1赂乐， 質(zhì)粒的構(gòu)建：啟動子的選擇
啟動子的選擇對于轉(zhuǎn)染基因的有效表達(dá)是非常重要的薯鳍。對于轉(zhuǎn)染過程本身雖然無甚影響，但是對轉(zhuǎn)染結(jié)果卻有著微妙的影響挨措。
2挖滤， 質(zhì)粒的大小和質(zhì)量
線性化還是超螺旋會影響轉(zhuǎn)染結(jié)果：超螺旋質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率比線性DNA高得多，特別是瞬時轉(zhuǎn)染浅役。而線性化DNA轉(zhuǎn)染的整合幾率高斩松。質(zhì)粒太大了轉(zhuǎn)染會困難一些。畢竟觉既，相對致密惧盹、較小的外源異物被細(xì)胞內(nèi)吞的幾率要大一些。如果你的質(zhì)粒正好比較大瞪讼，又沒有經(jīng)驗钧椰，選擇特別注明可以轉(zhuǎn)大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染試劑成功幾率會高一些。有的轉(zhuǎn)染試劑還會提供一些促進(jìn)DNA凝聚的成分符欠，使得DNA形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物時更致密一些嫡霞，更容易轉(zhuǎn)染一些。純化質(zhì)粒的質(zhì)量也會影響轉(zhuǎn)染效率希柿，一定要選擇高質(zhì)量的質(zhì)粒诊沪。
3， 質(zhì)粒DNA的濃度和量
既然質(zhì)粒純化已經(jīng)不成問題曾撤，初學(xué)者通常都不會在乎甚至愿意多加點DNA端姚，但是要注意的是，DNA量過少固然轉(zhuǎn)染效率不高挤悉，DNA量過多同樣會降低轉(zhuǎn)染效率渐裸。所以預(yù)實驗需要按照說明書的要求，按一定比例混合適量的質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑。有的轉(zhuǎn)染試劑要求DNA的量多些橄仆，有的轉(zhuǎn)染試劑效率高只要很少DNA剩膘。
4， 轉(zhuǎn)染試劑的選擇
在確定了質(zhì)粒的質(zhì)量之后盆顾，就要考慮轉(zhuǎn)染試劑的選擇了怠褐。目前大多數(shù)用的是脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑，但這類試劑的毒性較大您宪，轉(zhuǎn)染效率低奈懒，最好選擇非脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑，如engreen的Entranster-H試劑宪巨。
