1984年肖抱，HUVEC細(xì)胞株由Hiroyoshi Hoshi、Wallace L.Mckeehan從一段長(zhǎng)約10-20cm的人正常臍帶靜脈中獲取瓶蚂、建立强霎。
SetsukoShioda等人研究發(fā)現(xiàn)，HUVEC細(xì)胞株18-30代的倍增時(shí)間為23.5個(gè)小時(shí)闷旧，24-27代的倍增時(shí)間為67個(gè)小時(shí)长豁，27-30代的倍增時(shí)間為84個(gè)小時(shí)，32-34代的倍增時(shí)間為100個(gè)小時(shí)忙灼。培養(yǎng)至40代后匠襟，細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)多樣化，有些細(xì)胞變大或變小该园，有些細(xì)胞出現(xiàn)多核酸舍；細(xì)胞密度下降、倍增時(shí)間延長(zhǎng)里初。最后細(xì)胞在第54代停止生長(zhǎng)啃勉，ATCC的預(yù)期壽命也顯示在50-60代。
2018年双妨，Setsuko Shioda等人發(fā)現(xiàn)HUVEC細(xì)胞株（passage 31）在貼壁匯合時(shí)細(xì)胞與細(xì)胞之間存在間隙淮阐，這與典型的內(nèi)皮細(xì)胞特征有所不同。
細(xì)胞復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍刁品，加入4 mL培養(yǎng)基混合均勻泣特。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液哑诊，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻群扶。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm器皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基镀裤，培養(yǎng)過(guò)夜）竞阐。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞凍存
凍存條件
60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO暑劝，液氮儲(chǔ)存
【推薦海星HyCyte?一步凍存液(即用型骆莹、無(wú)血清、無(wú)需程序降溫)】
細(xì)胞凍存步驟
1. 待細(xì)胞生長(zhǎng)至可傳代的密度担猛，即可準(zhǔn)備凍存幕垦。
2. 消化細(xì)胞丢氢，取少量細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)。細(xì)胞懸液經(jīng)250 g離心4 min先改。
3. 離心后去除上清疚察，用適量4℃預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞。將細(xì)胞按比例或數(shù)量分裝至凍存管中仇奶。一般凍存密度為(1.0~2.0)×106個(gè)/mL貌嫡。
? ? 注意:?細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間在非培養(yǎng)條件下放置會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞的狀態(tài)。如離心后用凍存液重懸計(jì)數(shù)该溯，請(qǐng)將細(xì)胞放置于4℃冰箱內(nèi)岛抄，以減弱細(xì)胞代謝，較好的保持細(xì)胞狀態(tài)狈茉。
4. 如使用海星一步凍存液夫椭，凍存管直接豎直放入-80℃冰箱即可完成“一步”凍存。如使用程序凍存液氯庆，需將凍存管放入提前預(yù)冷的程序降溫盒后放入-80℃冰箱蹭秋。
5. 24小時(shí)后可將凍存管轉(zhuǎn)移到液氮進(jìn)行長(zhǎng)期保存。
? ??注意:?細(xì)胞不可長(zhǎng)期保存在-80℃冰箱中堤撵。建議24 h后盡快轉(zhuǎn)移至液氮中感凤。
細(xì)胞培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基：內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋5% FBS＋1%內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑+1% P/S
推薦傳代比例：1:3-1:4，每2-3天換液一次
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO?粒督，溫度：37℃
傳代操作
細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)禽翼。
1. 預(yù)熱完全培養(yǎng)基屠橄、胰酶、PBS
2. 棄去培養(yǎng)上清闰挡，用不含鈣锐墙、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
3. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA 貨號(hào): GUTP-R001）于培養(yǎng)瓶中长酗，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘溪北，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落夺脾，迅速拿回操作臺(tái)之拨，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
4. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基咧叭，輕輕打勻后吸出蚀乔，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液菲茬，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻吉挣。
5. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中派撕。
HUVEC 培養(yǎng)要點(diǎn)
1. 該細(xì)胞為有限傳代細(xì)胞系，在體外培養(yǎng)可傳20代睬魂。請(qǐng)注意代次控制终吼。
2. 該細(xì)胞培養(yǎng)難度較高，建議使用專(zhuān)用培養(yǎng)基氯哮。
3. 永生化的人臍靜脈內(nèi)皮培養(yǎng)體系：內(nèi)皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋5% FBS＋1%內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑+1% P/S际跪。
推薦使用海星人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基，貨號(hào)：TCH-G406蛙粘。
4. 如選擇使用其它品牌培養(yǎng)基垫卤，可選：
（1）內(nèi)皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基推薦：ScienCell（Cat.No.1001）
基本成分介紹：永生化的人臍靜脈內(nèi)皮培養(yǎng)體系是專(zhuān)門(mén)為血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)設(shè)計(jì)的最適于其生長(zhǎng)的完全培養(yǎng)基。包含必需和非必需氨基酸出牧、維生素穴肘、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物、激素舔痕、生長(zhǎng)因子评抚、微量礦物質(zhì)和低濃度胎牛血清(5%)。該培養(yǎng)基的配方能夠選擇性的促進(jìn)正常血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)中的增殖和生長(zhǎng)伯复，并為其達(dá)到最理想營(yíng)養(yǎng)平衡狀態(tài)慨代。
（2）胎牛血清推薦：HyCyte?干細(xì)胞預(yù)篩選胎牛血清 （Cat.No.FBP-S001）
基本成分介紹：適用于有較高要求的細(xì)胞和較難獲得的細(xì)胞，如血管內(nèi)皮細(xì)胞啸如。
（3）內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑推薦：ScienCell（Cat.No.SC1052)
基本成分介紹：內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑(ECGS)是一種從牛腦垂體提取的培養(yǎng)基補(bǔ)充劑侍匙，含有培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞所必需的生長(zhǎng)因子、激素和蛋白質(zhì)叮雳。該補(bǔ)充劑最大限度地促進(jìn)永生化的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的生長(zhǎng)想暗，該因子的添加對(duì)維持永生化的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）形態(tài)至關(guān)重要。
注 意
（1）請(qǐng)務(wù)必使用以上兩種推薦培養(yǎng)體系進(jìn)行永生化的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的培養(yǎng)帘不，否則可能導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)法增殖说莫。
（2）T25瓶細(xì)胞由于運(yùn)輸過(guò)程影響細(xì)胞會(huì)分泌產(chǎn)生的少量小黑點(diǎn)，不是污染問(wèn)題寞焙，屬正炒⑾粒現(xiàn)象，使用專(zhuān)用培養(yǎng)體系進(jìn)行培養(yǎng)后黑點(diǎn)會(huì)逐步減少捣郊。
（3）永生化的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）對(duì)血清的品質(zhì)要求較高辽狈，請(qǐng)使用高品質(zhì)胎牛血清進(jìn)行培養(yǎng)。如細(xì)胞狀態(tài)欠佳模她，建議將胎牛血清的濃度提高到10%稻艰。
