蛋白質(zhì)定性分析：確定樣品中是否存在蛋白質(zhì)或是哪種蛋白分子
蛋白質(zhì)定量分析：確定樣品中蛋白分子的含量
蛋白分子量的測定：蛋白質(zhì)在電場中的遷移率差異主要依賴于樣品中各種分子攜帶的電荷呢岗、分子大小和形狀的差別。要想利用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測樣品中某一蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量，就必須排除電荷沐寺、分子形狀的影響，使目的蛋白在電泳時的遷移速率只與蛋白質(zhì)量相關(guān)。
蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)：氨基酸殘基在肽鏈中的排列順序。主要為肽鍵連接尸折，有少量二硫鍵存在。
蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)：肽鏈按照一定的規(guī)律彎曲折疊（（如α-螺旋結(jié)構(gòu)）或折疊（如β-折疊結(jié)構(gòu)））形成一定的空間結(jié)構(gòu)殷蛇。主要依靠肽鏈中氨基酸殘基亞氨基（—NH—）上的氫原子和羰基上的氧原子之間形成的氫鍵而實現(xiàn)的实夹。
蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)：在二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上形成更加復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)橄浓。
蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)：具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈按照一定的排列方式結(jié)合在一起形成的聚集體。
蛋白質(zhì)的變性：在物理亮航、化學(xué)及生物因素的刺激下荸实，蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)被破壞，致使蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生物功能發(fā)生改變缴淋。主要是二硫鍵被破壞准给。蛋白質(zhì)變性主要涉及二硫鍵和非共價鍵的破壞，不涉及一級結(jié)構(gòu)中氨基酸序列的改變重抖。
蛋白質(zhì)的復(fù)性：蛋白質(zhì)變性程度較輕時露氮，在去除變性因素后仍可恢復(fù)原有的構(gòu)象。
SDS是一種陰離子去垢劑钟沛，它能夠破壞蛋白質(zhì)中氫鍵和疏水鍵畔规，并按照一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于蛋白質(zhì)本身所帶的電荷讹剔，從而掩蓋各種蛋白質(zhì)間天然的電荷差異油讯。
巰基乙醇破壞蛋白質(zhì)中的二硫鍵。巰基乙醇具有很強(qiáng)的還原性延欠，能將二硫鍵還原為硫醇，即破壞了二硫鍵沈跨。
蛋白質(zhì)含量測定：BCA定量法（二喹啉甲酸法）
原理：利用雙縮脲反應(yīng)原理由捎，在堿性條件下，蛋白質(zhì)肽鍵能夠和Gu2+結(jié)合饿凛，反應(yīng)生成Gu+狞玛，Gu+和BCA試劑反應(yīng)形成紫色的穩(wěn)定復(fù)合物，并在526nm處有很強(qiáng)的吸收峰涧窒。
BCA溶液：A液——含有氫氧化鈉心肪，最終PH為11.25，故提供堿性環(huán)境纠吴。B液——含有4％硫酸銅硬鞍，提供Gu2+。
BCA優(yōu)勢：① 簡單戴已，只需一步操作固该；② BCA試劑在堿性環(huán)境中穩(wěn)定；③ 不受去垢劑和變性劑的影響糖儡；④ 靈敏度高伐坏；
蛋白定量：取適量蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為0.5mg/ml握联。將標(biāo)準(zhǔn)品按0桦沉、1每瞒、2、4纯露、8独泞、12、16苔埋、20μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中懦砂，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20μl，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分 別為0组橄、0.025荞膘、0.05、0.1玉工、0.2羽资、0.3、0.4遵班、0.5mg/ml屠升。加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中。各孔加入200μl BCA工作液狭郑，37oC放置20-30分鐘腹暖。酶標(biāo)儀測定波長的吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白濃度翰萨。
紫外光譜吸收的原理：核酸/蛋白在紫外區(qū)有兩個吸收峰脏答，一個吸收峰在280nm處，由芳香族氨基酸中苯環(huán)的共軛雙鍵引起的亩鬼，大部分蛋白質(zhì)中的芳香族氨基酸含量差別不大殖告，故可以用溶液在280nm處的吸光值推算蛋白含量；另一個吸收峰由肽鍵引起雳锋，在240nm以下時光密度急劇增加黄绩，215nm處的吸收率為280nm處的數(shù)倍。
結(jié)果分析：1玷过、免疫印跡檢測技術(shù)測定的蛋白含量不是絕對值爽丹，而只能確定目的蛋白是否存在或者在可比條件下該蛋白含量的高低。2冶匹、使用管家基因表達(dá)的蛋白對目的蛋白含量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化习劫。3、屬于半定量分析嚼隘。
SDS-PAGE
Western?Blot (蛋白質(zhì)免疫印跡)
含義：是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法诽里。根據(jù)電泳區(qū)分不同分子量的蛋白組分，并轉(zhuǎn)移至固相支持物上飞蛹，通過特異性抗體作為探針對靶蛋白進(jìn)行檢測谤狡。
BCA定量：二價銅離子在堿性條件下灸眼，可以被蛋白質(zhì)還原成一價銅離子，一價銅離子和BCA相互作用產(chǎn)生穩(wěn)定的藍(lán)紫色復(fù)合物墓懂，在560nm處有吸光值焰宣，與蛋白質(zhì)濃度成正比。
WB的優(yōu)勢：它能夠從生物組織的粗提物或部分純化的粗提物中檢測和識別幾種特異的蛋白質(zhì)捕仔。
靈敏：由于它能夠檢測到樣品中低至0.1納克的蛋白質(zhì)匕积，因此該技術(shù)在理論上可以用作有效的早期診斷工具，甚至可以檢測出患者樣品中病毒或細(xì)菌產(chǎn)生的最小的免疫原性應(yīng)答榜跌。
專一：蛋白質(zhì)印跡技術(shù)的特異性歸因于兩個主要因素闪唆。首先，凝膠電泳將樣品分為大小钓葫，電荷和構(gòu)象不同的蛋白質(zhì)悄蕾。 這個過程本身就是朝著檢測邁出的重要一步，因為凝膠中形成的條帶已經(jīng)為目標(biāo)蛋白質(zhì)或多肽的大小提供了線索础浮》鳎抗體-抗原相互作用的特異性是第二大因素。由于特異性抗體顯示出對特定蛋白質(zhì)的親和力豆同，因此該過程甚至可以在300,
1000種不同蛋白質(zhì)的混合物中選擇性檢測目標(biāo)蛋白質(zhì)
缺點：容易產(chǎn)生錯誤或主觀的結(jié)果
