細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（Wound Healing）是一種操作簡單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外實(shí)驗(yàn)方法。
這種方法的原理是——當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時(shí)录语，在融合的單層細(xì)胞上劃痕工具制造一個(gè)空白區(qū)域坚踩，空白區(qū)域的細(xì)胞被機(jī)械力去除掉了，通過一段時(shí)間的培養(yǎng)踪危，觀察細(xì)胞向無細(xì)胞區(qū)域遷移的情況，通過測量細(xì)胞的遷移距反映細(xì)胞的遷移能力猪落。
細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的用途及優(yōu)點(diǎn)
用途：
腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)常用研究方法贞远。這種方法的原理是，當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時(shí)笨忌，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域蓝仲，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合官疲「そ幔基本的步驟包括“劃痕”的制造，細(xì)胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理途凫。
優(yōu)點(diǎn)：
1.在一定程度上模擬了體內(nèi)細(xì)胞遷移的過程垢夹。
2.非常適合研究細(xì)胞與胞外基質(zhì)（ECM），細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用引起的細(xì)胞 遷移维费。
3.與包括活細(xì)胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容果元，可用于分析細(xì)胞間的相互作用。
4.研究細(xì)胞遷移的體外實(shí)驗(yàn)中最簡單的方法犀盟。
Culture Insert方法
1.準(zhǔn)備細(xì)胞而晒，培養(yǎng)液，culture Insert阅畴。
2.如圖倡怎，將細(xì)胞接種于Dish中間的Insert，細(xì)胞長滿Insert區(qū)域后用鑷子移除Insert即可產(chǎn)生500μm寬度的劃痕。
3.每隔4-6小時(shí)拍照記錄监署。
4.根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果颤专。
常用實(shí)驗(yàn)方法
實(shí)驗(yàn)材料:
1.細(xì)胞培養(yǎng)平板，一般使用6孔板钠乏，大小合適血公，便于劃線和觀察；
2.marker筆缓熟，用于觀察標(biāo)記；
3.直尺摔笤，用于觀察時(shí)對(duì)細(xì)胞劃痕寬度測量够滑；
4.20 微升槍頭（滅菌）或者經(jīng)過滅菌處理的牙簽均可，用于在單層細(xì)胞上劃痕吕世；
5.無血清培養(yǎng)基
6.PBS
注：所有能滅菌的器械都要滅菌彰触，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min（超凈臺(tái)內(nèi)）
實(shí)驗(yàn)步驟：
1.培養(yǎng)板劃線?
首先使用 marker筆在6孔板背后，用直尺比著命辖，均勻的劃橫線况毅，大約每隔 0.5~1cm一道，橫穿過孔尔艇。每孔至少穿過5條線尔许。劃線時(shí)注意線不要太粗 。
2.鋪細(xì)胞?
在孔中加入約 5×10^5個(gè)細(xì)胞（不同的細(xì)胞數(shù)量有所不同终娃，根據(jù)細(xì)胞的生長快慢調(diào)整）味廊，接種原則為過夜后融合率達(dá)到 100%。
3.細(xì)胞劃線
第二天用槍頭或者無菌牙簽棠耕，垂直與細(xì)胞平面余佛，沿著頭一天劃在平板背面的線在細(xì)胞層上進(jìn)行劃痕(不同孔之間最好使用同一只槍頭或牙簽)。
4.洗細(xì)胞?
劃痕完成后窍荧，使用無菌 PBS 洗細(xì)胞 3 次辉巡，洗去不貼壁的細(xì)胞，即劃線時(shí)劃線的細(xì)胞蕊退，是劃線后留下的間隙清晰可見郊楣，然后更換新鮮無血清培養(yǎng)基。
5.細(xì)胞培養(yǎng)咕痛、觀察?
將細(xì)胞放入 37℃ 5%?CO2培養(yǎng)箱痢甘，培養(yǎng)。然后在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間點(diǎn)茉贡，如 0塞栅，6，12，24h 取出細(xì)胞放椰，顯微鏡線觀察并測量劃痕的寬度作烟，并拍照(具體時(shí)間依實(shí)驗(yàn)需要而定)。
6.結(jié)果分析?
使用 Image J 軟件打開圖片后砾医，隨機(jī)劃取 6 至8 條水平線拿撩，計(jì)算細(xì)胞間距離的均值。
注: (1)實(shí)驗(yàn)時(shí)如蚜，選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞貼壁率压恒；
? ? ?(2)劃線后，通常采用無血清或低血清（＜ 2%）的培養(yǎng)液错邦。
注意事項(xiàng)
1. 鋪細(xì)胞最好使用6孔板探赫，因?yàn)?孔板可以保證有相當(dāng)距離的平直劃痕，而且因?yàn)橛? 條定位線撬呢，與劃痕相交伦吠，這樣就有10個(gè)可固定監(jiān)測點(diǎn)，不作重復(fù)魂拦，誤差也很小毛仪。
2. 如果你連續(xù)監(jiān)測 24 小時(shí)，你需要考慮到劃痕縮小是細(xì)胞遷移和細(xì)胞繁殖共同作用的結(jié)果芯勘，而不是單純的細(xì)胞遷移箱靴。如果你要單純的考慮細(xì)胞遷移，你可以先用絲裂霉素（1 μg/ml）處理一小時(shí)荷愕，抑制細(xì)胞的分裂刨晴，這樣你的結(jié)果就是細(xì)胞遷移的作用了。另外路翻，使用無血清培養(yǎng)基也可以降低增殖對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響狈癞。
3.照片拍完之后，可以用 image J 來測量劃痕區(qū)域的像素定量比較細(xì)胞遷移的速度茂契。
4.雖然無血清培養(yǎng)可以忽略細(xì)胞增殖的影響蝶桶，但是由于細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)整體性的下調(diào)節(jié)，細(xì)胞遷移的速度也會(huì)慢很多掉冶。
