越來越多的證據(jù)表明 N6-甲基腺苷 (m6A) 在癌癥進(jìn)展中起著至關(guān)重要的作用挠他。因此，我們旨在探索 m6A 相關(guān)基因在口腔鱗狀細(xì)胞癌 (OSCC) 中的預(yù)后相關(guān)性。首先漠其，從癌癥基因組圖譜（TCGA）下載表達(dá)譜，然后提取 m6A 相關(guān)基因竿音。然后和屎，使用聚類分析和主成分分析（PCA）分析 m6A 相關(guān)基因。差異表達(dá)分析在R軟件中進(jìn)行春瞬。此外柴信，構(gòu)建了風(fēng)險模型，并選擇了關(guān)鍵的 m6A 基因來探索其在 OSCC 細(xì)胞中的生物學(xué)效應(yīng)宽气。共提取13個m6A相關(guān)基因随常，鑒定出8個差異表達(dá)基因。隨后萄涯，基于 m6A 的聚類顯示了具有不同臨床結(jié)果的 2 個亞型绪氛。此外，成功建立風(fēng)險模型涝影。通過單變量和多變量 cox 回歸分析钞楼，在 13 個 m6A 相關(guān)基因中，只有異質(zhì)核核糖核蛋白 C (HNRNPC) 可能是獨(dú)立的生物標(biāo)志物和 OSCC 中不利的總生存期袄琳。功能研究表明询件，HNRNPC 的過表達(dá)通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 (EMT) 促進(jìn)了 OSCC 的癌變∷舴總之宛琅，建立了OSCC中m6A相關(guān)基因的風(fēng)險模型。隨后逗旁，HNRNPC被證明可促進(jìn)OSCC的致癌作用嘿辟，是OSCC的獨(dú)立生物標(biāo)志物預(yù)后生物標(biāo)志物舆瘪，表明它可能是OSCC的新生物標(biāo)志物和治療靶點。
m6A相關(guān)基因的鑒定差異表達(dá)分析
OSCC中M6A相關(guān)基因的表達(dá)水平和相關(guān)性红伦。（A）基于TCGA數(shù)據(jù)庫的317個OSCC樣本和32個正常對照m6A表達(dá)水平英古。N代表正常對照，而T代表腫瘤樣本昙读。差異在 p <0.05 * 處被認(rèn)為是顯著的召调；p <0.01；p <0.001*蛮浑。熱圖中升序的標(biāo)準(zhǔn)化表達(dá)水平從綠色到紅色唠叛。( B ) 13 個 m6A 相關(guān)基因的差異表達(dá)分析。藍(lán)色代表正常對照沮稚，而紅色 OSCC 樣品艺沼。（C）13個m6A相關(guān)基因之間的相關(guān)性。圖中上升的歸一化相關(guān)水平從藍(lán)色到紅色蕴掏。
基于 M6A 的聚類顯示 OSCC 的 2 種亞型
基于 m6A 相關(guān)基因的聚類分析障般。( A , B ) 聚類分析表明 TCGA 中的 317 個 OSCC 樣本可分為 2 組。（C）cluster1 和2 之間的生存分析盛杰。（D）在聚類分析的基礎(chǔ)上進(jìn)行主成分分析剩拢。PCA1代表主成分分析1，而PCA2代表主成分分析2饶唤。（E）聚類分析與臨床特征的相關(guān)性（等級徐伐，p=0.0352）。N代表TNM系統(tǒng)中的N分類募狂，T代表TNM系統(tǒng)中的T分類办素。
cox回歸模型的建立
cox回歸模型的構(gòu)建。（A）基于風(fēng)險評分水平和臨床特征在 R 軟件中執(zhí)行的熱圖（等級 p=0.003）祸穷。N代表TNM系統(tǒng)中的N分類性穿，T代表TNM系統(tǒng)中的T分類。( B ) 基于風(fēng)險評分的生存分析雷滚。( C ) 分化等級的風(fēng)險評分分布需曾。y 軸代表風(fēng)險評分水平，x 軸代表不同的等級（grade1 vs Grade2祈远，p=0.0002呆万；grade1 vsgrade3+4，p=0.0001）车份。( D , E ) 根據(jù)風(fēng)險評分和臨床特征進(jìn)行單變量 cox 回歸和多變量 cox 回歸谋减。N代表TNM系統(tǒng)中的N分類，T代表TNM系統(tǒng)中的T分類扫沼。
HNRNPC 促進(jìn) OSCC 增殖出爹、遷移庄吼、侵襲和 EMT（上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化）
HNRNPC 促進(jìn) OSCC 細(xì)胞系的增殖。( A ) Si-HNRNPC 抑制 scc15 細(xì)胞系中的細(xì)胞增殖（48 小時 p=0.0002严就，72 小時 p<0.0001）总寻。( B ) Si-HNRNPC 抑制 scc25 細(xì)胞系中的細(xì)胞增殖（48 小時 p=0.0001，72 小時 p=0.0073）梢为。( C ) HNRNPC 的過表達(dá)促進(jìn)了 scc9 細(xì)胞系的增殖（48 小時 p=0.0021渐行，72 小時 p=0.0035）。( D ) HNRNPC 的過表達(dá)促進(jìn)了 cal27 細(xì)胞系的增殖（48 小時 p=0.0018抖誉，72 小時 p=0.0022）殊轴。
檢測遷移和入侵能力衰倦。（A袒炉，B）在scc15細(xì)胞系和cal27細(xì)胞系中檢測到遷移和侵襲能力。HNRNPC的過表達(dá)促進(jìn)了OSCC細(xì)胞的遷移和侵襲樊零，而HNRNPC的敲低則相反我磁。（C，D）用Westernbolt測定檢測EMT標(biāo)記驻襟。EMT通路的激活加速了OSCC的遷移和侵襲夺艰。
OSCC 細(xì)胞系中的劃痕愈合試驗。劃痕愈合試驗用于評估scc15細(xì)胞系（A沉衣，p=0.0079）郁副、scc25細(xì)胞系（B，p=0.0136）豌习、cal27細(xì)胞系（C存谎，p=0.0068）和scc9細(xì)胞系（D， p = 0.0066）肥隆。
