甲基化

DNA甲基化位點(diǎn)三種不同的motif類型(CG匠题,CHG,CHH)仆潮,已經(jīng)有很多研究表明在個(gè)體內(nèi)的調(diào)控機(jī)理和功能并不相同检盼。

DNA甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)和少量的N6-甲基嘌呤(N6-mA)及7-甲基鳥嘌呤(7-mG)傀广。

結(jié)構(gòu)基因含有很多CPG結(jié)構(gòu), 2CPG 和2GPC 中兩個(gè)胞嘧啶的5 位碳原子通常被甲基化, 且兩個(gè)甲基集團(tuán)在DNA 雙鏈大溝中呈特定三維結(jié)構(gòu)颁独。基因組中60%~ 90% 的CPG 都被甲基化, 未甲基化的CPG 成簇地組成CPG 島, 位于結(jié)構(gòu)基因啟動子的核心序列和轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)伪冰。有實(shí)驗(yàn)證明超甲基化阻遏轉(zhuǎn)錄的進(jìn)行誓酒。

In genetics, a sequence motif is a nucleotide or amino-acid sequence pattern that is widespread and has, or is conjectured to have, a biological significance.

In plants and other organisms, DNA methylation is found in three different sequence contexts: CG (or CpG), CHG or CHH (where H correspond to A,T or C). In mammals however, DNA methylation is almost exclusively found in CpG dinucleotides, with the cytosines on both strand being usually methylated.
植物和其他器官?贮聂,DNA甲基化在三種不同的序列context發(fā)現(xiàn): CG (or CpG), CHG or CHH靠柑。
哺乳動物,基本只發(fā)現(xiàn)CpG吓懈。cytosines on both strand 被甲基化歼冰。

CpG islands are usually defined as regions with 1) a length greater than 200bp, 2) a G+C content greater than 50%, 3) a ratio of observed to expected CpG greater than 0.6,
CpG島:長度大于200bp,GC含量大于0.5耻警,expected CpG比率大于0.6

在細(xì)菌基因組中,N6-甲基腺嘌呤(m6A)和N4-甲基胞嘧啶(m4C)也很常見,它們作為限制修飾(RM)系統(tǒng)的一部分而行使功能

http://www.novogene.com/tech/suppor/news/1480.html

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1:目前pacibio的測序儀器可以分析的甲基化類型有:5mc\4mc和6mA隔嫡,一般原核會提供甲基化位點(diǎn)相對應(yīng)的motif,真核生物就沒有了(一般只關(guān)心cpG 島的甲基化)

2:5mc的監(jiān)測難度比較大,需要較高的測序覆蓋度一般要到250X甘穿,但是加入Tet1試劑后畔勤,大概就需要25X就可以了

3:pacbio測序儀器集成了http://rebase.neb.com/rebase/rebase.html一個(gè)關(guān)于甲基化轉(zhuǎn)移酶的識別motif數(shù)據(jù)庫,motif是甲基化位點(diǎn)左右12bp的一段序列

4:檢測原理:當(dāng)該位點(diǎn)有堿基修飾的時(shí)候扒磁,測序速度會變慢,其實(shí)其它種類的剪輯修飾也可以檢測式曲,只是三代公司還沒有算出檢測算法妨托。

5:因?yàn)檎婧瞬环治鰉otif,所以在分析的時(shí)候,三代的protocal是不一樣的:

真核:RS_Modification_Detection

原核:RS_Modification_and_Motif_Analysis.1

參考:

1:https://github.com/PacificBiosciences/SMRT-Analysis/wiki/SMRT-Pipe-Reference-Guidev2.3.0#PRO_MOD

2:pacbio官方文檔

3.博客筆記

4.諾和細(xì)菌完成圖甲基化檢測

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