因為馬上要進組干活饱苟，最近一直在看文獻，經(jīng)常遇到使用cre/loxp技術(shù)進行條件敲除的文章，看的也是云里霧里岖寞，只知道它可以特異性的敲除某類組織內(nèi)的目的基因。今天專門去查了很多資料柜蜈，終于算是對cre/loxp技術(shù)有了一定了解仗谆，記錄一下，歡迎大家批評指正淑履！
1.“基因敲除”
利用基因同源重組進行基因敲除是上世紀八十年代問世的一種基因敲除方法隶垮，它基于同源重組的原理，將與細胞內(nèi)靶基因特異片段同源的基因載體重組進ES細胞的基因組中秘噪，替換靶基因序列狸吞，從而達到基因敲除的目的。當然，因為動物細胞內(nèi)發(fā)生染色體同源重組的頻率并不高蹋偏，所以后續(xù)還需要對es細胞進行篩選便斥，篩選后將敲除成功的es細胞注入假孕小鼠囊胚，得到嵌合體小鼠后代威始，繼續(xù)傳代可以得到純合子小鼠（一般>=2代）枢纠。
基于這一項技術(shù)，我們可以構(gòu)建攜帶loxp序列的目的基因載體黎棠，替換靶基因序列晋渺，得到攜帶loxp序列的小鼠。之后再用同樣的方法構(gòu)建攜帶promoter-cre-er序列的小鼠（限制cre酶在特定組織內(nèi)表達）脓斩。兩類小鼠雜交木西，完成cre/loxp轉(zhuǎn)基因小鼠模型的構(gòu)建。
2.cre酶的“開關(guān)”
之所以要在cre序列后增加er序列随静，是為了實現(xiàn)cre酶表達的人為調(diào)控八千。
編輯后的cre酶將會攜帶雌激素結(jié)合域，并且該結(jié)合域經(jīng)人為修飾后只能與tamaxifen結(jié)合挪挤。細胞內(nèi)表達的cre酶由于er結(jié)構(gòu)的存在叼丑，會與hsp90結(jié)合，導(dǎo)致無法進入細胞核內(nèi)發(fā)揮作用扛门。當人為施加tamoxifen后鸠信，tamoxifen與er結(jié)構(gòu)結(jié)合，hsp90分離论寨，cre酶得以進入細胞核識別并剪切l(wèi)oxp片段星立。
3.loxp序列
loxp序列由兩部分組成（圖1），是一段34bp的有向DNA序列
對于基因上下游loxp序列方向的不同組合葬凳，cre酶會產(chǎn)生不同的作用結(jié)果（圖2）
來源：
【1】https://www.researchgate.net/figure/Mechanism-of-Cre-loxP-system-A-An-overview-of-Cre-loxP-system-38-kDa-Cre-recombinase_fig1_330386744
【2】https://zhuanlan.zhihu.com/p/140230189
【3】https://www.flashtherapeutics.com/flash-academy/blog/lentiflash-is-a-fast-and-safe-gene-editing-delivery-technology-for-cre-loxp-models-110
【4】http://www.reibang.com/p/3003a29c404a
