做定量前應(yīng)該做預(yù)實(shí)驗(yàn)盒齿，確定一個(gè)合理的模板濃度范圍。15到35CT比較合理生宛，超過(guò)35個(gè)CT那么就算它沒(méi)有擴(kuò)增了县昂，如果15之前起峰，那么就是模板濃度太高所引起的
最好做4個(gè)組陷舅，分析的時(shí)候再選取其中3個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)分析
一倒彰、計(jì)算
1、簡(jiǎn)要流程
a.按下列格式整理數(shù)據(jù)
按基因整理到一起莱睁，18s(內(nèi)參基因）另起一列
1648522970(1).png
b.計(jì)算Ct內(nèi)參基因平均
c.Ct每個(gè)基因（包括內(nèi)參基因）-Ct內(nèi)參基因平均,得出ΔCt值
d.計(jì)算對(duì)照組ΔCt均值
e.每個(gè)基因ΔCt-對(duì)照ΔCt均值待讳，得出ΔΔCt值
f.插入power公式，計(jì)算2-ΔΔCt值（這是一個(gè)冪函數(shù)仰剿，是2的-ΔΔCt次方)
number填: 2
power填: -選中ΔΔCt值所在的格
image.png
2创淡、具體解釋
qRT-PCR熒光定量數(shù)據(jù)分析（2 -ΔΔCt法）
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qRT-PCR熒光定量數(shù)據(jù)分析（2-ΔΔCt法） - 百度文庫(kù) (baidu.com)
二、繪圖
使用軟件：GraphPad Prism
以下是下載及安裝教程南吮，采用第二種方法琳彩，注意保證此軟件始終連接不到網(wǎng)絡(luò)
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