懸浮細(xì)胞在炎癥哺壶、免疫、
凋亡桑逝、腫瘤研究等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛
例如在血液粒細(xì)胞的研究中
THP-1懸浮細(xì)胞就是一個(gè)非常經(jīng)典的細(xì)胞模型
懸浮細(xì)胞在細(xì)胞免疫治療方向
NK92懸浮細(xì)胞更是發(fā)揮了必不可少的作用
還有HL-60棘劣、K562、U937楞遏、U266等
都是我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室比較常見的懸浮細(xì)胞
在懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)過程中
根據(jù)整體細(xì)胞生長分裂的狀況
可以將整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)周期分為四個(gè)時(shí)期：
潛伏期茬暇、對(duì)數(shù)生長期、穩(wěn)定期寡喝、衰亡期
進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期的時(shí)候
是細(xì)胞分裂最旺盛的時(shí)候
?
細(xì)胞活性也是最高
隨著分裂次數(shù)的增加
細(xì)胞代謝產(chǎn)物增加? ?細(xì)胞密度增大
到了對(duì)數(shù)生長期后期
有一小部分細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)凋亡的跡象
進(jìn)入穩(wěn)定期后細(xì)胞密度達(dá)到最大
如果這個(gè)時(shí)候不及時(shí)補(bǔ)充營養(yǎng)
更換新鮮培養(yǎng)基的話
凋亡的細(xì)胞就會(huì)越來越多
如果死細(xì)胞太多的話
會(huì)影響降低整體細(xì)胞活性
同時(shí)也會(huì)抑制影響正常細(xì)胞的生長代謝
如果涉及藥篩實(shí)驗(yàn)等
死細(xì)胞比例更會(huì)大幅增加
|? ?磁珠標(biāo)記
MACS(magnetic-activated cell sorting),原理就是用結(jié)合了磁珠的抗體去標(biāo)記細(xì)胞糙俗，讓目的細(xì)胞帶上磁珠，也可以正向選擇死細(xì)胞预鬓，通過磁場(chǎng)將結(jié)合了磁珠與沒結(jié)合磁珠的細(xì)胞分離開來巧骚。MACS是細(xì)胞分選的重要手段，優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞活性好格二，缺點(diǎn)就是能分選的細(xì)胞類型有限劈彪，且成本較高。
|? ?流式分選
FACS(fluorescence-activated cell sorting),也就是流式分選顶猜，與流式分析一致沧奴。利用熒光素標(biāo)記不同的分子，通過調(diào)節(jié)合適的電壓长窄、補(bǔ)償?shù)忍戏停ㄟ^熒光將目的細(xì)胞與非目的細(xì)胞區(qū)分開來纲菌。
|? ?沉降法
部分懸浮細(xì)胞如NK92成團(tuán)生長，成團(tuán)的細(xì)胞狀態(tài)較好疮绷，單個(gè)細(xì)胞基本沒有增殖能力翰舌，根據(jù)這一特性，便可以將細(xì)胞懸液收集在離心管中矗愧，注意動(dòng)作要輕柔灶芝，不要將細(xì)胞團(tuán)吹散，將離心管直立唉韭，觀察離心管底出現(xiàn)“白霧”層時(shí)夜涕，可小心將上清去除，來收獲狀態(tài)良好的細(xì)胞團(tuán)属愤。
|? ?低速離心法
一般來說女器，懸浮細(xì)胞中的死細(xì)胞及細(xì)胞碎片的密度相對(duì)較低，此時(shí)住诸，可以通過低速（500-800rpm）來去除一些上清中的死細(xì)胞驾胆，每次傳代或換液進(jìn)行此操作，使活細(xì)胞有生長優(yōu)勢(shì)贱呐，可以慢慢提高活細(xì)胞比例丧诺。
|? ?活細(xì)胞短暫貼壁法
可以用一種叫Con.A（刀豆球蛋白）來包被培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，懸浮細(xì)胞中的活細(xì)胞可短暫貼壁奄薇，此時(shí)棄去上清驳阎，一段時(shí)間后，細(xì)胞又可以重新懸浮馁蒂。市面上有一些經(jīng)過特殊處理的養(yǎng)貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)瓶也可達(dá)到這種效果呵晚，但是建議使用之前根據(jù)所養(yǎng)的懸浮細(xì)胞生長狀況測(cè)試一下分離效果。
