【現(xiàn)學(xué)現(xiàn)賣·protocol】噬菌體的分離(4)

Resulting Phage Phenotypes

噬菌體產(chǎn)生的表型

在分離噬菌體時(shí),首先考慮的是噬菌體的宿主范圍,然后是噬菌斑的形態(tài)。此外梁只,噬菌斑形態(tài)還可以用于推斷分離出的噬菌體的表型和物理特征,例如它們的大小埃脏、生命周期和降解細(xì)菌聚合物的能力等搪锣。

Altered Procedures and Their Effect on Host Range

不同的分離方案及其對(duì)宿主范圍的影響

過(guò)去我們通常認(rèn)為噬菌體的宿主范圍很窄,但是近期很多研究表明并不是這樣彩掐。很多因素可以影響噬菌體的宿主范圍构舟,比如噬菌體結(jié)合蛋白的特異性、細(xì)菌中的原噬菌體序列以及細(xì)菌的抗性機(jī)制堵幽。

最近已經(jīng)開(kāi)發(fā)了專門(mén)用于分離廣泛宿主范圍噬菌體的方法狗超。最簡(jiǎn)單的方式就是在分離噬菌體時(shí),在富集培養(yǎng)中使用多個(gè)宿主細(xì)菌朴下∨溃或者樣品在固體和液體培養(yǎng)基中與不同宿主一起孵育,具體操作為:首先在固體培養(yǎng)基上孵育噬菌體粗提液和宿主1殴胧,然后收集噬菌斑渗稍,再與宿主2在液體培養(yǎng)基中共培養(yǎng)......

Plaque Morphology Indicates Diverse Phage Characteristics

噬菌斑形態(tài)體現(xiàn)噬菌體特征

噬菌斑是噬菌體的宏觀表現(xiàn)佩迟,斑塊的形成可以分為四個(gè)階段,病毒粒子的吸附竿屹、病毒的第一輪復(fù)制报强、裂解區(qū)域的擴(kuò)大和噬菌斑的成熟。噬菌斑是噬菌體內(nèi)在特性的體現(xiàn)拱燃,但是外部培養(yǎng)特征也會(huì)影響噬菌斑形態(tài)秉溉,比如培養(yǎng)基、滲透壓扼雏、瓊脂類型和濃度坚嗜、瓊脂厚度、培養(yǎng)時(shí)間和溫度诗充、濕度、宿主接種物的數(shù)量和生理狀態(tài)等诱建。所以如果試驗(yàn)需要進(jìn)行比較蝴蜓,最好保持外部條件的一致。在觀察和比較噬菌斑時(shí)俺猿,應(yīng)考慮噬菌斑大小茎匠、清晰度、光暈的存在等押袍。


圖1. 同一培養(yǎng)條件诵冒、同一宿主時(shí),不同噬菌體產(chǎn)生的噬菌斑的形態(tài)谊惭。左圖表明該噬菌體感染效率低下汽馋,可能是由于病毒的吸附效率低下或病毒為溶原性侵染等;右圖感染效率高圈盔,可能是烈性噬菌體產(chǎn)生的豹芯。

噬菌斑的大小可能與病毒粒子的大小和吸附能力有關(guān),一般小顆粒擴(kuò)散較快驱敲。

噬菌斑的清晰程度可表示噬菌體裂解宿主的效率铁蹈,透明的噬菌斑表示噬菌體可高效裂解宿主,渾濁的噬菌斑表明裂解效率低下众眨。一些溫和噬菌體的溶原侵染也會(huì)產(chǎn)生渾濁的噬菌斑握牧,并且一般這樣產(chǎn)生的渾濁的噬菌斑的中心會(huì)比外緣更加渾濁。然而渾濁的噬菌斑并不是溫和噬菌體的監(jiān)測(cè)指標(biāo)娩梨,有的溫和噬菌體也可以產(chǎn)生非常清晰的噬菌斑沿腰。

噬菌斑的另一個(gè)重要特征是光暈,即在噬菌斑外緣的明顯暈圈姚建,其渾濁程度比噬菌斑中心高矫俺,通常不是漸變的。暈圈與胞外多糖解聚酶的存在相關(guān),這些酶由噬菌體編碼以降解生物膜等物質(zhì)厘托。不過(guò)也不是所有可以產(chǎn)生這些酶的噬菌體都會(huì)產(chǎn)生具有此類典型暈圈結(jié)構(gòu)的噬菌斑友雳。

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