Q16: 哪些物質會影響CCK8的測定？
A16: 當有還原性物質存在時會影響CCK-8的測定恩尾，例如含有維生素C的Glucose等 (一般培養(yǎng)基中的量不多，酚紅或血清不影響測定)聪富。在有酚紅存在的情況下埋市，會增加空白吸收，但不影響測定煞肾，扣除空白吸收即可咧织。
Q17: 在實驗中吸光度值太高，如果不能減少細胞數(shù)量籍救，如何解決习绢？
A17: 可以縮短加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。例如: 可以把加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間由2小時縮短為1小時蝙昙。
Q18: 設定參比波長的目的是什么闪萄？必須設定嗎？
A18: 不一定要設定奇颠。CCK-8試劑在參比波長沒有吸光度败去。設定參比波長的目的是為了取出由于樣品混濁所帶來的吸收。
Q19: 說明書上僅寫了96孔板的測定方法.如果使用24孔板或12孔板烈拒，應該加多少量CC K-8試劑圆裕？
A19:? 一般情況下建議加入CCK-8試劑的量是培養(yǎng)基體積的1/10.
Q20:? 在CCK-8顯色過程中广鳍，如何終止反應？
A20:? 有以下幾種方法（96孔板）：①在顯色反應后吓妆，將培養(yǎng)板放置4℃冰箱內赊时。②每孔加10μl 0.1 MHCL溶液。③每孔加10μl的 1%（w/v）的SDS（十二烷基硫酸鈉）溶液耿战。注意：反應停止后蛋叼，應在24小時之內測定焊傅。
Q21:? 必須預培養(yǎng)細胞嗎剂陡？
A21: 不一定。如果要向保持細胞的最好狀態(tài)狐胎，建議預培養(yǎng)細胞鸭栖。如果不做細胞預培養(yǎng) ，細胞內的脫氫酶可能會不穩(wěn)定握巢。也有人不做細胞預培養(yǎng)晕鹊，但在做標準曲線和檢測時需要統(tǒng)一檢測條件。
Q22:? 如果加入的藥物中含有金屬暴浦，是否會有影響溅话？
A22: 金屬對CCK-8顯色有影響。當終濃度為1 Mm的氯化亞鉛歌焦、氯化鐵飞几、硫酸銅會抑制5%、15%独撇、90%的顯色反應屑墨，使靈敏度降級。如果終濃度是10 Mm的話纷铣，將會100%抑制卵史。
Q23: CCK-8試劑的保存條件？
A23:在避光條件下CCK-8試劑在4℃可保存一年搜立。如果需要保存較長時間的話以躯，推薦在-20℃下保存。但是CCK-8若反復解凍和冰凍將會增加空白吸收啄踊，從而影響檢測結果忧设，若經常使用可將試劑存放在4℃冰箱內保存。
Q24:? 預培養(yǎng)后社痛，更換培養(yǎng)基需要細胞計數(shù)嗎见转？
A24: 一般情況下用胰蛋白酶處理對數(shù)增長期的細胞，用血球計數(shù)盤計數(shù)蒜哀，制備成一定濃度的細胞懸液即可斩箫。如果想要精密計數(shù)細胞的話吏砂，可以預培養(yǎng)后取培養(yǎng)基用血球計數(shù)盤進行計數(shù)。
Q25:? CCK-8對于不同的細胞乘客，靈敏度是否一樣狐血？
A25: 不一樣，懸浮細胞與貼壁細胞相比較難染色易核。對于貼壁細胞匈织，一般加入CCK-8培養(yǎng)1-4小時吸光度已經很高，但對于懸浮細胞則可能吸光度較低牡直，可以通過延長CCK-8的加入時間或增加細胞數(shù)量來解決缀匕。
Q26:懸浮細胞和貼壁細胞在數(shù)量上有何區(qū)別？
A26:懸浮細胞由于染色比較困那碰逸，一般需要增加細胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間乡小。貼壁細胞染色比較容易，若細胞數(shù)量過大饵史，有時吸光度會超過酶標儀的讀數(shù)满钟。
Q27:? 應該每次做標準曲線嗎？
A27: 建議每次做胳喷。雖然細胞是一樣的湃番，但是細胞的狀態(tài)不一定一樣，對于狀態(tài)不一樣的細胞吭露，建議每次做標準曲線吠撮。如果試劑的批號不一樣，靈敏度可能會有輕微的差異奴饮，對于不同的批號建議分別做標準曲線纬向。
Q28: 有時在藥物作用情況下，細胞已經死亡戴卜，但是脫氫酶的活性還在逾条，是否能計算細胞數(shù)量？
A28: 不能投剥。由于CCK-8是通過和細胞內的脫氫酶進行反應間接反映活細胞數(shù)量师脂，如果細胞已經死亡，但脫氫酶的活性還在江锨，則試劑測定的細胞數(shù)量將會比真實值高吃警，不能真實反映活細胞數(shù)量，建議采用別的方法測定啄育。
Q29: 實驗之前酌心，是否需要先檢測一下培養(yǎng)基和CCK-8是否會反應？
A29: 需要挑豌，可用一個孔檢測一下安券，因為有培養(yǎng)基中可能含有氧化還原反應的物質墩崩，在正式實驗之前有必要先確認培養(yǎng)基和CCK-8是否反應。一般正常在的OD值應該在0.4以下侯勉。
Q30:? 如果OD值太低鹦筹，可以采取什么辦法？
A30:? 可以采取2個辦法：① 適當增加細胞數(shù)量址貌。② 延長加入CCK-8試劑后的染色時間铐拐。
