注:與對(duì)照比較*P<0.05
圖3.4D? 免疫印跡檢測(cè)野生型及MT轉(zhuǎn)基因Ang Ⅱ小鼠心肌GRP94腹腔注射1mg/kg Ang Ⅱ 7hrs及24hrs后誘導(dǎo)Ang Ⅱ模型
注：與對(duì)照比較消请，*P<0.05.2.2? 血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)心肌MT上調(diào)
? ? 免疫印跡結(jié)果顯示故痊，MT于AngⅡ腹腔注射七小時(shí)及24小時(shí)后在野生型小鼠心肌中均明顯升高，但在MT轉(zhuǎn)基因小鼠心肌中未見上調(diào)（見圖3.5）棒口。
圖3.5? 免疫印跡檢測(cè)野生型及MT轉(zhuǎn)基因Ang Ⅱ小鼠心肌MT腹腔注射1mg/kg Ang Ⅱ 7hrs及24hrs后誘導(dǎo)Ang Ⅱ模型
注：與對(duì)照比較痊土，*P<0.05? MT抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡
? ? 免疫印跡結(jié)果顯示淋硝，具有活性的cleaved caspase-3于AngⅡ腹腔注射7小時(shí)及24小時(shí)后在野生型小鼠心肌中升高燎悍，而在MT轉(zhuǎn)基因小鼠心肌中未見改變（圖3.6A）。與之相似臣镣，ERS相關(guān)的凋亡標(biāo)志物CHOP辅愿、具有活性的cleaved caspase-12亦AngⅡ腹腔注射7小時(shí)及24小時(shí)后在野生型小鼠心肌中上調(diào),但在MT轉(zhuǎn)基因小鼠心肌中未見改變（見圖的多余液體，滴加100μl的平衡緩沖液于樣本區(qū)域上,室溫平衡5-10min:
? 4)TdT標(biāo)記:用濾紙小心吸取樣本區(qū)域周圍的多余液體忆某，滴加50μL的TdT酶反應(yīng)液于樣本上点待；
? 5)在反應(yīng)區(qū)域蓋上蓋玻片以確保反應(yīng)液分布均勻，于37℃褒繁，潮濕環(huán)境中反應(yīng)1h
? 6)終止緩沖液
? 7)加anti-digoxigenin peroxidase conjugate一份孵育30min
? 8)PBS浸洗三次亦鳞，每次5分鐘
? 9)顯色:
? 10)清洗: dH2O 3分鐘
? 11)復(fù)染:甲基綠復(fù)染10min,75％，85％棒坏，95％燕差，100％的乙醇中脫水，每次2min?
? 12)透明封細(xì)胞總蛋白質(zhì)坝冕，采用Bradford法進(jìn)行蛋白定量徒探，80μg蛋白領(lǐng)10％～12％SDS-PAGE電泳1h后，電轉(zhuǎn)（4℃喂窟，過夜）至PVDF膜测暗，2％BSA室溫封畢3h,先后加入靶蛋白抗體及HRP標(biāo)記的相應(yīng)IgG，室溫分別孵育1h和0.5h,DBA顯色試劑盒進(jìn)行顯色磨澡。
