眾所周知宅楞，實驗并不是做出來就結(jié)束了针姿，更重要的是我們要對結(jié)果進(jìn)行分析統(tǒng)計，以得出實驗的結(jié)果結(jié)論厌衙。要想獲得理想的實驗結(jié)果距淫，標(biāo)準(zhǔn)的試驗操作步驟是第一步，合適的分析方法是第二步婶希。
免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry, IHC）是利用抗原抗體反應(yīng)已顯示某蛋白的表達(dá)及定位的實驗榕暇。這種實驗的獨(dú)特之處在于它既直觀的顯示了蛋白在組織及細(xì)胞或細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)的定位，又保留了組織樣品的結(jié)構(gòu)特征喻杈。IHC 已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究及臨床診斷中彤枢。
所以組織切片經(jīng)免疫組化染色后，你真的知道選擇什么樣的方式分析嗎奕塑？目前免疫組化尚無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)計量方法堂污，但已有幾種科研界已被認(rèn)可的 IHC 計量方法，下面我來一一詳細(xì)介紹，小伙伴們拿起本本趕緊記錄啦～
積分制
積分制是對切片以細(xì)胞染色強(qiáng)度攘宙、陽性細(xì)胞范圍進(jìn)行評分胎围，再相乘得出最終得分的方式，這是最常用的方法酝陈。
標(biāo)準(zhǔn)評分為：
根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度評分為 4 級，無陽性著色（陰性）計 0 分，淡黃色（弱陽性）計 1 分固蚤，棕黃色（陽性）計 2 分，棕褐色（強(qiáng)陽性）計 3 分歹茶；
根據(jù)陽性細(xì)胞百分比評為 4 級夕玩，≤25% 計 1 分，26%-50% 計 2 分惊豺，51%-75% 計 3 分燎孟，＞75% 計 4 分，將兩項評分相乘得出最終評分結(jié)果 [1-2]尸昧。
此種方法是最貼近臨床方面的揩页，小伙伴們?nèi)绻胱瞿骋蜃拥呐R床病理特征分析，那最好采用這種方法烹俗。
參考文獻(xiàn)：[1] 李明鳳爆侣，方林娜，計翼幢妄，胡沛然兔仰，孫林，王悅晨蕉鸳，孫禮潔斋陪，尹玉。前列腺癌組織中 TEM8 與 VEGF 的表達(dá)及臨床意義 [J]. 臨床與實驗病理學(xué)雜志，2020,36 (10):1144-1148.
參考文獻(xiàn)：[2] Guo Zheng,Zhang Xiufang,Zhu Huabin et al. TELO2 induced progression of colorectal cancer by binding with RICTOR through mTORC2.[J] .Oncol Rep, 2020, undefined: undefined.
陽性細(xì)胞數(shù)
計數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)適用于評估某物質(zhì)是否在組織中存在以及數(shù)量无虚，是對該物質(zhì)數(shù)量而不是表達(dá)強(qiáng)弱的判別缔赠。
如評估某細(xì)胞在該組織中的數(shù)量，可利用該細(xì)胞的特異性標(biāo)志物做免疫染色友题。如 CD163 標(biāo)記 M2 型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞嗤堰，CD34 標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，CD3 標(biāo)記 T 細(xì)胞等等度宦。
對于這類免疫組化踢匣，我們直接計數(shù) 20 倍鏡下隨機(jī) 5 個視野下的陽性細(xì)胞數(shù)，再求一個平均數(shù)即為這張片子的陽性細(xì)胞數(shù)戈抄。
也有計算單位面積下陽性細(xì)胞數(shù)的方法离唬。通過統(tǒng)計 20 倍鏡下的細(xì)胞數(shù)，在除以鏡下面積划鸽，得出細(xì)胞密度输莺，單位為 cells/mm2。
參考文獻(xiàn)：[3] Zheng Shaoquan,Zou Yutian,Xie Xinhua et al. Development and validation of a stromal immune phenotype classifier for predicting immune activity and prognosis in triple-negative breast cancer.[J] .Int J Cancer, 2020, 147: 542-553.
Image Pro Plus 軟件測量平均光密度值
有時裸诽，我們想定量的分析某因子的高低表達(dá)差異嫂用，用半定量的積分制并不能很好的區(qū)分差異，我們可使用軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析丈冬。
Image Pro Plus 軟件的計量原理是根據(jù)目的蛋白的著色深淺及分布面積來確定目的蛋白的表達(dá)量嘱函。大家在網(wǎng)上搜索 Image Pro Plus 的操作方法即可，簡單上手埂蕊。
百度上有篇關(guān)于 Image Pro Plus 軟件分析免疫組化的超詳細(xì)的文章往弓，鏈接在此：
https://wenku.baidu.com/view/85c0cb4caf1ffc4fff47ac25.html。
通過測量出每張圖片的累積光密度值（integrated option density, IOD）值以及區(qū)域面積 area 值蓄氧，再計算出平均光密度值（mean density）即 mean density=IOD/area函似，此值反映了目標(biāo)蛋白的單位面積濃度。最后取每個樣本的 5 個隨機(jī)區(qū)域 mean density 的平均值即為此樣本的值匀们。
參考文獻(xiàn)：[4] Wang Yang,Wu Caifang,Qin Yong et al. Multi-Angle Investigation of the Fractal Characteristics of Nanoscale Pores in the Lower Cambrian Niutitang Shale and Their Implications for CH Adsorption.[J] .J Nanosci Nanotechnol, 2021, 21: 156-167.
以上為 3 種免疫組織化學(xué)常用的計量方法缴淋，希望對大家免疫組化實驗數(shù)據(jù)處理有所幫助，少走彎路泄朴。
具體選擇哪種方法還是要根據(jù)你的研究內(nèi)容和目的重抖，最后祝大家早日發(fā) SCI 呀～
