一、測序過程和原理
1.第一代測序技術(shù)---Sanger 法測序
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創(chuàng)始人：Frederick Sanger Frederick Sanger
Sanger在胰島素測序、RNA測序和DNA測序研究方面做出了重要貢獻吏口，并因此兩次獲得諾貝爾化學(xué)獎（1958和1980）浇揩。
- Sanger測序原理介紹：
接下來將DNA聚合酶抄淑，四個基本堿基的原料（dNTP）還有特異性的ddNTP分別加入這四個反應(yīng)容器中，每個反應(yīng)容器中只加入一種ddNTP驰后。
特異性的ddNTP就是一種變異過的堿基肆资，也有四種稱之為A,T,C,G,這種特殊的堿基也可以和對應(yīng)的堿基相結(jié)合，A-T,T-A,C-G,G-C倡怎。但是和普通堿基不同的是迅耘，當(dāng)他們和對應(yīng)堿基結(jié)合后贱枣，可以終止后續(xù)的其他結(jié)合监署，就是DNA的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)就結(jié)束了。這就產(chǎn)生很多一邊完整（模板鏈）纽哥，一邊不完整（ddNTP存在的鏈）的DNA分子钠乏。 以黃色容器內(nèi)的反應(yīng)為例，黃色容器中加入了ddATP（A*）
因為有DNA聚合酶春塌，還有堿基原料晓避，還有特殊堿基A*，在這個容器內(nèi)開始了DNA聚合反應(yīng)只壳。
聚合酶將各個堿基連到模板鏈上俏拱，直到特殊堿基結(jié)合到模板鏈上，聚合反應(yīng)終止吼句。由于結(jié)合是隨機產(chǎn)生的锅必，所以特殊堿基A* 會隨機結(jié)合到某個T堿基上。
由于其磷酸鹽主鏈賦予的負(fù)電荷远搪，DNA從負(fù)極開始遷移劣纲，較小較輕長度的DNA進一步遷移到電泳版的底部。
就是我們剛剛提到的谁鳍，由于ddNTP隨機結(jié)合的位置不同癞季，形成的不完整DNA分子，這里不同的DNA分子就被區(qū)分開來了倘潜，并且分布在不同的位置上绷柒。
通過熒光標(biāo)記的方法，就會在膠片上留下記號窍荧，最后從下往上讀辉巡，就可以得到DNA的序列。
- Sanger測序特點：
①優(yōu)點：方法簡便蕊退，分辨率高郊楣，測序片段長憔恳，流程細(xì)致，質(zhì)控環(huán)節(jié)多净蚤，污染低钥组，結(jié)果直觀可視，假性結(jié)果極低今瀑。
②缺點：測序試劑昂貴程梦，通量低，處理比較長的同聚物時也有自身的問題橘荠，例如很難以高可信度將7個A和8個A區(qū)分開來屿附。
- Sanger測序應(yīng)用： 受限于通量低的特點，Sanger測序目前多用于少量DNA分子測序?qū)嶒炛懈缤Ｈ缥覀兂Ｊ褂玫膶|(zhì)粒挺份、PCR產(chǎn)物、單基因突變進行序列分析贮懈。
