石蠟切片小技巧
在臨床病理及臨床科研制片中宝与,制備出合格優(yōu)良的優(yōu)質(zhì)組織切片焚廊,是保障后續(xù)染色的先決條件,一張平整無刀痕的制片习劫,往往受到材料本身咆瘟、固定、氣候榜聂、脫水搞疗、刀片、玻片等不同客觀因素的影響须肆,今天我們來給大家交流下我們制片的小技巧匿乃。
常規(guī)病理技術(shù)染色流程
脫水:按一定的切面要求對組織進行取材,固定充分豌汇,組織脫水透明完全幢炸,脫水的組織不易太厚,一般厚度在3mm左右拒贱,脫水程序可設置多個宛徊,大組織和小組織分開脫水佛嬉,脂肪組織最好單獨脫水。
加濕:南方和北方氣候差異大闸天,如空氣比較干燥暖呕,切片機旁邊可放置一臺加濕器,增加空氣中的濕度苞氮,放置切片蠟帶靜電湾揽,切片自然打卷。
刀片平整鋒利:切片前蠟塊預冷笼吟,選擇質(zhì)量比較好的刀片库物,道口韌性強刀口鋒利,如蠟帶上有刀痕贷帮,移動道口再嘗試戚揭,觀察還是因組織內(nèi)有異物切片不完整;切片時注意組織層次撵枢、紋理民晒、纖維、肌肉等方向與切片刀平行锄禽。避免用力過重或過輕镀虐,影響切片質(zhì)量。
展片:保持水面清潔沟绪,展片溫度要合適,一般40-42℃空猜,對于展片困難的組織绽慈,可先在冷水中展片,再轉(zhuǎn)移到溫水中充分展開辈毯。
玻片的選擇:對于不同的實驗類型可選擇不同黏附程度的玻片坝疼,如免疫組化實驗或多色免疫熒光實驗,盡量選擇粘附性更好的玻片谆沃,骨及皮膚樣本特殊钝凶,在某些實驗中也容易脫片,可測試用不同類型的玻片唁影,提高防脫效率。
撈片:玻片傾斜据沈,從組織一端黏附到玻片快速拷起,如有褶皺可退到水槽锌介,從新?lián)破鹗染鳌=M織盡量撈片方正靠近玻片中央位置,以便后續(xù)滴染實驗操作和組織全景成像隆敢。
存放:晾干后裝盒備用发皿,如短時間不使用后續(xù)有組化方面需求拂蝎,玻片及蠟塊封蠟低溫保存。
其他:對于特殊的樣本如骨組織匣屡,如脫水不完全,骨松質(zhì)的位置后續(xù)染色容易脫片捣作,調(diào)整拷片時間和溫度誉结,具體看實驗需要觀察的部位是否可以勉強使用券躁;對于定位切片的樣本惩坑,每切一次都需要修整蠟塊,切面會發(fā)生變化也拜,盡量一次性多切幾張玻片備用以舒。
劣質(zhì)切片展示
優(yōu)質(zhì)切片