CAT試驗(yàn)
ER siRNA轉(zhuǎn)染
目前86細(xì)胞狀態(tài)尚可，可用于后期轉(zhuǎn)染試驗(yàn)厌漂，48小時(shí)前轉(zhuǎn)染細(xì)胞萨醒，細(xì)胞按照50%鋪板，24小時(shí)后轉(zhuǎn)染苇倡，細(xì)胞密度約60%富纸，轉(zhuǎn)染后6小時(shí)，細(xì)胞密度感覺80%旨椒，未換液晓褪，24小時(shí)后直接傳代每個(gè)6孔板一個(gè)孔到新的6cm培養(yǎng)皿，結(jié)果48小時(shí)后細(xì)胞密度仍不到50%综慎。繼續(xù)培養(yǎng)至明日-72小時(shí)涣仿，或更長時(shí)間提蛋白。
CCK-8以梯度鋪板寥粹，分別為1/4-1/8-1/16变过，今日可進(jìn)行初步測量，12孔板加入180ul無血清培養(yǎng)基和20ul cck-8涝涤，培養(yǎng)2小時(shí)，每孔分成2*95ul吸取加入96孔板岛杀，獲得相對基線數(shù)據(jù)（實(shí)際為轉(zhuǎn)染48小時(shí)）
平板克隆試驗(yàn)阔拳，目前認(rèn)為day1，預(yù)計(jì)10-26日開始獲得初步結(jié)果类嗤，拭目以待糊肠。
單克隆重新培養(yǎng)
目前CAT與CAT-M的單克隆中，前者狀態(tài)較好遗锣，目前有大量存貨货裹，今日繼續(xù)培養(yǎng)，切記不要過滿精偿。
CAT-M始終狀態(tài)差弧圆，現(xiàn)手中有一皿狀態(tài)較好細(xì)胞，一會(huì)仔細(xì)傳代笔咽，避免傳代比例過高或過低，除非有特殊作用，否則傳代按照1:2-1:4寡喝，注意保種圆仔！
因?yàn)镃AT-M狀態(tài)差，現(xiàn)轉(zhuǎn)染ERHP4熒光探針的CAT-M單克隆狀態(tài)也非常差甩十，不建議繼續(xù)培養(yǎng)船庇，預(yù)計(jì)近期CAT-M培養(yǎng)成功后重新鋪板吭产，感染病毒。
J-Chain病毒感染單克隆細(xì)胞狀態(tài)極差鸭轮，現(xiàn)在考慮全部細(xì)胞均采用6cm皿感染臣淤，先在6孔板生長到80%，傳代到6cm皿张弛，貼壁24小時(shí)后進(jìn)行病毒感染荒典，12小時(shí)換液，24小時(shí)傳代到10cm皿吞鸭。
UC細(xì)胞培養(yǎng)及試驗(yàn)
目前培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)為寺董，15%FBS對于UC細(xì)胞較為合適，可以考慮升級到20%FBS進(jìn)行培養(yǎng)刻剥，以增加細(xì)胞生長速度和狀態(tài)遮咖。細(xì)胞消化時(shí)間目前發(fā)現(xiàn)try潤洗一遍后PBS沖洗，再用Try消化9分鐘造虏，仍有20%左右細(xì)胞無法從培養(yǎng)皿中消化下來御吞，考慮將細(xì)胞消化時(shí)間增加為10分鐘。
目前細(xì)胞已凍存漓藕，可充分培養(yǎng)用于試驗(yàn)陶珠。BBA與ER的課題需要快速開始，避免消耗太長時(shí)間享钞。
動(dòng)物
目前手中動(dòng)物給予充分的恢復(fù)時(shí)間揍诽，好生保護(hù)，在細(xì)胞試驗(yàn)完成后盡快開始功能學(xué)試驗(yàn)栗竖。
經(jīng)驗(yàn)
當(dāng)前設(shè)計(jì)很多實(shí)驗(yàn)同時(shí)做暑脆，但收效較差，宜保證重要試驗(yàn)如期完成狐肢，做好充分規(guī)劃添吗。在既定時(shí)間拿到數(shù)據(jù)，解決關(guān)鍵問題份名。今年一定要完成課題并投出文章碟联。
死命令：7點(diǎn)出門，8點(diǎn)回同窘，60天完成任務(wù)玄帕。
