前言：最近實驗室要用northern-blot實驗去檢測miRNA的表達(dá)含鳞，對于多年沒有設(shè)計過探針的我感到一絲恐慌适贸，因為讓人尷尬的是我把如何找一個基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本也就是mRNA序列找出來這件事給徹底忘記了告私。不過還好昼钻，經(jīng)過周圍人的提醒和自己的摸索缠诅，已經(jīng)可以在NCBI上自如的獲取基因給mRNA序列了
關(guān)鍵詞：NCBI 基因 ?轉(zhuǎn)錄本 ?mRNA序列 ?探針（建議在查找實驗之前先把概念理清楚）
1 首先是打開NCBI官網(wǎng)宿礁，左上角選擇框選擇Gene，輸入基因名字茬射，比如GAPDH鹦蠕，點擊Search；
2 在檢索結(jié)果中選擇自己想要物種的基因在抛，比如想要第一個人的GAPDH钟病，就點擊 ID編號為2579的GAPDH就可以；
3 點擊進(jìn)去之后網(wǎng)站會展示這個基因的Full Report出來刚梭。從上到下依次有summary肠阱，genomic context等等，這里我們直奔主題朴读，點開NCBI Reference Sequences相關(guān)內(nèi)容屹徘；
4 點開之后會看到如下內(nèi)容，發(fā)現(xiàn)這個基因會有5個轉(zhuǎn)錄本（開頭以NM的認(rèn)為是確定的mRNA序列）點擊NM_001256799.3衅金；
5 點擊之后會出現(xiàn)如下的內(nèi)容噪伊，有g(shù)ene,exon，等等氮唯，基因的序列是固定的鉴吹，不同的轉(zhuǎn)錄本可能會有不同的外顯子區(qū)域組成，這里我們因為要以mRNA序列進(jìn)行雜交實驗惩琉，所以必須在外顯子區(qū)域選擇序列豆励；
值得注意的是，這里給出的序列中雖然是atcg四種堿基瞒渠，但它指示的不是DNA序列良蒸，而是mRNA序列技扼，如果要設(shè)計與RNA能夠雜交的探針，直接截取一段（5‘-3’）放在peimer5引物設(shè)計軟件中獲取它的反向互補序列就行了嫩痰。這個反向互補序列就是probe序列淮摔，可以直接在5‘端或者3’端加修飾發(fā)送給生物公司合成了。
