糖皮質(zhì)激素間接誘導(dǎo)microRNA-708以RaplB為靶標抑制卵巢癌的轉(zhuǎn)移
文獻影響因子：12
一、文獻的研究思路
MicroRNA-708在卵巢癌細胞中表達量很低，當細胞受到糖皮質(zhì)激素（GC）的刺激后，GC誘導(dǎo)GRα結(jié)合到miR-708的啟動子區(qū)促進miR-708的表達杨刨，隨后miR-708與Rap-1B mRNA的3’-UTR區(qū)結(jié)合抑制mRNA翻譯表達木缝，Rap-1B是腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的重要標志蛋白，Rap-1B表達受到抑制后會抑制細胞的轉(zhuǎn)移歪架。
二、核心實驗和結(jié)果
作者首先通過microRNA的表達微陣列和用q-pcr檢測microRNA708的表達篩選出在轉(zhuǎn)移性卵巢癌細胞中異常低表達的miR-708霹陡，后續(xù)研究就是圍繞miR-708進行和蚪。對miR-708的研究作者分別進行功能和機制的研究。
機制實驗的核心包括三個部分的內(nèi)容：
1.是miR-708的表達調(diào)控：作者用DEX處理細胞后檢測miR-708和Odz4 RNA的表達說明miR-708和Odz4共轉(zhuǎn)錄形成烹棉；然后通過ChIP實驗說明糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)GRα結(jié)合到MIR708*基因啟動子上促進miR-708的表達攒霹。
圖A為MIR708和ODZ4基因在基因組上的位置；圖B為用DEX處理細胞后檢測miR-708的Odz4的表達浆洗，兩者的表達受DEX的影響一致催束；圖C為ChIP實驗結(jié)果，說明了DEX處理使GR結(jié)合到基因啟動子上增加伏社。
2.是驗證MiR-708與Rap1B mRNA的3’-UTR互作抑制Rap1B的表達抠刺。如下圖，作者先通過Q-PCR和WB檢測miR-708對Rap1B表達的影響摘昌，然后用熒光素酶實驗進行驗證MiR-708與Rap1B mRNA 4’-UTR的互作關(guān)系速妖。
圖A是生物信息學預(yù)測與Rap1B相關(guān)的microRNA的維恩圖；圖B是q-pcr檢測miR-708轉(zhuǎn)染細胞聪黎、miR-708和其反向互補序列共轉(zhuǎn)染細胞后的Rap1B的mRNA表達罕容；圖C是WB檢測miR-708轉(zhuǎn)染細胞、miR-708和其反向互補序列共轉(zhuǎn)染細胞后的Rap1B蛋白的表達；圖D是3’-UTR熒光素酶實驗锦秒，表明了miR-708通過與Rap1B mRNA的3’-UTR互作抑制蛋白的表達露泊。
3.粘附因子的形成與細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)，本文的第三個核心實驗就是驗證miR-708和Rap1B對細胞粘附因子形成的影響脂崔。作者通過用纖連蛋白包被細胞爬片后的免疫熒光實驗檢測細胞骨架蛋白來監(jiān)測細胞粘附因子的形成情況滤淳，如下圖：
圖A為蛋白免疫熒光實驗的結(jié)果圖；圖B-E為Fas形成的細胞數(shù)量和密度砌左、細胞的傳播脖咐、每個細胞的粘附因子密度的統(tǒng)計，說明了miR-708的表達和Rap1B的敲低度細胞粘附因子形成是負調(diào)控的汇歹。
參考文獻：Kai-Ti Lin,Yu-Ming Yeh,Chi-Mu Chuang,et al. Glucocorticoids mediateinduction of microRNA-708 to suppress ovarian cancer metastasis throughtargeting Rap1B[J].NATURE COMMUNICATIONS,2014,6:5917
