1．取材
頸椎脫臼法處死小鼠，打開腹腔杨伙，剪取肝組織（或其他組織）其监。
切取的組織塊不宜太大，以利于固定劑穿透限匣，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm為宜抖苦。取下所需要的肝組織，切成一小塊2－3mm厚。
注意事項：
（1）取材動作要迅速锌历，不宜拖太久贮庞，以免組織細胞的成分、結(jié)構(gòu)等發(fā)生變化究西。
（2）切片材料應根據(jù)需要觀察的部位進行選擇贸伐，盡可能不要損傷所需要的部分。
2．固定
將切好的肝組織用生理鹽水洗一下怔揩，立即投入中性福爾馬林固定液中固定30－50min。
注意事項：
（1）一般固定液脯丝，都以新配為好商膊，配好后應貯存在陰涼處，不宜放在日光下宠进，以免引起化學變化晕拆，失去固定作用。
（2）有些混合固定液的成分之間會發(fā)生氧化還原作用材蹬，一定要在使用前混合实幕，如果混合太早，固定時就沒有作用了堤器。
（3）固定材料時昆庇，固定液必須充足，一般為材料塊的20~30倍闸溃，有些水分多的材料整吆，中間應更換1-2次新液。
（4）材料固定完畢后辉川，保存于嚴密緊塞或加蓋的容器里表蝙，同時在容器外貼上標簽，并隨同材料在溶液中投入相應的標簽乓旗，以免混淆府蛇。標簽上注明固定液、材料來源屿愚、日期等汇跨。標簽上的文字，用黑色鉛筆寫妆距。
3.洗滌
材料經(jīng)固定后,流水沖洗扰法，數(shù)小時或過夜。
4.脫水
材料依次經(jīng)70%毅厚、80%塞颁、90%各級乙醇溶液脫水，各30min，再放入95%祠锣、100%各2次酷窥，每次20min。
注意事項：
（1）脫水必須在有蓋的玻璃瓶中進行伴网，防止吸收空氣中的水分蓬推。
（2）在更換高一級的脫水劑時，最好不要移動材料以免損壞澡腾，可用吸管吸出器皿中的脫水劑沸伏，再用吸水吸盡器皿內(nèi)剩余液，然后于皿中加入高一級脫水劑动分。
（3）在低濃度酒精中毅糟，每級停留時間不宜太長，否則易使組織變軟澜公，助長材料的解體姆另。
（4）在高濃度或純酒精中，每級停留的時間也不宜太長坟乾，否則會使組織變脆迹辐，影響切片。
（5）如需過夜甚侣，應停留在70%酒精中明吩。
（6）脫水必須徹底，否則不易透明殷费，甚至使透明劑內(nèi)出現(xiàn)白色混濁現(xiàn)象
5．透明
純酒精贺喝、二甲苯等量混合液15min，二甲苯Ⅰ15min宗兼、Ⅱ15min（至透明為止）躏鱼。
由于乙醇與石蠟不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蠟殷绍，所以脫水后還要經(jīng)過二甲苯以過渡染苛。當組織中全部被二甲苯占有時，光線可以透過主到，組織呈現(xiàn)出不同程度的透明狀態(tài)茶行。
透明注意事項
（1）使用透明劑時，要隨時蓋緊蓋子登钥，以免空氣中的水分進入畔师。
（2）更換每級透明劑，動作要迅速牧牢，一方面為了不使材料塊干涸看锉，另一方面能避免吸收濕氣姿锭。
（3）在透明過程中， 如果材料周圍出現(xiàn)白色霧狀伯铣，說明材料中的水未被脫凈呻此，應退回純酒精中重新脫水，然后再透明腔寡。
6．透蠟
放入二甲苯和石蠟各半的混合液15min焚鲜，再放入石蠟Ⅰ、石蠟Ⅱ透蠟各50-60分鐘放前。
透蠟的目的是除去組織中的透明劑（如二甲苯等）忿磅，使石蠟滲透到組織內(nèi)部達到飽和程度以便包埋。透蠟時間根據(jù)組織大小而定凭语。透蠟應在恒溫箱內(nèi)進行葱她，并保持箱內(nèi)溫度在55-60℃左右，注意溫度不要過高叽粹，以免組織發(fā)脆。一般置于恒溫箱0.5h却舀。
透蠟注意事項
（1）盡量保持在較低溫度中進行虫几，以石蠟不凝固為度；
（2）透蠟溫度要恒定挽拔，不可忽高忽低辆脸；
（3）操作要迅速，盡量在最短的時間內(nèi)完成石蠟透入過程螃诅，以免引起組織變硬啡氢、變脆、收縮等术裸。
7.包埋
包埋時倘是，用鑷子夾取石蠟模子（金屬質(zhì)地）在酒精燈上稍加熱，放在平的桌面上袭艺，從溫箱中取出盛放純石蠟的蠟杯搀崭，倒入少許石蠟。再將鑷子在酒精燈上稍加熱猾编，夾取材料將切面朝下放入蠟模中瘤睹，排列整齊。再放上包埋盒答倡，輕輕倒入熔蠟轰传。
8.切片
①將已固定和修好的石蠟塊裝在切片機的夾物臺上。
②將切片刀固定在刀夾上瘪撇，刀口向上获茬。
③搖動推動螺旋港庄，使石蠟塊與刀口貼近，但不可超過刀口锦茁。
④調(diào)整石蠟塊與刀口之間的角度與位置攘轩，刀片與石蠟切片約成15度左右。
⑤調(diào)整厚度調(diào)節(jié)器到所需的切片厚度码俩，一般為4-10微米度帮。
⑥一切調(diào)整好后主可以開始切片。此時右手搖動轉(zhuǎn)輪稿存，讓蠟塊切成蠟帶笨篷，左手持毛筆將蠟帶提起，搖轉(zhuǎn)速度不可太急瓣履，通常以40-50r/min為宜率翅。
⑦切成的蠟帶到20-30cm長時，右手用另一支毛筆輕輕將蠟帶挑起袖迎，以免卷曲冕臭，并牽引成帶，平放在蠟帶盒上燕锥，靠刀面的一面較光滑辜贵，朝下，較皺的一面朝上归形。
⑧用單面刀片切取蠟片一小段托慨，放在載玻上加水一滴，置于放大鏡或顯微鏡下觀察切片是否良好暇榴。
⑨切片工作結(jié)束后厚棵，應將切片刀取下用氯仿擦去刀上沾著的石蠟，把切片機擦拭干凈妥為保存蔼紧。
9.展片婆硬、貼片
打開水浴鍋，使水溫維持在40-45℃奸例，另準備30%乙醇溶液柿祈。
① 切片時，將一碗30%乙醇溶液放于切片機旁的桌面上哩至。
② 用小鑷子夾取預先用刀片割開的蠟帶躏嚎，放在乙醇溶液的水面上，使切片展開菩貌。
③小鑷子輕輕地將連在一起的切片分開卢佣，用一個載玻片將切片完整，已展開的切片撈至溫水中箭阶，使之充分展開虚茶。
④ 另取潔凈的載玻片戈鲁，撈起展開的切片，使其位于切片1/3處嘹叫，另一端（磨邊婆殿，粗糙的一端）磨面上標記或貼上標簽，放于切片架上罩扇。
10.脫蠟復水
將水浴鍋溫度調(diào)至60℃婆芦，待水溫控制在60℃時，將切片連同切片架放入一干燥的染色缸內(nèi)喂饥，放入水浴鍋中消约，蓋上蓋子（可密封），30min至蠟熔化员帮。
之后或粮，石蠟切片經(jīng)二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟各5min捞高，然后放入100%氯材、95%、90%硝岗、80%氢哮、70%各級酒精溶液中各3-5min，再放入蒸餾水中3min辈讶。
11.染色
切片放入蘇木精中染色約10-30min命浴。
染色時間應根據(jù)染色劑的成熟程度及室溫高低娄猫，適當縮短或延長贱除。室溫高時促進染色，染色時間可短些媳溺，否則可適當延長時間月幌，冬季室溫低時可放入恒溫箱中染色。
12.水洗
用自來水流水沖洗約15min悬蔽。使切片顏色變藍（或放入堿性水中也可）扯躺，但要注意流水不能過大，以防切片脫落蝎困。
13.分化
將切片放入1%鹽酸乙醇液中褪色录语，約2秒至數(shù)十秒鐘。見切片變紅禾乘，顏色較淺即可澎埠。
14.漂洗
切片再放入自來水流水中使其恢復藍色。
15.脫水Ⅰ
切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3-5min始藕。
16.復染
用0.5%伊紅乙醇液對比染色1-3min蒲稳。
伊紅主要染細胞質(zhì)氮趋，著色濃淡應與蘇木精染細胞核的濃淡相配合，如果細胞核染色較濃江耀，細胞質(zhì)也應濃染剩胁，以獲得鮮明的對比。反之祥国，如果細胞核染色較淺昵观，細胞質(zhì)也應淡染∠倒可在伊紅乙醇液中滴加數(shù)滴冰醋酸助染索昂，促使細胞質(zhì)容易著色，并且經(jīng)乙醇脫水時不易褪色扩借。
17.脫水Ⅱ
將切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色椒惨，然后放入無水乙醇中3-5min。最后用吸水紙吸干多余的乙醇潮罪。
18.透明
切片放入二甲苯Ⅰ康谆、Ⅱ中各3-5min。
二甲苯應盡量保持無水嫉到，應經(jīng)常更換沃暗，或用紗布包無水硫酸銅放入染色缸內(nèi)吸收水分。切片如在二甲苯中出現(xiàn)白霧現(xiàn)象何恶，說明脫水未盡孽锥，應退回乙醇中重新脫水，否則切片難以鏡檢细层。
19.封藏：中性樹膠封存
因切片經(jīng)二甲苯透明惜辑，使用中性樹膠作為封藏劑，樹膠可用二甲苯稀釋至合適的稠度疫赎。
封藏的方法：
封片前應根據(jù)材料的大小盛撑，選用不同規(guī)格的蓋玻片。材料透明后捧搞，在桌上放一張潔凈的吸水紙抵卫，將含材料的載玻片從二甲苯中取出放在紙上（切片的一面向上），迅速地在切片的中央滴一滴樹膠（千萬不能待二甲苯干燥后再進行）胎撇，用右手持小鑷子輕輕地夾住蓋玻片的右側(cè)介粘，稍為傾斜使其左側(cè)與封藏劑接角，然后再緩慢地將蓋玻片放下晚树，這樣就可以減少或避免產(chǎn)生氣泡姻采。如膠液不足，可以用玻棒再滴一滴樹膠從蓋玻片邊緣補足题涨。如膠液過多偎谁，可在干燥以后用刀刮去总滩，并用紗布蘸二甲苯拭去殘留的樹膠。
染色結(jié)果：細胞核被蘇木素染成藍色巡雨，細胞質(zhì)被伊紅染色呈粉紅色闰渔。
