- 培養(yǎng)基里的“四大金剛”—MEM宙帝、DMEM、1640呼胚、F-12
它們基本參與了90%以上種類細胞的培養(yǎng)過程茄唐。
MEM
作為帶頭大哥，能力非常全面蝇更，號稱是應用最廣泛的細胞培養(yǎng)液沪编。
DMEM
作為隨時緊跟老大MEM的二弟，青出于藍而勝于藍年扩，濃度要高出2~4倍蚁廓，可分為高糖型（含葡萄糖4500mg/L）和低糖型（含葡萄糖1000mg/L）。
1640
老三中規(guī)中矩厨幻，營養(yǎng)成分比較簡單相嵌，比DMEM少一點糖和谷光甘肽，常用于淋巴細胞的培養(yǎng)况脆。
F12培養(yǎng)基
起初是作為一種無血清配方設計的饭宾，常補加血清用于支持各種正常的和轉(zhuǎn)化細胞的增殖。F12常和DMEM以I:I結(jié)合格了，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基看铆，作為開發(fā)無血清配方的基礎，以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營養(yǎng)成分的優(yōu)點盛末。
小兄弟F12常用來支持CHO弹惦、Hela和L－細胞生長以及原代大鼠肝細胞和前列腺上皮細胞的培養(yǎng)否淤。MEM和F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2，即可形成神經(jīng)生物學最通用的培養(yǎng)基棠隐。
在此石抡，奉送一個不同細胞系對應的不同培養(yǎng)液的圖，供大家參考助泽。
細胞生長的空間密度是細胞培養(yǎng)的關鍵啰扛。具體養(yǎng)細胞時應該摸索細胞喜歡的生長空間密度，即不能讓細胞瓶里的細胞因擁擠不堪而萎靡不振嗡贺；也不能讓細胞濃度低于1~5×105個/mL而導致“孤獨死”（因為細胞的健康生長需要細胞間的連接）侠讯。因而細胞接種前，要先通過細胞計數(shù)來調(diào)整細胞濃度暑刃。
當培養(yǎng)的貼壁細胞形態(tài)不好時厢漩，可在傳代時，先倒掉舊的培養(yǎng)基岩臣，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清都可以）洗滌一次溜嗜，用滴管吸走，再加入3ml培養(yǎng)基架谎，沿著瓶底輕輕吹打一遍炸宵，然后吸走。這時再正式進行消化谷扣、吹打土全。
其次，把吹打下的細胞懸液加入到含有新培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶內(nèi)会涎，置于培養(yǎng)箱里培養(yǎng)裹匙，按時間點觀察細胞貼壁情況（10min,20min,30min）。而后迅速倒出其中的培養(yǎng)基末秃，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次概页，然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)并觀察細胞生長情況以及形態(tài)。直至找到細胞完美的形態(tài)為止练慕。
至于在培養(yǎng)瓶中加入多少培養(yǎng)基量惰匙，則需要實驗汪們自己去摸索的。對于生長快的細胞铃将，易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基项鬼，細胞形態(tài)會更好，但是要注意對換液時間的把握劲阎。
如何選擇培養(yǎng)瓶：一般绘盟，生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài)，那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好；生長速度快的細胞奥此，用玻璃瓶培養(yǎng)的效果會更好。因此雁比，對于同一種細胞稚虎，在其生長速度慢的時候（比如細胞剛復蘇時或者原代培養(yǎng)），塑料瓶會好一點偎捎；而在其生長旺盛的時候蠢终，玻璃瓶則相對會好一點。
細胞凍存時茴她，蓋子要擰緊寻拂，不然復蘇水浴時會滲水，造成細胞污染丈牢。因而凍存管要選擇原配的管子和蓋子（不同牌子祭钉、型號的管子會有差別），蓋子擰緊后最好用封口膜封住己沛。且每支凍存管都要標上細胞的名稱慌核、凍存時間，并記錄在冊申尼，以免后續(xù)復蘇細胞時垮卓，取錯細胞。
細胞凍存時要嚴格進行梯度降溫（-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮）师幕。要知道冰火兩重天的生活環(huán)境只會讓嬌弱的細胞自爆身亡粟按，謹記：緩降溫！但如果真心趕時間時霹粥，可使用細胞凍存盒進行細胞凍存灭将，而后盡快將其轉(zhuǎn)入液氮中。此外后控，要定期測量液氮罐里的液氮儲備宗侦，以保證細胞全部浸在液面下。
細胞解凍時矾利，由于凍存管管壁較厚、隔熱馋袜，而導致水浴時間太長（2min還沒融化）時男旗，可以將水浴鍋的溫度調(diào)至40℃左右察皇，可以縮短解凍時間矾缓。
提前預定超凈臺嗜闻，減少復蘇后插在冰盒里等待的時間琉雳，可避免細胞房人滿為患，超凈臺使用緊張友瘤，復蘇1h后翠肘，還沒有加入新的培養(yǎng)液。（高濃度DMSO防止胞內(nèi)形成冰晶辫秧，凍存時保護細胞束倍，但復蘇融解后，浸泡時間太久會對細胞有毒性）
復蘇細胞時一定要有耐心盟戏，因為有些細胞在復蘇一星期后才會真正有起色肌幽。因而，盡管細胞在復蘇三四天后沒有任何動靜抓半，也不要輕易倒掉所有細胞喂急，要耐心等待，兩周后再做決定笛求。
有關DMSO的一些注意事項：
DMSO能夠快速穿透細胞膜進入細胞中廊移，降低冰點、延緩凍存過程探入，同時提高細胞內(nèi)的離子濃度狡孔、減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少細胞損傷程度蜂嗽。
DMSO在溶解過程中會放熱苗膝，應先與培養(yǎng)基混勻后再加血清，同時凍存液最好提前配置植旧，DMSO現(xiàn)配對細胞的毒性可能更大辱揭；
復蘇時，要離心去除DMSO病附，并用新鮮的培養(yǎng)基洗滌1-2次问窃，注意離心的時候速度不要太快。
細胞培養(yǎng)小技巧今天就講到這里完沪。建議你可以先把這篇文章保存下來域庇，當你遇到問題的時候再來看也許會更有感覺嵌戈。
其實很多時候，我們是不清楚到底是哪方面出現(xiàn)問題的听皿，這個時候就需要一步步去排除可能原因熟呛，切勿盲目地一次性改變多個條件。
轉(zhuǎn)自公眾號：解螺旋
