實驗室殺手們，先別著急處理細(xì)胞鸭轮，花5分鐘仔細(xì)閱讀~
1臣淤、對于復(fù)蘇細(xì)胞
① 請按照說明書提前準(zhǔn)備好基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清窃爷、因子邑蒋、胰酶姓蜂、雙抗，不要隨意更改培養(yǎng)條件寺董，提前將生物安全柜進(jìn)行酒精消毒和紫外滅菌覆糟。
② 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損遮咖、漏液滩字、培養(yǎng)基渾濁或污染，請拍照后及時聯(lián)系我們御吞。
③ 細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3小時麦箍，在倒置顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)妆棒，給細(xì)胞（100倍×2張护侮，200倍×2張）以及培養(yǎng)瓶（外觀×1張）拍照留存，售后時肯定需要提供割岛。
④ 瓶內(nèi)充液培養(yǎng)基（運(yùn)輸培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞揍诽，需按照說明書上的培養(yǎng)條件配制新鮮完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞诀蓉。
⑤ 鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，收集全部充液培養(yǎng)基暑脆，250g離心5分鐘渠啤，棄去培養(yǎng)瓶中充液培養(yǎng)基，用新鮮配制的完全培養(yǎng)基重懸未貼壁的細(xì)胞添吗，將細(xì)胞鋪瓶至新的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶沥曹，補(bǔ)齊完全培養(yǎng)基至6mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)碟联。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上妓美，立刻對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。
注：在快遞運(yùn)送過程中細(xì)胞因振動會造成脫落現(xiàn)象鲤孵，不論繼續(xù)培養(yǎng)還是傳代壶栋，未貼壁的細(xì)胞均需離心回收。
⑥ 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 普监，保種1支委刘，另外1支傳代至T25新瓶，前3代建議均采用1:2傳代鹰椒，若細(xì)胞明顯達(dá)到對數(shù)期锡移，1:2傳代后第二天就長滿，則可提高傳代比例漆际，采用1:3傳代淆珊，前面代次建議代代保種，以妨出現(xiàn)問題后無種可用奸汇。
⑦ 由于細(xì)胞在運(yùn)輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時間顛簸施符，收到細(xì)胞進(jìn)行傳代后往声，建議前3-5代培養(yǎng)條件可適當(dāng)提高血清含量以促進(jìn)恢復(fù)細(xì)胞原有狀態(tài)并縮短到達(dá)對數(shù)期的時間。
⑧ 市面上血清魚龍混雜戳吝，假血清（BSA或替代物冒充血清）浩销、劣質(zhì)血清（小牛冒充胎牛）、水貨（國產(chǎn)冒充進(jìn)口）屢見不鮮听哭，若客戶培養(yǎng)細(xì)胞過程中明顯感覺細(xì)胞生長速度不及預(yù)期慢洋，且無法更換血清，建議酌情提高血清含量來彌補(bǔ)血清質(zhì)量的缺陷陆盘，以期提高細(xì)胞生長速度普筹。
⑨實驗結(jié)束后，將臺子內(nèi)的細(xì)胞放回培養(yǎng)箱隘马，試劑放回冰箱太防，最后噴灑Deeming實驗室安全衛(wèi)士，預(yù)防微生物污染酸员，關(guān)閉生物安全柜蜒车，打開紫外滅菌30分鐘以上。
特別提醒：
1.復(fù)蘇的細(xì)胞千萬千萬別放冰箱幔嗦，冷凍冷藏都不可以酿愧，這是活細(xì)胞，不是試劑崭添，切記Ｔ⒚洹Ｅ寻薄呼渣！
2.由于大部分的細(xì)胞系比較容易培養(yǎng)，以致于”問題血清“不能被及時發(fā)覺寞埠，但部分細(xì)胞對于血清品質(zhì)有嚴(yán)格要求屁置，用“問題血清“培養(yǎng)細(xì)胞極易造成細(xì)胞脫落、死亡仁连，務(wù)必要擦亮眼睛蓝角，選擇靠譜的血清供應(yīng)商。
2饭冬、對于凍存細(xì)胞
① 收到快遞后使鹅，若發(fā)現(xiàn)凍存管破損、箱內(nèi)已無干冰昌抠，請拍照后及時聯(lián)系供貨商患朱。
② 收到細(xì)胞后請盡快復(fù)蘇，給凍存管（外觀×1張）拍照留存炊苫，隔天在倒置顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)裁厅，給細(xì)胞（100倍×2張冰沙，200倍×2張）拍照，售后時需提供执虹。
③ 復(fù)蘇細(xì)胞時不可直接將凍存管丟進(jìn)水浴鍋拓挥，用鑷子夾住凍存管頂部，將凍存管下部浸入水中即可袋励，由于水浴鍋處于實驗室暴露侥啤、高溫、濕潤環(huán)境插龄，極易滋生各種微生物愿棋，建議在水浴鍋中加入Deeming水浴鍋安全衛(wèi)士抑制各類微生物的滋生，最大程度上防止水浴鍋中的微生物對凍存細(xì)胞造成的污染均牢。
④ 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作徘跪，凍存管甘邀、試劑、耗材拿進(jìn)去之前一定要用75%酒精消毒垮庐，培養(yǎng)試劑盡量不要共用松邪，若有共用試劑，建議配成完培后整體過濾除菌哨查。
⑤ 原代細(xì)胞傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 逗抑，保種1支，另外1支傳代至T25新瓶寒亥，前面代次建議代代保種邮府，以妨出現(xiàn)問題后無種可用，原代細(xì)胞需根據(jù)生長狀況判斷傳代比例溉奕。
⑥ 第一次傳代時需要摸索消化時間褂傀，建議每隔30s就觀察一次，并記錄消化時間加勤，細(xì)胞會隨著后期傳代次數(shù)的增多而延長消化時間仙辟。
⑦ 由于細(xì)胞在運(yùn)輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時間顛簸，收到細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇后鳄梅，前1-2代培養(yǎng)可適當(dāng)提高血清含量以促進(jìn)恢復(fù)細(xì)胞原有狀態(tài)并縮短到達(dá)對數(shù)期的時間叠国。
⑧ 原代細(xì)胞建議選用廠家供應(yīng)的專用培養(yǎng)基，否則可能會因為改變培養(yǎng)條件戴尸，大大縮短細(xì)胞的培養(yǎng)代數(shù)粟焊，造成種子細(xì)胞的浪費(fèi)。
⑨ 及時更換和補(bǔ)充培養(yǎng)箱水盤內(nèi)的水，建議加入Deeming細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤安全衛(wèi)士進(jìn)行污染物的預(yù)防吆玖。
⑩ 購買的細(xì)胞只可用于科研，不得應(yīng)用于人體（之前有寶子買MSC想用來喝或者回輸沾乘，據(jù)說看了營銷號說可以強(qiáng)身健體怜奖，這個絕對不可以昂，應(yīng)用人體的細(xì)胞屬于藥物翅阵，需要進(jìn)行人體使用的臨床驗證歪玲，請大家一定理性看待，勿信傳言）掷匠。
