從擬南芥的T0123代獲得純合株系胡嘿,轉(zhuǎn)基因必經(jīng)之路!

作為模式生物灶平,擬南芥(Arabidopsis?thaliana)主要有以下幾方面的優(yōu)勢(shì):

? ?? ?第一伺通,擬南芥的基因組在常見(jiàn)的植物模型中是最小的逢享,染色體數(shù)目也很少吴藻,只有五對(duì)同源染色體。

? ?? ?第二沟堡,植株體積小,對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性強(qiáng)禀横,生活周期短粥血,繁殖能力強(qiáng),播種到收種需要兩個(gè)月左右复亏。

? ?? ?第三,自然條件下抬闷,擬南芥是嚴(yán)格的閉花自花傳粉耕突,基因高度純合评架,易穩(wěn)定遺傳炕泳,強(qiáng)可誘變性。

? ?? ?第四喊崖,擬南芥研究的相關(guān)遺傳手段和生化分子技術(shù)都已經(jīng)比較成熟荤懂。

? ?? ?第五茁裙,豐富的種質(zhì)資源节仿。運(yùn)用高通量轉(zhuǎn)化技術(shù)得到的T-DNA插入的突變體庫(kù),已經(jīng)鑒定的獨(dú)立的T-DNA插入株矾瘾,幾乎覆蓋了所有的編碼基因箭启。

健康生長(zhǎng)的時(shí)候還是蠻可愛(ài)的

獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥T0代:

日常使用浸花法(floral dip method)(Clough等,1998)轉(zhuǎn)化擬南芥放妈。將擬南芥的花序放到含有農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化介質(zhì)中浸泡3~5分鐘荐操,在轉(zhuǎn)化介質(zhì)的幫助下,農(nóng)桿菌可以穿過(guò)植物細(xì)胞壁和質(zhì)膜托启,侵染雌配子體即胚囊,并將帶有目的基因和元件的T-DNA片段整合到雌配子的基因組上(Desfeux等拐迁,2000; Bent A, 2006)肩民。

T1T2T3獲得純合株系:

1.野生型擬南芥,稱(chēng)為T(mén)0代持痰,經(jīng)過(guò)侵染之后,而從T0代上收集到的種子是T1代種子(混合收種)

2.將T1代種子鋪種在含有抗生素的MS培養(yǎng)基上割卖,直接篩選出轉(zhuǎn)基因T1代陽(yáng)性的幼苗,移栽到穴盤(pán)鹏溯,悉心呵護(hù),收集到T2代種子(單株收種)肺孵。需要注意的是颜阐,T1代均為雜合子,但是并不確定是單拷貝或是多拷貝插入凳怨。

3.將T2代種子鋪種在含有抗生素的MS培養(yǎng)基上,此時(shí)陽(yáng)性苗:陰性苗(未發(fā)芽的種子不計(jì)入)如果符合3:1的分離比紫新,則目的基因以單拷貝插入李剖,將其中的陽(yáng)性苗移栽,同樣悉心呵護(hù)敲董,收集T3代種子(單株收種)慰安。不符合3:1則可能有多個(gè)拷貝插入不同位點(diǎn)(多拷貝插入往往會(huì)引起基因沉默現(xiàn)象聪铺,扔了算了)化焕。

4.將T3代種子鋪種在含有抗生素的MS培養(yǎng)基上,一段時(shí)間之后铃剔,你發(fā)現(xiàn)某個(gè)培養(yǎng)皿里全是陽(yáng)性苗撒桨,恭喜!你拿到了自己的轉(zhuǎn)基因純合株系键兜。

沒(méi)錯(cuò)凤类,是我的崽

實(shí)用tips:

種子滅菌消毒,越到后面的時(shí)候普气,培養(yǎng)基上種子的?密度?要控制好谜疤,有能力的話(huà)最好做到粒粒分明,方便統(tǒng)計(jì)。

每次播種不要全部播完夷磕,給自己留條后路履肃。你永遠(yuǎn)不知道自己會(huì)不會(huì)碰到配錯(cuò)培養(yǎng)基坐桩,抗生素加錯(cuò),培養(yǎng)基污染膘螟,疫情開(kāi)不了學(xué)苗子活活旱死等各種狀況(血淚控訴)碾局。


1篇相關(guān)文獻(xiàn),感興趣可以康康:唐微.幾個(gè)轉(zhuǎn)基因植株后代的遺傳分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007(31):9867-9868.

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