? ? ? ? 胰β細(xì)胞移植是目前治療糖尿病的最有效方法钉嘹，然而這種療法需要大量的供體細(xì)胞均唉，因此在取材上存在一定難度斋陪。另一種有效的治療方法是利用與胰β細(xì)胞同源的胰腺干細(xì)胞翰撑，將其增殖分化為胰β細(xì)胞。間充質(zhì)干細(xì)胞同樣具有分化為多種細(xì)胞類型的分化潛能[12,13]匠题，且對宿主細(xì)胞具有免疫逃避特性[14]拯坟，因此本實驗選擇了小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞做為誘導(dǎo)分化的細(xì)胞材料。本實驗分別構(gòu)建了Pdx1（胰十二指腸同源盒基因1）韭山、MafA（V-maf肌肉腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A）郁季、NeuroD1（神經(jīng)分化因子1）三種基因的慢病毒過表達(dá)載體，并分別將其轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞钱磅，進(jìn)行慢病毒包裝梦裂。之后將所得慢病毒顆粒進(jìn)行濃縮，并分別以單因子侵染盖淡、雙因子侵染年柠、三因子聯(lián)合侵染的方式對mADSCs進(jìn)行定向分化誘導(dǎo)。于誘導(dǎo)后第15天褪迟，對不同誘導(dǎo)方式的IPCs進(jìn)行雙硫腙（DTZ）鑒定和特異性標(biāo)記物（Pdx1, MafA, NeuroD1, Ngn3及Insulin2）檢測冗恨，并加以高糖刺激答憔，刺激后30-120min檢測培養(yǎng)基中含糖量的變化。實驗結(jié)果顯示：（1）慢病毒過表達(dá)載體pHBLV-CMV-IRES-ZsGreen-Pdx1掀抹、pHBLV-CMV-PGK-RFP-MafA虐拓、pHBLV-CMV-PGK-RFP-NeuroD1所含目的片段基因序列與小鼠全基因編碼序列完全一致，三種基因慢病毒過表達(dá)載體構(gòu)建成功傲武；（2）誘導(dǎo)分化第15天蓉驹，三因子聯(lián)合誘導(dǎo)組所形成的IPCs克隆雙硫腙（DTZ）染色呈陽性，并可表達(dá)胰島素生物合成及分泌相關(guān)基因谱轨；（3）在高糖刺激條件下戒幔，三因子聯(lián)合誘導(dǎo)組糖分解速度、分解量遠(yuǎn)優(yōu)于單因子或雙因子誘導(dǎo)組土童。本實驗通過慢病毒過表達(dá)載體诗茎，將三種在血糖調(diào)控、胰島素基因表達(dá)献汗、胰β細(xì)胞功能維持方面起重要作用的基因轉(zhuǎn)入小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（mADSCs）內(nèi)敢订，旨在通過以上三種因子提高誘導(dǎo)mADSCs定向誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞（IPCs）的效率。實驗發(fā)現(xiàn)罢吃，三種因子聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)與二因子或單因子誘導(dǎo)相比楚午，可以更高效率地獲得IPCs，并可有效起到抑糖作用尿招。
無標(biāo)題小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化研究文章
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