?1.CRISPR-Cas9技術(shù)原理：
crRNA（ CRISPR-derived RNA ）通過堿基互補配對與 tracrRNA （trans-activating RNA ）結(jié)合形成 tracrRNA/crRNA 復(fù)合物着降，此復(fù)合物引導(dǎo)核酸酶 Cas9 蛋白在與 crRNA 配對的序列靶位點剪切雙鏈 DNA樱溉。而通過人工設(shè)計這兩種 RNA，可以改造形成具有引導(dǎo)作用的sgRNA （singleguide RNA ）蝇棉，足以引導(dǎo) Cas9 對 DNA 的定點切割。切割的位點位于crRNA互補序列下游附近的PAM區(qū)（前間區(qū)序列附近motif），切除基因后激活體內(nèi)的修復(fù)機制，包括同源重組修復(fù)和非同源末端連接峦剔，或者人為的引入該目的基因的同源序列。切除的目的基因被Cas9降解角钩。
2：嘌呤霉素的作用是篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系
3：MOI（感染復(fù)數(shù)）：
