染色質(zhì)環(huán)
在哺乳動物細(xì)胞核內(nèi)拍棕,由于染色質(zhì)濃縮聚合的
性質(zhì)解总,導(dǎo)致基因纖維上兩個遠(yuǎn)端位點(diǎn)會產(chǎn)生隨機(jī)碰
撞而以較低的頻率相互作用贮匕。然而,在某些確定的
基因位點(diǎn)間花枫,這種遠(yuǎn)距離互作的頻率卻顯著高于預(yù)
測值刻盐。在 sub-Mb 分辨率的 Hi-C 互作圖譜中,這些
遠(yuǎn)距離互作的位點(diǎn)大量存在劳翰,它們構(gòu)成了染色質(zhì)穩(wěn)
定結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)敦锌,或直接參與轉(zhuǎn)錄等調(diào)控過程。因此佳簸,
由基因位點(diǎn)的遠(yuǎn)距離互作而介導(dǎo)染色質(zhì)纖維折疊形
成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)乙墙,稱之為“Chromatin loop”,即染色質(zhì)
環(huán)生均。
單倍型haplotype
單倍型是存在于染色單體內(nèi)具有統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)性
的一類單核苷酸多態(tài)性 (single nucleotide
polymorphisms, SNPs)听想,Hi-C 技術(shù)能夠使DNA 片段
在全基因范圍內(nèi)進(jìn)行單倍型組裝
研究還發(fā)現(xiàn),
與疾病相關(guān)的 SNPs 位點(diǎn)明顯富集在基因的互作區(qū)
域马胧,暗示著遠(yuǎn)距離突變可能會破壞相關(guān)基因的表達(dá)
調(diào)控而導(dǎo)致疾病的發(fā)生
3C染色體構(gòu)像捕獲技術(shù)(chromosomeconformationcapture)
第一步汉买,固定。
使用固定劑(常為甲醛)將靠近染色體的2個區(qū)域相連佩脊,固定劑在這里發(fā)揮了“雙面膠”的雙向抓牢作用录别,使原本結(jié)構(gòu)可變的染色體“靜止”,以利于后續(xù)操作邻吞。如果一條染色體內(nèi)部被固定组题,常形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
第二步抱冷,酶切崔列。
對固定后的染色體使用限制性內(nèi)切酶處理。
一般使用識別6堿基的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行操作,理論上每4096(46)個堿基就存在一個酶切位點(diǎn)赵讯。通過酶切盈咳,可將環(huán)內(nèi)部剪切為多個片段。
第三步边翼,連接鱼响。
使用DNA連接酶使切斷的DNA片段重新連接,形成一個DNA環(huán)组底。
第四步丈积,解環(huán)。
被固定的DNA解除交聯(lián)债鸡,使環(huán)狀DNA線性化江滨。
第五步,擴(kuò)增厌均。
例如唬滑,原來線性DNA存在A—E共5個片段,推測形成空間結(jié)構(gòu)后棺弊,A和E可能靠近晶密,因此在A片段和E片段靠近限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn)之處,設(shè)計引物模她,并以線性DNA為模板稻艰,進(jìn)行半定量或定量的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增。
第六步缝驳,判定连锯。
根據(jù)不同引物組合的擴(kuò)增效率,確定2個片段空間靠近的概率用狱。
目的:3C技術(shù)主要確定“一對一”關(guān)系运怖,就是線性距離較遠(yuǎn)的2個DNA片段之空間關(guān)系。
Chip-loop 技術(shù)
Hi-C(High throughput 3C 高通量3C技術(shù))
CHIA-PET