siRNA轉染是分子生物學常見的實驗之一鸠信。在siRNA轉染實驗中歹河，siRNA轉染試劑的選擇尤為關鍵勤众，需要綜合考慮轉染試劑的轉染性能舆绎、細胞毒性和操作方便性。目前们颜，實驗室常用的siRNA轉染試劑品牌主要有賽默飛的Lipo3000吕朵、 RNAi MAX和百代生物的RFect與RFect V2。其中窥突，RNAi MAX是國際公認的siRNA轉染試劑權威產(chǎn)品努溃，RFect是國產(chǎn)知名siRNA轉染試劑，RFect V2是RFect 的最新升級產(chǎn)品阻问，很多實驗室反應其siRNA轉染性能非常優(yōu)異梧税。RNAi MAX與RFect V2比較，各自的siRNA轉染性能如何称近，本文擬簡要敘述如下第队。
一、siRNA轉染性能
siRNA轉染性能刨秆，無疑是評價一款siRNA轉染試劑實力的首要指標斥铺。不僅要看轉染陽性率，更要看基因沉默效率坛善。
RFect V2的最大突破就是專門配置了Trans Enhancer，又叫siRNA轉染增強劑邻眷，可有效降低細胞膜的免疫排異反應的同時眠屎，顯著提升了siRNA轉染的效率，較升級前的RFect siRNA轉染試劑的轉染效率還可高出5-30%肆饶。那它的轉染性能表現(xiàn)和RNAi MAX相比又如何呢改衩？我們實驗室按照兩款試劑的說明書，以24孔板的推薦比例驯镊，在用于做體外質控的Hela細胞融合度達到30-50%時葫督，分別以1.5μL的RFect V2和1.5μL的RNAi MAX轉染試劑配制轉染復合物進行轉染，48h在熒光顯微鏡下觀察其轉染陽性率板惑。結果顯示橄镜，兩者的轉染陽性率都可達90以上，說明同等量的轉染試劑冯乘，RFect V2與RNAi MAX的轉染陽性率不相上下洽胶。
如果說轉染陽性率只是一個直觀的結果，并非是驗證兩者轉染性能的“金標準”裆馒，那么還需要通過RT-qPCR來檢測其基因沉默效率從而得出結論姊氓。為此丐怯，我們將能夠敲降SSB基因的小干擾核酸分別通過RFect V2和RNAi MAX轉染進Hela細胞，利用RT-qPCR檢測轉染24h后SSB的mRNA表達水平翔横。如圖所示读跷，使用RNAi MAX轉染的實驗組CT值分別為21.91、21.95禾唁，使用RFect V2實驗組的熒光定量檢測結果相比于RNAi MAX略高出0.13-0.14個CT值效览，兩者結果非常相近，表明RFect V2和RNAi MAX轉染siRNA沉默基因的效率基本一致蟀俊。
二钦铺、細胞毒性
細胞死亡率對細胞轉染實驗結果的影響很大，尤其是我們在研究基因沉默效率時肢预，死亡細胞的那部分也會表現(xiàn)為目標mRNA表達水平的降低矛洞，因此siRNA轉染試劑必須對細胞作用溫和，才能實現(xiàn)實驗結果的準確性與可靠性烫映。
RFect V2使用了新型可降解納米材料沼本，和升級前的RFect相比，細胞毒性更低锭沟，并且成分上區(qū)別于以陽離子脂質體為主要成分的RNAi MAX抽兆。眾所周知，siRNA轉染試劑的毒性越低族淮，其要求的轉染密度也越低辫红。在這方面，無論是RNAi MAX祝辣，還是RFect V2贴妻，都做到了轉染密度在30-50%時就能取得高效的轉染結果。根據(jù)我們實驗室的數(shù)據(jù)蝙斜，使用RNAi MAX轉染Hela細胞后名惩，細胞死亡率約為10%左右，使用RFect V2轉染Hela細胞后孕荠，細胞死亡率只有5%左右娩鹉，似乎還略優(yōu)于RNAi MAX≈晌椋可以說弯予，RFect V2在細胞毒性方面的表現(xiàn)是令人驚喜的。
三槐瑞、操作簡便性
以研究者的角度出發(fā)熙涤，實驗的簡便性也十分重要。主要看兩方面，一方面是需不需要特殊培養(yǎng)基祠挫，第二方面是需不需要換液那槽。
特殊培養(yǎng)基一般是用來配制轉染復合物的，因為血清的存在往往會影響轉染復合物的形成等舔，所以說必須使用減血清培養(yǎng)基或是無血清培養(yǎng)基骚灸。RNAi MAX的說明書中就已明確指出需要使用Opti-MEM減血清培養(yǎng)基來稀釋轉染試劑和siRNA，而試劑盒內并不提供這種培養(yǎng)基慌植，因此實驗者還需額外購買甚牲。這方面，RFect V2盒內配置有專研的轉染增強劑蝶柿，可完全替代無血清培養(yǎng)基丈钙，不僅提升了轉染效率，也省去了購買特殊培養(yǎng)基的開支交汤，為研究者提供了便利雏赦。
在換液問題上，研究者要根據(jù)每個轉染試劑的說明書來芙扎。RFect V2不僅有很強的抗血清干擾能力星岗，無需在轉染前更換無血清培養(yǎng)基，而且由于對細胞毒性極低戒洼，因此也無需在轉染4-6h后進行換液俏橘，換液反而可能造成轉染效率降低。RNAi MAX同樣在說明書中表明無需換液圈浇，但有些科研者在分享轉染經(jīng)驗時還是建議轉染后4-6小時最好更換培養(yǎng)液寥掐，可能對于一些敏感的細胞如果不及時更換新鮮的培養(yǎng)基，細胞死亡率還是比較高的磷蜀。不過曹仗，對于大多數(shù)耐受性強的細胞，RNAi MAX還是有非常不錯的轉染效率的蠕搜。因而，研究者在選擇使用RNAi MAX時收壕，可根據(jù)細胞對轉染試劑的敏感度自行判斷是否需要換液妓灌。
總的來說，RFect V2在各方面都有媲美RNAi MAX的性能蜜宪，對于研究者來說虫埂，確實是一個不錯的siRNA轉染試劑新選擇。
