基于Edman降解的蛋白質(zhì)測(cè)序法的應(yīng)用

分子生物學(xué)方法通過(guò)對(duì)樣品基因測(cè)序班利,為獲取序列信息提供了一種快速的方法。隨著全基因組測(cè)序的發(fā)展榨呆,我們離獲知所有基因(也可以說(shuō)是所有蛋白質(zhì))序列信息的距離越來(lái)越近罗标。然而,僅僅對(duì)基因序列的了解愕提,并不能為我們提供蛋白質(zhì)功能相關(guān)的重要信息馒稍,如分子間和分子內(nèi)二硫化物鍵合模式、修飾或其他處理方式浅侨。蛋白質(zhì)序列測(cè)定則能實(shí)現(xiàn)這一目的纽谒,并且可以鑒定與特定發(fā)展階段或疾病發(fā)生相關(guān)的蛋白質(zhì)。

蛋白質(zhì)序列測(cè)定的最初目的即是為了確定蛋白質(zhì)的全部或部分序列如输,以便更好地了解其結(jié)構(gòu)和功能鼓黔。此方法中,結(jié)合其他特性(如蛋白質(zhì)分子量不见、PI或數(shù)量)澳化,僅需幾個(gè)殘基的短序列就可用已知基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行篩選。蛋白質(zhì)序列測(cè)定在保證“生物制藥”(分子生物學(xué)革命的產(chǎn)物)重組治療性蛋白質(zhì)的品質(zhì)上也扮演著重要角色稳吮。


Edman測(cè)序反應(yīng)過(guò)程(圖片來(lái)源:百泰派克)

艾德曼降解法測(cè)序(Edman降解法測(cè)序)是蛋白質(zhì)測(cè)序常用的方法之一缎谷。隨著各種質(zhì)譜方法的不斷補(bǔ)充和完善,Edman降解法可用于鑒定蛋白質(zhì)及其衍生物灶似,根據(jù)目標(biāo)肽到單個(gè)氨基酸殘基的片段化模式確定肽的序列列林。Edman降解蛋白質(zhì)測(cè)序法有多種用途:(以下引自百泰派克生物)

(1)驗(yàn)證蛋白表達(dá)產(chǎn)物:重組蛋白插入位點(diǎn)和表達(dá)順序是否正確

(2)驗(yàn)證細(xì)胞株建立和發(fā)酵過(guò)程中蛋白產(chǎn)物:驗(yàn)證細(xì)胞株建立和發(fā)酵過(guò)程中蛋白產(chǎn)物N端甲硫氨酸和信號(hào)肽是否正確處理瑞你;

(3)分析蛋白降解/酶切:對(duì)降解/酶切形成的新蛋白片段N端進(jìn)行分析,確定斷裂/酶切位點(diǎn)希痴;

(4)De-novo測(cè)序:對(duì)于蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)中不存在的全新蛋白序列進(jìn)行分析者甲。

作者:西西里的傳說(shuō)

來(lái)源:LOFTER

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