免疫熒光
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PS圖片處理：
- 將圖片拖入ps軟件
- “command +M”調(diào)用"curve"功能社露，調(diào)節(jié)圖片曝光程度
- 然后根據(jù)圖片的尺寸大小建立一個相同大小的畫布讯泣，300 像素/英寸的清晰度衅枫；黑色背景嫁艇。
- 首先，在右下角把圖層選項中“正诚伊茫”改為“濾色”步咪，然后將兩組dapi和染色圖層一同選上，右鍵進(jìn)行“圖層合并-merge”
- 將圖片的透明度調(diào)節(jié)至50%左右益楼，并可以根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)節(jié)猾漫。
- 然后根據(jù)之前選擇好的curve參數(shù)調(diào)節(jié)兩組圖片。
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谷歌圖片處理：
- 設(shè)置參數(shù)-谷歌-20211029
| target | Black | white |
|---|---|---|
| DAPI | 5 | 200 |
| VPS13C | 20 | 253 |
| GSTP1 | 5 | 180 |
- Image J 批量處理熒光強(qiáng)度處理：
平均熒光強(qiáng)度的定義：對于一張單通道（單色）的熒光圖片偏形，每個像素的灰度值代表了該點的熒光強(qiáng)度大小静袖，特定區(qū)域的熒光強(qiáng)度公式：平均熒光強(qiáng)度(Mean) = 該區(qū)域熒光強(qiáng)度總和(IntDen) / 該區(qū)域面積(Area)；Mean: Mean gray value俊扭； IntDen: Integrated Density
平均熒光強(qiáng)度并不等于免疫組化中的光密度（Optical Density）队橙，所以不需要Invert以及Calibration。單位可以用Arbitrary Units（AU）
- 設(shè)置錄制：打開圖片 --- Plugins --- Macros --- Record --- name it
- 格式轉(zhuǎn)化：Image --- Type --- 8-bit（為灰度圖片）
- 調(diào)節(jié)閾值：Image --- Adjust --- Threshold --- dark ground（自己調(diào)節(jié)/“Auto”）--- Apply
- 設(shè)定需要測量的參數(shù)（Analyze-Set Measurements）(area;mean gray value;limit to threshold; integrated density; area fraction)
- 檢測（Analyze-Measure）
- 保存數(shù)據(jù)：file --- save as
- 設(shè)置“錄制”好的代碼：Process --- batch --- macro --- 選擇導(dǎo)入文件夾+導(dǎo)出文件夾 --- 粘貼代碼 --- process
