1 .電轉(zhuǎn)染實驗DNA含量不應(yīng)過高
電轉(zhuǎn)染時如果電穿孔混合物中DNA含量過高,則可能會導(dǎo)致細(xì)胞毒性辟汰。這時應(yīng)減少電穿孔時DNA用量列敲。可使用最終電穿孔體積中濃度為5ug/ml的DNA濃度進(jìn)行實驗帖汞。將毒性水平與細(xì)胞+Entranster-E溶液對照組實驗結(jié)果進(jìn)行比較戴而,以評估DNA轉(zhuǎn)染的效果。
2 .電轉(zhuǎn)染實驗中翩蘸,對質(zhì)粒DNA要求總結(jié)如下:
1)電轉(zhuǎn)染實驗時所意,應(yīng)使用高純度、無菌催首、無內(nèi)毒素和無污染的DNA扶踊;
2)使用氯化銫梯度或陰離子交換純化DNA為宜;
3)不要使用miniprep試劑盒制備的DNA郎任,因為可能含有高水平的內(nèi)毒素秧耗。
3 .電轉(zhuǎn)染時應(yīng)避免使用乙醇沉淀法純化的DNA
4 .電轉(zhuǎn)染實驗時,不要使用乙醇沉淀法純化的DNA舶治。乙醇沉淀產(chǎn)生的高殘留鹽會改變電流分井,對電穿孔有害胶台。
5 .電轉(zhuǎn)染時載體序列
電轉(zhuǎn)染實驗時,如果載體序列不正確杂抽,則電轉(zhuǎn)染的效率會很低,實驗前應(yīng)驗證質(zhì)粒DNA的表達(dá)體系是否正確韩脏。