一户魏、實(shí)驗(yàn)器材

普通光學(xué)顯微鏡驶臊、血球計(jì)數(shù)板挪挤、吸水紙、蓋玻片关翎、吸管扛门、移液槍、槍頭纵寝、離心管论寨、鑷子（取用蓋玻片）、無水乙醇或 95% 乙醇溶液爽茴、

如果需要將細(xì)胞進(jìn)行稀釋需要加入培養(yǎng)基嗎政基？還是生理鹽水，緩沖溶液都可闹啦？

二沮明、實(shí)驗(yàn)步驟

血球計(jì)數(shù)板的準(zhǔn)備：取血球計(jì)數(shù)板，檢測血球計(jì)數(shù)板是否清潔窍奋，如果有污垢荐健，應(yīng)先洗滌干凈并擦干。用無水乙醇或 95% 乙醇溶液擦拭計(jì)數(shù)板后琳袄，用綢布擦凈江场，另擦凈蓋玻片一張。先在低倍鏡下窖逗，熟悉計(jì)數(shù)板和計(jì)數(shù)區(qū)的構(gòu)造址否。

加蓋玻片，蓋住血球計(jì)數(shù)板兩邊的小槽碎紊。

制備細(xì)胞懸液：將動物細(xì)胞用稀釋液制備成適當(dāng)濃度的細(xì)胞懸液備用佑附。

（如果需要染色，需要在充液之前將染色液按照一定的比例加入細(xì)胞懸液中）

充液: 用滴管或者移液器將一小滴震蕩混勻的稀釋的細(xì)胞懸液滴在蓋玻片邊緣的玻片上仗考，細(xì)胞懸液借毛細(xì)管現(xiàn)象自動滲入計(jì)數(shù)室中音同。如果加入的液體過多，會進(jìn)入計(jì)數(shù)取兩側(cè)的凹槽內(nèi)秃嗜，使蓋玻片浮起权均，需要用濾紙把多余的液體吸出。

避免滴入過少細(xì)胞懸液锅锨，易產(chǎn)生氣泡叽赊。如果加入的過少，需要洗凈計(jì)數(shù)板必搞，干燥后重做必指。

充液后靜置1-2min，待細(xì)胞下沉后顾画，方可計(jì)數(shù)取劫。

先用低倍鏡找到血球計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)區(qū)。

計(jì)數(shù)結(jié)束后研侣，清洗計(jì)數(shù)板谱邪，整理試驗(yàn)臺。

三庶诡、計(jì)數(shù)原理

?1惦银、熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)區(qū)

? 2、計(jì)數(shù)時(shí)只計(jì)數(shù)中央

??3末誓、細(xì)胞濃度計(jì)算

? 細(xì)胞濃度計(jì)算公式：

? 細(xì)胞濃度(細(xì)胞個(gè)數(shù)/mL) = (80小方格內(nèi)細(xì)胞個(gè)數(shù)÷80)×400×104×稀釋倍數(shù)

? 4扯俱、細(xì)胞計(jì)數(shù)原則

計(jì)數(shù)區(qū)每個(gè)中方格內(nèi)16個(gè)小方格要依次計(jì)數(shù)，遵循 S形計(jì)數(shù)原則喇澡。?

在計(jì)數(shù)靠近中方格邊線（為雙線）的細(xì)胞時(shí)迅栅，遵循“計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右”原則晴玖。

如發(fā)現(xiàn)各中方格中的細(xì)胞數(shù)目相差20個(gè)以上读存，表明細(xì)胞分布不均勻，須重新計(jì)數(shù)呕屎。

四让簿、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

血球計(jì)數(shù)板為易碎品，請務(wù)必輕拿輕放秀睛。

檢查計(jì)數(shù)板尔当，確保清潔。

方格網(wǎng)的分隔線無色蹂安，在相差顯微鏡下更容易看到椭迎。

充液時(shí)，避免滴入過多細(xì)胞懸液田盈，溢出并流入兩側(cè)槽內(nèi)侠碧，使蓋玻片浮起。避免滴入過少細(xì)胞懸液缠黍，易產(chǎn)生氣泡弄兜。

計(jì)數(shù)時(shí)，只計(jì)數(shù)完整的細(xì)胞瓷式，若聚成一團(tuán)的細(xì)胞則按一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)替饿。

二次重復(fù)計(jì)數(shù)誤差不應(yīng)超過 ±5%

如果細(xì)胞數(shù)量較多的情況下，可取一滴（或100ul）細(xì)胞混懸液＋八滴（或800ul）細(xì)胞培養(yǎng)液＋一滴（或100ul）苔盼藍(lán)贸典，這樣最終稀釋倍數(shù)為十倍视卢。

五、染色計(jì)數(shù)

如果需要了解細(xì)胞生活狀態(tài)和鑒別細(xì)胞死活廊驼，確定細(xì)胞接種濃度和數(shù)量以及了解細(xì)胞存活率和增殖度据过，如用酶消化制備的細(xì)胞懸液中細(xì)胞活力的鑒別惋砂，凍存細(xì)胞復(fù)蘇后的活力檢測等。

細(xì)胞懸液制備后绳锅，常用活體染料臺盼藍(lán)對細(xì)胞進(jìn)行染色西饵，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。臺盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜鳞芙，故活細(xì)胞不著色眷柔。而死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增高，可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色（藍(lán)色）原朝。

1驯嘱、用滴管吸取 0.4% 臺盼藍(lán)染液，按 1∶1 比例加入細(xì)胞懸液中喳坠。

2鞠评、鏡下觀察，凡折光性強(qiáng)而不著色者為活細(xì)胞壕鹉，染上藍(lán)色者為死細(xì)胞谢澈。

3、計(jì)數(shù)細(xì)胞后御板，計(jì)算細(xì)胞懸液濃度并求出存活與死亡細(xì)胞數(shù)的比例锥忿。

參考網(wǎng)址：

https://www.icourse163.org/learn/XMU1207467801tid=1207788203#/learn/contenttype=detail&id=1213913014&cid=1217906593（中國大學(xué)慕課-細(xì)胞與顯微技術(shù)實(shí)驗(yàn)課程）

http://paper.dxy.cn/article/501668（丁香園-獻(xiàn)給初學(xué)者：手把手教你做細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)）

文章文字稿整理自中國大學(xué)慕課