十九济瓢、尖銳濕疣病原
尖銳濕疣(CA)又稱生殖器疣、性病疣妹卿。HPV旺矾，STD發(fā)病率第2位。
潛伏期夺克、亞臨床期箕宙、臨床期。
(一)病原
乳多空病毒科懊直、人類唯一宿主扒吁、200多個亞型。雙鏈閉環(huán)DNA
不能組織細(xì)胞培養(yǎng)室囊、無法病毒分離。
(二)特征性基因與抗原檢測
- 診斷基因及檢測方法
E6E7魁索、L1診斷分型的特異性基因→核酸分子雜交技術(shù)融撞、PCR(最好方法) - 診斷的抗原及檢測方法
抗原→免疫組化法、被淘汰
(三)抗體檢測
大多一過性感染 而 無法檢測抗體粗蔚。
尚不能用血清學(xué)確診和分型HPV
二十尝偎、生殖器皰疹病原
90% 2型單純皰疹病毒(HSV-2)、10% HSV-1。
95%復(fù)發(fā) HSV-2 導(dǎo)致
<u>生殖器區(qū)域密集致扯、雙邊分布的皰疹肤寝、發(fā)熱、腹股溝淋巴結(jié)炎抖僵、排尿困難鲤看。</u>
(一)病原
HSV-1和HSV-2是<u>α皰疹病毒亞家族</u>，包含同名2個血清型耍群。
脂溶劑中易于失活义桂、pH＜4，高于56℃蹈垢，很快失去感染性慷吊。
(二)病原分離方法
- 采取標(biāo)本
皮膚黏膜傷口、注射器水皰抽取曹抬、患者的尿溉瓶。
4℃保存48 h、不能-20℃谤民。 - 分離病原
常用：原代人胚胎細(xì)胞嚷闭、人二倍體細(xì)胞
最敏感細(xì)胞系：原代兔腎細(xì)胞、橫紋肌瘤細(xì)胞赖临、貂肺細(xì)胞
- 樣本加入單層細(xì)胞胞锰，37℃孵育1 h
- 加含2%牛血清及1%青、鏈霉素的培養(yǎng)液
- 逐日觀察細(xì)胞形態(tài)變化-變大兢榨、破碎
一般3~5 d出現(xiàn)病變嗅榕。實驗室診斷<u>最敏感方法</u>
(三)特征性基因與抗原檢測
- 診斷的基因及檢測方法
- PCR對病毒DNA擴(kuò)增
- 使用對照、多重PCR→內(nèi)切酶消化or ELISA區(qū)分HSV-1/-2
- PCR檢測愈合幾天后的HSV DNA
- 診斷的抗原及檢測方法
- 放射性核素or生物素標(biāo)記的探針在病理樣本中直接檢出HSV
- 電鏡直接觀察
- 免疫熒光吵聪、免疫酶染色直接觀察特異性抗原
(四)抗體檢測
- 抗體檢測方法
- ELISA凌那、IFA檢測特異性抗體
- WB檢測HSV-2gG抗體→分析HSV-2初次感染
- 人類抗HSV中和抗體在14~29歲之間上升。性活躍人群吟逝、抗HSV-2抗體70%帽蝶，獨身者3%。
- 抗體檢測的診斷意義
- HSV IgM抗體+提示近期感染
- HSV IgG抗體用于血清流病調(diào)查
二十一块攒、非典型性肺炎病原
2002年11月励稳、SARS冠狀病毒（SARS-CoV）
(一)病原
冠狀病毒科冠狀病毒屬、有包膜病毒囱井、包膜上突起形似王冠驹尼。
經(jīng)典冠狀病毒3個群，1庞呕、2群哺乳動物新翎，第3群禽類冠狀病毒程帕。
SARS-CoV基因與3個群均不同。
56℃ 90 mins地啰、75℃ 30 mins愁拭、紫外線60 mins滅活
有機溶劑敏感、乙醚4℃ 24 h 滅活亏吝、75%乙醇 5 mins失活岭埠、含氯消毒劑 5 mins滅活
(二)病原分子生物學(xué)特征
單股正鏈RNA、與經(jīng)典冠狀病毒60%同源性
(三)病原分離方法
- 采集標(biāo)本
血液顺呕、鼻咽分泌物枫攀、糞便、尿液株茶，5~7 d陽性率最高 - 分離病毒
Vero-E6来涨、Vero綠猴腎細(xì)胞，37℃启盛，24 h即可CPE
RD蹦掐、MDCK、293僵闯、2BS等也可培養(yǎng)
(四)特征性基因與抗原檢測
PCR→S卧抗、N等基因的片段
出現(xiàn)癥狀5 d可檢出、10 d高峰
嚴(yán)格陽性確認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)：兩個不同部位的標(biāo)本陽性or間隔2 d的同種標(biāo)本陽性鳖粟。確定合作實驗室社裆、交叉核對。
ELISA向图、病毒N蛋白→早期感染標(biāo)志泳秀。(1~10 d)血清中檢測
可疑及陽性標(biāo)本做第2次試驗復(fù)核、雙孔測定
(五)抗體檢測
<u>病毒N蛋白</u>能誘發(fā)較強免疫反應(yīng)榄攀，用于抗體檢測嗜傅，包括IgG、IgM檩赢、IgA吕嘀、總抗體。<u>IgG或總抗體</u>更為可靠贞瞒。
推薦：ELISA偶房、IFA--抗體檢測方法
血清學(xué)診斷金標(biāo)準(zhǔn)：SARS-CoV抗體中和試驗→測抗SARS-CoV總抗體
二十二、人感染禽流感病毒(生物安全三級)
- 禽流行性感冒 簡稱：禽流感憔狞。甲型流感病毒引起
分為高致病性禽流感蝴悉、低致病性禽流感。 - 人禽流行性感冒 簡稱：人禽流感瘾敢。
病毒亞型主要為☆H5N1、H9N2、H7N7簇抵。 H5N1最重庆杜、2003年12月開始出現(xiàn)
(一)禽流感病毒生物學(xué)特征
甲型流感病毒、正黏病毒科碟摆、分(8)節(jié)段單股RNA晃财。
根據(jù)<u>表面抗原血凝素(HA)、神經(jīng)氨酸酶(NA)</u>抗原性不同分為若干亞型典蜕。
15種HA亞型(H1H15)断盛、9種NA亞型(N1N9)
(二)禽流感病毒分離方法
- 采取標(biāo)本
鼻咽部分泌物、含漱液愉舔、鼻咽吸取物钢猛、組織標(biāo)本，低溫運送or -70℃凍存轩缤。生物安全三級實驗室 - 分離病毒
- 雞胚：9~11日齡命迈、尿囊腔接種
- MDCK
- 病毒分離的診斷價值
診斷金標(biāo)準(zhǔn)、基因特性研究很有意義火的。
發(fā)病初期壶愤、無抗體、只有病毒分離馏鹤、核酸檢測可以確診征椒。
標(biāo)本低溫保存運輸要求嚴(yán)格。
(三)特征性基因與抗原檢驗
- 診斷的基因與抗原檢查
型別：m基因湃累、np基因勃救、ns基因(RT-PCR)
亞型：編碼表面蛋白的HA和NA的基因(RT-PCR、電泳檢測脱茉、基因芯片檢測)
患者→檢測到特異的<u>禽流感病毒核蛋白(NP)剪芥、基質(zhì)蛋白(M1)、血凝素(HA)亞型特異的基因片段</u>→確診
- 診斷的抗原及檢測方法
NP抗原琴许、M抗原→制備相應(yīng)的單克隆抗體税肪，免疫熒光、免疫膠體金等免疫標(biāo)記的方法
HA榜田、NA蛋白的抗體可確定亞型
(四)抗體檢測
血凝抑制試驗益兄、微量中和實驗、免疫熒光箭券、ELISA净捅、膠體金免疫層析分析GICA、WB
紅細(xì)胞凝集抑制采用<u>馬血細(xì)胞</u>可提高檢測敏感度
患者恢復(fù)期血清<u>中和抗體</u>效價≥80→疑似病例
恢復(fù)期血清比急性期血清H亞型抗體4倍↑可確診辩块。
二十三蛔六、朊病毒
朊病毒(prion)不是病毒荆永，是具感染性而不含核酸的<u>蛋白粒子</u>，也稱<u>阮粒or朊毒體国章、簡寫PrP</u>具钥。
牛→瘋牛病 人→克雅病(CJD)液兽、庫魯病(Kuru)骂删、致死性家族性失眠癥(FFI)、新型克雅病(vCJD)四啰、格斯綜合征(GSS) 動物→羊瘙癢病(scrapic)宁玫、傳染性水貂腦病(TME)、黑尾鹿柑晒、駝鹿的慢性消耗性疾病(CWD)欧瘪、貓海綿狀腦病(FSE)
病理學(xué)改變的相似點→中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元空泡樣變性，如<u>海綿狀</u>敦迄。
主要致病原因→正常的朊蛋白構(gòu)象改變產(chǎn)生的朊病毒恋追。
(一)病原
軟蛋白（PrRC）→構(gòu)象改變→致病性朊病毒（PrPSc）：致病性、傳染性罚屋、蛋白酶K抵抗性
朊病毒對<u>理化因素強抵抗力</u>苦囱、抗一般消毒劑和紫外線、<u>抗多種核酸酶和蛋白酶</u>脾猛。
彌漫性神經(jīng)元退行性變撕彤、大腦皮質(zhì)或神經(jīng)節(jié)的海綿樣變。
發(fā)病關(guān)鍵步驟→朊病毒跨越“血腦屏障”的傳輸猛拴。
朊病毒感染：食用被污染物質(zhì)→PrPSc在淋巴器官中復(fù)制→進(jìn)入大腦→誘發(fā)朊蛋白轉(zhuǎn)變成朊病毒羹铅。
(二)基因檢測
遺傳型克雅病→人PrPC基因的第102、178愉昆、198职员、200位等的點突變。
(三)蛋白質(zhì)檢測
- 腦組織中PrPSc的檢測
確診主要依據(jù)：腦組織中有PrPSc蛋白的檢出跛溉。
<u>免疫組織化學(xué)焊切、免疫印跡法</u> - 腦脊液中14-3-3蛋白的檢測
克雅病腦脊液中14-3-3蛋白含量明顯升高
非特異性、輔助診斷指標(biāo)
