“Lactucopicrin Inhibits Cytoplasmic Dynein-Mediated NF-kB Activation in?Inflammated Macrophages and Alleviates Atherogenesis in Apolipoprotein E-Deficient Mice”
Key words: Lactucopicrin津函；Dynein蛾号；NF-kB activation； Inflammated macrophages蔗候；Atherogenesis
文章簡介
①發(fā)表期刊：2021年1月22日發(fā)表于《Molecular Nutrition & Food Research》，JCR分區(qū)：Q1懦尝，IF=5.309
②原文鏈接：He L, Weng H, Li Q, Shi G, Liu X, Du Y, Zheng J, Ling W, Wang D. Lactucopicrin Inhibits Cytoplasmic Dynein-Mediated NF-κB Activation in Inflammated Macrophages and Alleviates Atherogenesis in Apolipoprotein E-Deficient Mice. Mol Nutr Food Res. 2021 Feb;65(4):e2000989. doi: 10.1002/mnfr.202000989. Epub 2021 Jan 22. PMID: 33377310.
研究背景
動脈粥樣硬化（AS）性心血管疾病作為全球人口死亡的重大疾病之一乍桂，其發(fā)病常與營養(yǎng)膳食不均密切相關沪猴。因此图谷，人們通過攝入可降低AS發(fā)病風險的含非營養(yǎng)素成分的果蔬來防控AS的發(fā)生蚌本、發(fā)展嵌莉。
有研究證實，巨噬細胞炎癥是AS發(fā)病的重要因素蚕涤，且受NF-kB(p50尸曼、p65亞基)異二聚體調控冒签。在休眠期的巨噬細胞中，胞漿中的NF-kB與其抑制劑IkBα結合，但當巨噬細胞遭受促炎因子刺激時，IkB激酶（IKK）被激活，進而使IkBα磷酸化琳水，導致IkBα發(fā)生泛素化及蛋白酶體降解淮摔；NF-kB被釋放后五辽，NF-kB核定位序列暴露建丧，由胞漿動力蛋白Dynein將NF-kB以負極運動方向運輸至胞質蛋白importin-??5上叁熔，importin-??5護送NF-kB從胞質向核內(nèi)轉移委乌，啟動多個基因的轉錄，例如促炎因子IL-1β荣回、TNF-α的表達遭贸，那么，抑制巨噬細胞中NF-kB激活可能是治療AS的潛在途徑心软。倍半萜類化合物山萵苣苦素（Lactucopicrin壕吹，LCP）作為一種分布于菊科蔬菜生菜、菊科藥用植物菊苣中的苦味物質删铃，具抗瘧耳贬、抗癌、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜等藥理活性猎唁，但其對AS的影響未見報道咒劲。故中山大學公共衛(wèi)生院王冬亮教授團隊基于RAW264.7巨噬細胞模型和ApoE基因敲除小鼠模型探討LCP對AS的影響及功能機制。
科學問題
LCP是否具有抗動脈粥樣硬化作用？其發(fā)揮功能的分子機制是怎樣的腐魂？
技術路線
To evaluate the impact of lactucopicrin on macrophage inflammation and theformation of early atherosclerosis.
Results
①Lactucopicrin?Reduces NF-??BActivities in Inflammated Macrophages.
②Lactucopicrin?does not Modulate the Upstream Components of the Canonical NF-??B Pathway and NF-??B/p65 DNA Binding Activity in Inflammated Macrophages.
③Lactucopicr inInhibits p65 Nuclear Translocation in Inflammated Macrophages.
④Lactucopicr inInhibits p65 Nuclear Translocation by Down regulation of Cytoplasmic Dynein-Mediated Transport of p65 in Inflammated Macrophages.
⑤Lactucopicr inInhibits Early Atherosclerosis Formation in ApoE–/–Mice.
⑥Lactucopicrin?Reduces NF-??B Activities in Macrophages within Atherosclerotic Plaques in ApoE–/–Mice.
三人行必有我?guī)熝?/b>
小知識匯總啦Ｄ降摹！挤渔！
1）NF-kB同源/異源二聚體，由兩類亞基組成风题，分別是：①p65(Rel A)判导、RelB、c-Rel沛硅；②p50眼刃、p52，常見組成：p65/p50摇肌，p65/p65擂红；
2）BMDMs分離于8周齡C57BL/6J小鼠；
3）DTT：二硫蘇糖醇围小，是巰基化DNA的還原劑和去保護劑昵骤，可降低DNA的二聚化，裂解蛋白質分子間的二硫鍵肯适，在本研究中作為一種蛋白烷基化抑制劑变秦；
4）In Vitro Toxicity Assay Kit (Sigma–Aldrich)：檢測細胞培養(yǎng)上清；
5）Luciferase Reporter Assay：pNF-??B luciferase reporter vectors 和 internal
control of Renilla-luciferase reporter vectors構建框舔，經(jīng)細胞轉染試劑Lipofectamine 2000 reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA)轉染至BMDMs蹦玫，24h后，細胞裂解刘绣，由Dual-Luciferase Reporter Assay kit (Promega)檢測NF-??B活性樱溉；
6）whole-cell, cytoplasmic, or nuclear lysates were
isolated using a Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction kit (Thermo Fisher Scientific)；
7）??-Actin常作為胞質蛋白內(nèi)參纬凤，histone H3 作為核蛋白的內(nèi)參福贞；
8）RT-qPCR試劑盒三件套：①RNA提取（RNeasy Kits(Qiagen, Hilden, Germany)移斩；②反轉錄（SuperScript III kit (Invitrogen) using random primers）肚医；③熒光探針標記（iQ SYBR Green Supermix (Bio-Rad, Hercules, CA)；注：常以gapdh基因作內(nèi)參向瓷；
9）炎癥因子ELISA試劑盒：IL-1?? (MHSLB00), TNF-?? (MTA00B), IL-6 (M6000B) quantitative ELISA kits
(R&D Systems, Minneapolis, MN)肠套；
10）DNA-Binding Activity of Nuclear p65：TransAM
NF-??B p65 ELISA kit (Active Motif, Carlsbad, CA)；
11）抗體訂購：CD68(rat, 14–0681-82, Invitrogen),F4/80(rabbit, ab100790, Abcam),NF-??B/p65(rabbit, ab16502, Abcam), orIL-1?? (rabbit, ab9722, Abcam)猖任，AlexaFluor 647 anti-rat IgG (Invitrogen) orAlexa Fluor 488 anti-rabbit IgG(Invitrogen)
12）血清總膽固醇及甘油三酯檢測：commercial enzyme kits (Applygen, Beijing, China)你稚。
尋尋覓覓，彼此共成長，我們繼續(xù)看世界刁赖！
