主要內(nèi)容包含核酸凝膠電泳叁幢,細(xì)菌轉(zhuǎn)化滤灯,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(PCR),實(shí)時(shí)定量曼玩,基因組DNA文庫的構(gòu)建鳞骤。
分享一個(gè)藍(lán)白斑篩選的基礎(chǔ)原理:
1.lacZ(特定序列的一段基因,存在于載體上)編碼β-半乳糖苷酶黍判;
2.IPTG誘導(dǎo)lacZ表達(dá)豫尽;
3.β-半乳糖苷酶水解X-gal底物,產(chǎn)生藍(lán)色的溴氯吲哚顷帖;
4.當(dāng)片段插入載體的時(shí)候破壞了lacZ編碼美旧,因此IPTG無法誘導(dǎo)lacZ序列表達(dá),無法產(chǎn)生溴氯吲哚贬墩,呈現(xiàn)白色榴嗅,沒有成功連接載體時(shí)lacZ編碼表達(dá),酶水解X-gal底物陶舞,產(chǎn)生藍(lán)色的溴氯吲哚嗽测,因此客戶要挑白色的,因?yàn)樗遣迦氤晒Φ摹?/p>
5.我們涉及到的產(chǎn)品:除了ct501和cb501的所有載體/IPTG/X-gal肿孵。