五扶认、流行性出血熱(腎綜HFRS侨拦、漢坦病毒HV)
簡稱“出血熱”，統(tǒng)稱“腎綜合征出血熱”辐宾。漢坦病毒狱从、自然疫源性膨蛮。<u>發(fā)熱、出血季研、腎損傷</u>敞葛。鼠類自然宿主&傳染源。我國發(fā)病人數(shù)世界90%与涡。
(一)病原
漢坦病毒HV惹谐、負(fù)鏈分節(jié)段RNA(L、M驼卖、S)氨肌。負(fù)染顆粒表面-獨特方格狀結(jié)構(gòu)。
(二)病原分離方法
Vero-E6細(xì)胞酌畜、A549(人肺癌)怎囚、2BS(人胚肺二倍體)、RL(大白鼠肺)檩奠。
發(fā)病5天內(nèi)桩了，靜脈采血→接種長成單層的細(xì)胞培養(yǎng)瓶→培養(yǎng)3代→制成抗原片→①免疫熒光試驗②中和試驗③交叉阻斷試驗④酶聯(lián)免疫吸附試驗測抗原⑤反向間接血凝測抗原⑥測核酸序列
(三)特征性基因與抗原檢測
核酸探針雜交法→外周血白細(xì)胞提取的核酸雜交→測病毒RNA。
RT-PCR埠戳、標(biāo)記熒光素的抗體檢測特異性抗原井誉。
(四)抗體檢測
ELISA-雙份血清IgG，4倍↑
六整胃、埃博拉出血熱病毒
埃博拉出血熱ebHF颗圣、僅非洲，扎伊爾北部Ebola小河屁使。
(一)病原
絲狀病毒科在岂、單股負(fù)鏈RNA。胞漿內(nèi)繁殖蛮寂、芽生釋放蔽午。
(二)病原分離方法
必須4級實驗室。急性期血標(biāo)本→Vero細(xì)胞培養(yǎng)or豚鼠腹腔酬蹋。
組織培養(yǎng)無細(xì)胞病理變化及老、免疫熒光法看到病毒抗原-胞漿內(nèi)。
(三)特征性基因
RT-PCR & 雜交法→檢測RNA
(四)抗體檢測
間接免疫熒光范抓、固相間接酶免疫試驗骄恶、放射免疫試驗、蝕斑減少中和試驗匕垫、單克隆抗體的EIA法(酶免疫分析)僧鲁。
七、乙型腦炎病毒(JE、乙類)
流行性乙型腦炎/日本腦炎JE寞秃。蚊媒傳播斟叼，人畜共患、急性傳染病 春寿、乙類傳染病犁柜。
豬-貯存宿主、三帶喙庫蚊-傳播堂淡。
(一)病原
黃病毒科黃病毒屬(丙肝)馋缅、單股正鏈RNA。5個基因型:根據(jù)E蛋白(包膜糖蛋白)編碼核苷酸绢淀。
不耐熱:50℃30 mins萤悴、54℃10 mins，但4℃ 數(shù)年皆的。
超聲波紫外線可滅活覆履，化學(xué)因子敏感。
地鼠腎费薄、豬腎硝全、雞胚原代細(xì)胞，BHK-21楞抡、Vero伟众、C6/36等傳代細(xì)胞。感染細(xì)胞明顯病變召廷。明顯的嗜神經(jīng)特性凳厢、凝集紅細(xì)胞。
(二)病原分離方法
血液竞慢、腦脊液先紫、尸檢標(biāo)本、蚊蟲筹煮。冷鏈
細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)or乳鼠培養(yǎng)系統(tǒng)遮精。
<u>腦脊液、尸檢腦組織</u>接種BHK败潦、C6/36本冲。
陽性結(jié)果判定:CPE/致細(xì)胞病變效應(yīng)、紅細(xì)胞吸附試驗变屁、單克隆抗體免疫熒光眼俊。
(三)特征性基因與抗原檢測
PCR--PrM區(qū)段意狠，確定感染&明確型別→地域特征粟关。
E蛋白/包膜糖蛋白:誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生中和抗體&保護(hù)性免疫應(yīng)答、決定毒力、幫助進(jìn)入細(xì)胞闷板、血凝活性澎灸。
(四)抗體檢測
免疫熒光/ELISA→檢測抗體，使用滅活全病毒做抗原遮晚。
腦脊液性昭、血液中IgM抗體→早期診斷
補體結(jié)合試驗→回顧性診斷、流病調(diào)查县遣。
血凝抑制試驗→臨床診斷&流病調(diào)查糜颠。
八、登革熱病毒(C6/36細(xì)胞萧求、伊蚊傳播其兴、乙類)
Dengue fever，DF夸政。1~4型元旬，伊蚊傳播。乙類
流行最廣守问！蟲媒病毒病匀归。<u>登革出血熱DHF、登革休克綜合征DSS.</u>
(一)病原
黃病毒科黃病毒屬耗帕，正鏈RNA病毒穆端。
E蛋白-主要包膜蛋白、誘導(dǎo)保護(hù)性的中和抗體仿便。
(二)病原分離方法
C6/36細(xì)胞-最常用徙赢。** 巨蚊**胸腔接種&幼蟲腦內(nèi)接種。
(三)特征性基因與抗原檢測
cDNA RNA雜交技術(shù)探越、RT-PCR狡赐。
單克隆抗體結(jié)合<u>放免法</u>測抗原，檢出率43%~47%钦幔。
ELISA-抗原鑒別枕屉。
單克隆抗體<u>免疫熒光法</u>-國內(nèi)廣泛應(yīng)用、但特異性差鲤氢。
免疫膠體金電鏡技術(shù)-較新搀擂、較昂貴。
(四)抗體檢測
經(jīng)典方法:血凝抑制試驗卷玉、補體結(jié)合試驗哨颂、中和試驗
近年常用:空斑減少中和試驗、免疫熒光試驗相种、免疫酶染色法威恼。
IgM意義大-ELISA法、有重要價值。
九箫措、克里米亞-剛果出血熱/新疆出血熱(蜱傳播腹备、接種乳鼠)
<u>CCHF</u>、蜱傳播斤蔓、1944克里米亞發(fā)現(xiàn)植酥、新疆出血熱
(一)病原
布尼亞病毒科、內(nèi)羅畢病毒屬弦牡，負(fù)鏈分節(jié)RNA友驮。
蜂-自然宿主、偶爾-庫蜱屬庫蠓驾锰。
(二)病原分離方法
接種乳鼠最敏感--腦內(nèi)喊儡、腹腔同時接種
乳鼠腦組織-抗原，血清學(xué)交叉試驗or免疫印跡試驗稻据。
CCHFV-多種細(xì)胞(<u>SW-13</u>艾猜、空斑試驗)繁殖，空斑試驗or免疫熒光法確定感染性捻悯。
(三)特征性基因與抗原檢測
核衣殼蛋白基因設(shè)計引物→RT-PCR診斷
反向間接血凝RPHA匆赃、ELISA→早期確診。-敏感性較低今缚。
(四)抗體檢測
動物中和試驗算柳、補體結(jié)合試驗、反向間接血凝&血凝抑制試驗姓言、酶聯(lián)免疫吸附試驗瞬项、免疫熒光、免疫印跡何荚、雙向瓊脂擴(kuò)散囱淋。兩種方法同時陽性最終確認(rèn)。
