng)狀小體initial body繁殖階段-增殖力
1采取標(biāo)本
眼部、生殖道→拭子→懸浮在抗生素肉湯/細(xì)胞培養(yǎng)基→混合拌牲、離心10 mins→去上清→抗生素溶液稀釋1:2 & 1:20
淋巴膿腫黏性→研磨、懸浮在細(xì)胞培養(yǎng)液歌粥；血凝塊→懸液塌忽；痰、咽喉洗液→含抗生素肉湯失驶。
含冰塊運(yùn)輸培養(yǎng)液--2sP土居、加不同濃度胎牛血清:增加發(fā)現(xiàn)率、維持感染性嬉探。-60℃保存擦耀、4℃融化、研磨乳懸液涩堤、稀釋后接種抗生素培養(yǎng)基
2病原分離
環(huán)乙酰亞胺處理的McCoy細(xì)胞→48~72 h→染色眷蜓、免疫熒光的單克隆抗體方法--檢測(cè)衣原體的包涵體
3病原鑒定
免疫熒光、碘染色胎围、吉姆薩染色→檢測(cè)蓋玻片上的包涵體吁系；吉姆薩(暗視野顯微鏡觀察)比碘染敏感

二十三德召、支原體（G-、油煎蛋樣菌落汽纤、缺乏細(xì)胞壁上岗、最小獨(dú)立微生物、通過(guò)除菌濾器蕴坪、人型支原體pH 6.6肴掷、解脲支原體pH 6.0、酶聯(lián)吸附捕獲法P1蛋白-肺炎支原體）

缺乏細(xì)胞壁背传、原核細(xì)胞型呆瞻、已知獨(dú)立生活最小微生物！通過(guò)除菌濾器续室。
16種栋烤、5種致病：肺炎支原體挺狰、（解脲明郭、人型、生殖丰泊、發(fā)酵）支原體--泌尿生殖道感染
1采集標(biāo)本
黏膜組織→拭子涂抹取樣薯定、分泌液→支原體液體培養(yǎng)基小管
組織塊→研磨成乳漿狀接種
2病原分離
需要豐富“膽固醇、血清蛋白瞳购、酵母浸液”话侄。5%CO2、95%N2学赛、36~37℃年堆。
加入0.002%酚紅指示劑、可加醋酸鉈及抗生素等抑菌劑
人型支原體pH 6.6盏浇、解脲支原體pH 6.0变丧、其他7.6~8.0
*油煎蛋樣菌落--太小、低倍鏡看
G-但不易著色绢掰、吉姆薩：淡紫色痒蓬、Dienes染色：藍(lán)色不易褪色--可鑒別
3病原鑒定
表格：支原體與細(xì)菌病毒等特征
能通過(guò)450nm濾膜？
4快速檢測(cè)
雙抗體夾心ELISA法測(cè)支原體“外膜蛋白”&免疫印跡測(cè)支原體“抗原”
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)捕獲法：肺炎支原體滴劲，170kDa膜蛋白（P1抗原）的單抗測(cè)呼吸道“P1蛋白”,3 h,敏感性10^4 CFU/ml[一萬(wàn)菌落形成單位]
核酸雜交技術(shù)攻晒、PCR--各種基因
5抗體檢測(cè)：4倍↑--診斷意義