細(xì)胞凋亡的早期形態(tài)學(xué)改變是核染色質(zhì)濃聚、固縮,聚集在核膜周邊,然后是胞漿濃縮翠肘、胞膜起泡,繼而細(xì)胞核裂解成若干碎片,細(xì)胞膜將胞質(zhì)和染色質(zhì)斷片包裹,胞漿內(nèi)形成多個膜結(jié)構(gòu)尚完整的“小泡”及 “凋亡小體” (apoptoticbody)侍芝。這不同于細(xì)胞壞死的細(xì)胞腫脹感耙、胞膜破裂企垦、細(xì)胞崩解涎永，但凋亡的細(xì)胞有固定的特征斯碌，因此誕生出細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測方法一死。

一、光學(xué)顯微鏡觀察

凋亡細(xì)胞的主要特征為核染色質(zhì)致密深染傻唾，形成致密質(zhì)塊投慈，有時可碎裂。在HE染色的組織切片中細(xì)胞體積縮小冠骄，胞質(zhì)致密伪煤、嗜酸性染色增強(qiáng)，并可形成凋亡小體凛辣。在組織中凋亡細(xì)胞常以分散單個形式存在抱既，凋亡細(xì)胞與周圍細(xì)胞分離，不引起炎癥反應(yīng)扁誓。

檢測方法：細(xì)胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色防泵，在高倍物鏡下觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)改變阳堕，結(jié)合顯微測量工具可作凋亡細(xì)胞計數(shù)。

二择克、視頻時差顯微技術(shù)

細(xì)胞培養(yǎng)中常用恬总，通過相差顯微鏡可動態(tài)觀察細(xì)胞凋亡的變化過程，尤其是觀察細(xì)胞表和外形的變化肚邢。凋胞與基質(zhì)分離壹堰，胞體變圓、收縮骡湖、出泡贱纠，有的細(xì)胞拉長，出現(xiàn)釘狀突起响蕴，持續(xù)數(shù)小時后細(xì)胞膜破裂谆焊，細(xì)胞溶解，本方法可養(yǎng)壑培養(yǎng)中的凋亡細(xì)胞浦夷，但不能用于病理組織辖试。

檢測方法：收集2×10^5細(xì)胞/ml培胞，置于多孔培養(yǎng)板劈狐，加入凋亡誘導(dǎo)劑罐孝，在帶有自動攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的動態(tài)改變，每隔1分鐘作序列攝影肥缔，連續(xù)24小時莲兢。如同進(jìn)進(jìn)行熒光染色，可參熒光晃微鏡下觀察和攝影续膳。

三改艇、電子顯微鏡觀察

雖然光學(xué)顯微鏡下可以看見胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體,但凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化大多發(fā)生在超微結(jié)構(gòu),因此用光鏡觀察難以令人滿意,而透射電鏡可清楚地觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)在凋亡不同時期的變化。電鏡形態(tài)學(xué)觀察是迄今為止判斷凋亡最經(jīng)典坟岔、最可靠的方法,被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn)谒兄。

檢測方法：透射電鏡標(biāo)本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定，丙酮脫水炮车，環(huán)氧樹脂包埋舵变，超薄切片，醋酸枸椽酸電子又重染色瘦穆，透射電鏡觀察纪隙。掃描電鏡標(biāo)本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定，乙醇逐級脫水扛或，CO2臨界點干燥绵咱，真空噴金，掃描電鏡觀察熙兔。

四悲伶、流式檢測

流式細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞是通過檢查其光射特征及熒光參數(shù)時行的艾恼。細(xì)胞穿過流式細(xì)胞儀的激光束集點時使激光發(fā)生散射，分析散射光可以提供細(xì)胞大小及結(jié)構(gòu)的信息麸锉。散射光包括前向散射光和左向角散射光兩種钠绍，前向散射光的強(qiáng)度與細(xì)胞大小、體積相產(chǎn)花沉，右向角射光的強(qiáng)度與細(xì)胞結(jié)構(gòu)的析射性柳爽、顆粒性（granu-larity）有關(guān)。

細(xì)胞凋亡過程中核酸內(nèi)切酶在DNA分子核小體間的降解碱屁，導(dǎo)致小分子DNA漏出磷脯，核DNA含量下降，細(xì)胞熒光染色后作流式細(xì)胞儀分析娩脾，可以發(fā)現(xiàn)在DNA直方圖上正常二倍體細(xì)胞的Go/G1峰前出現(xiàn)一個亞二倍體峰（xub-G1峰赵誓，即AP峰--apoptotic peak）,代表凋亡細(xì)胞。

根據(jù)此亞二倍體峰可以計算凋亡細(xì)胞的百分率柿赊。此外俩功，流式細(xì)胞術(shù)還可以通過測定線粒體膜的電位、溶酶體質(zhì)子泵的活性及細(xì)胞DNA/總蛋白質(zhì)比例等方法辨認(rèn)凋亡細(xì)胞闹瞧。

檢測方法：獲取密度1×10^6細(xì)胞/ml左右的細(xì)胞懸液绑雄，精洗展辞，固定奥邮，熒光染料染色，上流式細(xì)胞儀分析罗珍。

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一洽腺，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)覆旱、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用蘸朋。通常使用細(xì)胞凋亡檢測試劑盒，如常見的Annexin V熒光雙染法扣唱，其檢測原理為：Annexin V/ Annexin A5為胞內(nèi)蛋白膜聯(lián)蛋白家族成員藕坯，以鈣依賴的方式與磷脂酰絲氨酸(PS)結(jié)合。PS存在于正常細(xì)胞漿膜的內(nèi)層噪沙，但在凋亡早期炼彪，膜不對稱性喪失，PS易位至細(xì)胞表面正歼。熒光標(biāo)記的 Annexin V可與之特異性結(jié)合辐马，表明該細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液局义，碘化丙啶可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞喜爷，呈現(xiàn)紅色熒光冗疮。