1.液體活檢彌補組織檢測的不足
同一癌種的不同患者，同一個腫瘤患者的不同治療階段耍贾、同一腫瘤組織的不同區(qū)域缸匪，腫瘤的生物學特征均存在一定的差異汤锨。液體活檢既可以克服組織檢測的異質性，又具有簡便辞做、安全琳要、無創(chuàng)、實時等特點秤茅，尤其是對于無法進行手術或穿刺稚补，又或者腫瘤位置導致取樣困難的患者而言，液體活檢是一項可以彌補組織檢測局限性的方法框喳，近年來在腫瘤靶向治療课幕、耐藥監(jiān)測的實時評估等方面發(fā)揮著重要的作用。
2.什么是ctDNA檢測五垮？
目前液體活檢的靶標包括：游離的循環(huán)腫瘤細胞（CTCs）撰豺、循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）、循環(huán)RNA（ctRNA）和外泌體（攜帶有細胞來源相關的多種蛋白質拼余，脂類污桦，DNA，RNA等）匙监。
ctDNA是腫瘤細胞在壞死凡橱、凋亡后釋放的一種游離DNA（cfDNA）小作，在血液中的半衰期短，可以實時反映腫瘤的動態(tài)變化稼钩。
然而腫瘤患者體內的腫瘤細胞數(shù)量遠遠低于正常細胞顾稀，cfDNA在血漿中的含量很低，而ctDNA僅占cfDNA的0.1%~5%坝撑，且不同癌種静秆，不同病程的腫瘤患者ctDNA在血漿中含量差異較大，因此相比于組織檢測巡李，ctDNA的檢測需要更高的靈敏度和特異性抚笔。
3.為什么ctDNA檢測需要更高的靈敏度？
目前用于ctDNA液體活檢的技術主要有ARMS-PCR侨拦、數(shù)字PCR（ddPCR）和第二代測序（NGS）殊橙。
NGS能同時檢測多個基因的多種不同變異形式，是應用最廣泛的的基因檢測技術狱从。但由于NGS的實驗流程技術較為復雜膨蛮，在文庫構建、目標區(qū)域捕獲及測序過程中不可避免的會引入一些擴增和測序的錯誤季研，這些錯誤我們把它們叫做背景噪音敞葛，而ctDNA檢測往往突變頻率較低，受到背景噪音干擾較大与涡，來自ctDNA樣本中的低頻突變往往淹沒在背景噪音之中制肮，造成假陰性或假陽性結果，這就限制了ctDNA檢測的靈敏度和特異性递沪。
4.如何提高ctDNA檢測的靈敏度和特異性豺鼻？
分子條形碼技術（UMI）
分子條形碼又稱分子標簽（Unique Molecular indentifier，UMI）款慨，它的原理就是給每一條原始DNA片段加上一段特有的標簽序列儒飒，經(jīng)文庫構建及PCR擴增后一起進行測序。這樣檩奠，根據(jù)不同的標簽序列我們就可以區(qū)分不同來源的DNA模板桩了，分辨哪些是PCR擴增及測序過程中的隨機錯誤造成的假陽性突變，哪些是患者真正的攜帶的突變埠戳，從而提高檢測靈敏度和特異性井誉。
① 2012年5月，Tim Forshew等人率先開發(fā)了基于分子標簽的TAm-Seq方法整胃。
② 2012年9月颗圣，Michael W. Schmitt等利用雙鏈分子標簽技術將錯誤率顯著降低。它的技術原理如下：
如圖中所示，α和β均是連接到DNA模板上的隨機DNA序列在岂，這也就是所謂的UMI
圖中的i奔则、ii、iii分別表示3種不同的情況
上下是表示正負鏈
先看圖i
可見蔽午，僅僅在正鏈上出現(xiàn)了一條有類似變異的情況易茬，很顯然這是個測序錯誤，而不是突變
再看圖ii
所有的正鏈中都在同一個位置上有一個類似變異的點及老，這個點可能是個突變抽莱，但是，在其對應的負鏈上并沒有出現(xiàn)對應的變異點骄恶，所以也認為這個點是測序錯誤引起的
再看圖iii
正負鏈都有多個類似變異的點食铐，但除了綠色的點在正負鏈中都存在，且對應叠蝇，其它的點都是沒有正負鏈對應璃岳，而且僅僅在個別的DNA鏈中中存在年缎。
所以最后可以得出綠色的點是突變點
