一拗踢、原理
雙層瓊脂平板法（Double-layer Agar Plate Method）是一種常用的細菌、尤其是噬菌體（bacteriophage）檢測方法向臀。該方法的原理基于噬菌體可以特異性侵染細菌宿主巢墅，并引起細菌裂解。通過在瓊脂平板上使用兩層不同濃度的瓊脂券膀，噬菌體會在其中形成透明斑點（噬菌斑君纫，plaque），代表噬菌體侵染并裂解細菌的區(qū)域芹彬。
具體過程包括以下幾步：
下層瓊脂：下層是較硬的基礎(chǔ)瓊脂庵芭，用于固化支撐整個平板。
上層瓊脂：上層是較軟的瓊脂雀监，一般含有宿主細菌和噬菌體，用于使噬菌體可以在軟瓊脂中擴散并感染細菌眨唬。
當(dāng)噬菌體侵染細菌后会前，裂解細菌宿主細胞，形成可見的透明噬菌斑匾竿。每個噬菌斑代表一個噬菌體顆粒在起初的感染和裂解過程瓦宜。
二、方法
制備下層瓊脂：將較高濃度（1.5-2%）的基礎(chǔ)瓊脂液體倒入培養(yǎng)皿岭妖，待其凝固临庇。
準(zhǔn)備細菌培養(yǎng)物：在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)宿主細菌，通常要生長到對數(shù)期（OD值大約為0.6-0.8）昵慌，此時細菌處于活躍增殖階段假夺。
混合噬菌體和宿主細菌：在一個小管中，將噬菌體溶液和宿主細菌混合斋攀。
上層瓊脂的制備與倒置：加入已經(jīng)混合好的噬菌體和宿主細菌溶液到已融化并冷卻至約45℃左右的軟瓊脂（0.7%瓊脂）已卷，并快速倒在已經(jīng)固化的下層瓊脂上，使之均勻分布淳蔼。
培養(yǎng)：將雙層瓊脂平板在適宜溫度下（通常為37℃）培養(yǎng)16-24小時侧蘸。噬菌體會在培養(yǎng)的過程中侵染并裂解細菌，形成噬菌斑鹉梨。
觀察結(jié)果：培養(yǎng)結(jié)束后讳癌，觀察透明噬菌斑的形成，計算噬菌體的數(shù)量（用噬菌斑單位存皂，PFU晌坤，plaque-forming unit表示）。
三、應(yīng)用
噬菌體的分離與純化：雙層瓊脂平板法可用于從環(huán)境樣本（如水泡仗、土壤或糞便）中分離特定噬菌體埋虹。通過對不同宿主細菌的選擇性侵染，分離出特定的噬菌體株娩怎。
噬菌體滴定（計數(shù)）：通過稀釋噬菌體溶液并在平板上進行培養(yǎng)搔课，可以計算噬菌體的濃度（PFU/mL）。這是噬菌體研究和生產(chǎn)中常用的方法截亦。
噬菌體裂解活性的檢測：用于檢測特定噬菌體對宿主細菌的裂解活性爬泥，尤其是研究抗菌治療中的噬菌體療法時，通過觀察噬菌斑的形成來評估噬菌體對細菌的殺滅效果崩瓤。
噬菌體宿主范圍的研究：通過使用不同種類的細菌宿主袍啡，用雙層瓊脂平板法可以研究噬菌體的宿主范圍，了解噬菌體對不同細菌的特異性却桶。
基因重組研究：通過噬菌體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程研究細菌中的基因重組機制境输，常用于分子生物學(xué)實驗中。
雙層瓊脂平板法在微生物學(xué)颖系、病毒學(xué)及生物技術(shù)研究中具有廣泛的應(yīng)用嗅剖，是研究噬菌體及其與細菌宿主相互作用的關(guān)鍵技術(shù)之一。
