? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?孫小娟
? ? ? ?基因工程和細(xì)胞工程是生物學(xué)的前沿，而歷年高考題會基于高中生物課本知識董朝，考察一些實際應(yīng)用中涉及到的相關(guān)問題鸠项。這對學(xué)生和老師而言，都是一種挑戰(zhàn)子姜。經(jīng)過多年的教學(xué)實踐和思考祟绊，筆者有一點個人意見，在這里提出來與大家商榷。
? ? ? ?1 2009年江蘇高考34題
? ? ? ? 1.1原題目
? ? ? ?蘇云金桿菌(Bt)能產(chǎn)生具有殺蟲能力的毒素蛋白牧抽。下圖是轉(zhuǎn)Bt毒素蛋白基因植物的培育過程示意圖(為抗氨芐青霉素基因)嘉熊，據(jù)圖回答下列問題。
? ? ? ?(2)圖中②表示 HindⅢ與BamHⅠ酶切扬舒、DNA連接酶連接的過程阐肤，此過程可獲得??種重組質(zhì)粒；如果換用Bst?l與BamHⅠ酶切讲坎，目的基因與質(zhì)粒連接后可獲得????種重組質(zhì)粒孕惜。
? ? ? ?1.2 ?原答案及解析
? ? ? ?1.2.1 原答案
? ? ? 這道高考題原答案給的是2和1。
? ? ? 1.2.2 解析
? ? ? ?如下圖所示晨炕，HindⅢ與BamHⅠ酶切目的基因所在片段后衫画，得到的兩種片段都能與HindⅢ與BamHⅠ酶切后的質(zhì)粒重組，所以可得到兩種重組質(zhì)粒瓮栗。
? ? ? ?如下圖所示削罩，如果換用Bst?l與BamHⅠ與酶切得到的一種片段，與用Bst?l與BamHⅠ酶切后的質(zhì)粒重組遵馆，可得到一種重組質(zhì)粒鲸郊。
? ? ? 1.3 疑問
? ? ? 做此類題目時，是否要考慮正反接货邓？
? ? ? ?由圖可知秆撮，Bst?l與BamHⅠ有相同的酶切序列，酶切后有相同的粘性末端换况，所以职辨，如果考慮正反接，用Bst?l與BamHⅠ酶切質(zhì)粒和目的基因所在片段后戈二，再用DNA連接酶連接可得到兩種重組質(zhì)粒舒裤。
但是，顯然原答案是沒有考慮正反接的觉吭。
? ? ?2 ?2012年江蘇高考32題
? ? ? 1.1原題目
? ? ? ?圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列腾供，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有Msp?Ⅰ鲜滩、BamH Ⅰ伴鳖、Mbo Ⅰ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG徙硅、G↓GATCC榜聂、↓GATC、CCC↓GGG嗓蘑。請回答下列問題：
? ? ? ?（4）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行须肆，形成重組質(zhì)粒匿乃，那么應(yīng)選用的限制酶是?????????????????????。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后豌汇，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌幢炸，一般需要用添加?????????????????的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測瘤礁，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)阳懂，其最可能的原因是????????????????????????。
? ? ? 2.2 ?原答案及解析
? ? ? 2.2.1原答案
? ? ? ?第一個空的答案是“BamH I”柜思，第二個空的答案是“抗生素B”岩调，第三個空給的答案是“同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接”赡盘。
? ? ? ?2.2.2 解析
? ? ? ?因為目的基因和運載體是用同種限制酶切割的号枕，目的基因兩側(cè)的末端和質(zhì)粒切割后的兩個末端都能進(jìn)行互補(bǔ)配對，可能出現(xiàn)目的基因反向連接在運載體上的情況陨享，導(dǎo)致基因D不能正確表達(dá)葱淳。
? ? ? ? 2.3 要考慮正反接
? ? ? ?從這道題來看，顯然做此類試題是要考慮正反接的抛姑。
? ? ? ?3 ??一道常見的基因工程試題
? ? ? ?3.1試題內(nèi)容
? ? ? ?如圖是含某目的基因的DNA片段赞厕，據(jù)圖回答下列問題：
? ? ? ?3.2原答案
? ? ? ?第一個空是“3”蔬啡，第二個空是“2”诲侮，第三個空是“6”。
? ? ? 3.3 ?原解析
EcoRⅠ箱蟆、SmaⅠ限制酶識別的序列均為6個核苷酸沟绪。EcoRⅠ能識別GAATTC序列，切割后的為黏性末端—G AATTC——CTTAA G—空猜；SmaⅠ識別CCCGGG序列绽慈，切割后的為平口末端—CCC GGG——GGG CCC—。如下圖辈毯，該DNA片段共有2個EcoRⅠ的切點和1個SmaⅠ的切點久信，共切出4個黏性末端和2個平口末端。
? ? ? 3.4 疑問
? ? ? ?限制酶的酶切序列與脫氧核苷酸的方向是否有關(guān)漓摩？
? ? ? ?我們知道組成DNA分子的兩條脫氧核苷酸鏈反向平行，如果一條鏈從左向右是5ˊ→3ˊ入客，則另一條鏈從右到左就是5ˊ→3ˊ管毙。那么腿椎，限制酶在識別酶切序列時不受脫氧核苷酸鏈方向的限制嗎？
? ? ? ?3.5 個人觀點
? ? ? 給出的DNA分子的堿基序列夭咬，一般都是上面一條鏈?zhǔn)?ˊ→3ˊ方向啃炸，下面一條鏈?zhǔn)?ˊ→5ˊ方向。雖然高中生物課本上沒有在限制酶的酶切序列上標(biāo)出方向卓舵，但實際上大家約定成俗南用，在寫限制酶的識別序列時，是按從5ˊ→3ˊ的方向來寫出的掏湾，限制酶的酶切序列是與脫氧核苷酸的方向相關(guān)的裹虫。
? ? ? ?3.6 解析及本題正確答案
? ? ? ?如下圖，在該DNA片段上有1個EcoRⅠ的切點和1個SmaⅠ的切點融击，共切出2個黏性末端和2個平口末端筑公。
? ? ? ?所以本題的正確答案為：第一個空是“2”，第二個空是“2”尊浪，第三個空是“4”匣屡。
? ? ? ?4 ?總結(jié)反思
? ? ? ?基因工程近些年來發(fā)展得很快，基因工程部分的理論知識也在不斷地完善拇涤。高考題可以說是我們平時練習(xí)的高質(zhì)量的習(xí)題捣作，尚且具有疑問，所以鹅士，作為老師我們要不斷更新和完善知識體系券躁，尊重科學(xué)事實，有探求真理的精神如绸，自己首先要有正確的觀點嘱朽。
