在接下來的系列文章里，我們會就百沐生物所做項目用到的技術(shù)做詳細技術(shù)圖解夺颤，首先祠肥，這里我們詳細視圖展示一下10x genomics?的單細胞RNA-seq建庫原理。
10X genomics 單細胞轉(zhuǎn)錄組建庫是指通過Poly(dT)與RNA 分子 3'端poly(A)尾巴互補配對以捕獲RNA分子倍阐，我們稱為3’端單細胞轉(zhuǎn)錄組測序。10x genomics 在免疫組庫測序時薄腻，我們通常會同時建V(D)J文庫和單細胞5’端文庫收捣，下一個推文會做免疫組庫建庫講解。下面我們圖示講解10x genomics 3' 單細胞轉(zhuǎn)錄組測序庵楷。
01
?將準(zhǔn)備好的單細胞懸液通過全自動的儀器Chromium Controller快速進行單細胞GEMs的生成罢艾，GEMs圖解見下圖楣颠。
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每個GEM未破裂，在GEMs內(nèi)部進行反轉(zhuǎn)錄生成cDNA, 這樣每個GEM里的反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA都帶有該細胞的細胞標(biāo)簽Barcode咐蚯。
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GEMs 破裂童漩，所有細胞的cDNA pooling在一起，PCR擴增cDNA 全長春锋， 使擴增產(chǎn)物量達到建庫要求矫膨。
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通過酶切的方式片段化擴增產(chǎn)物，片段篩選后加測序接頭期奔。
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3’端轉(zhuǎn)錄組文庫結(jié)構(gòu)圖解侧馅。
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最后測序下機數(shù)據(jù)里我們用于后續(xù)分析的R1 file、R2file 和I1file這三個文件內(nèi)容圖解呐萌。
