1. ? ? 裂解液成分了解：
（1）大多有效成分都是去垢劑，那么去垢劑是什么呢义桂？
去垢劑功能的關(guān)鍵是具有兩親結(jié)構(gòu)漱竖。所有的去垢劑都具有親水“頭部”區(qū)域和疏水“尾部”區(qū)域這一特征，常用的陰離子去垢劑SDS結(jié)構(gòu)如圖：
這些結(jié)構(gòu)特性使得去垢劑可以在水性介質(zhì)中聚集囚企。在足夠高的濃度下丈咐，每個分子的極性親水區(qū)域朝向極性溶質(zhì)（水），而疏水區(qū)域聚集在一起龙宏，形成一個具有疏水核心的熱力學(xué)穩(wěn)定的膠束棵逊。去垢劑膠束的疏水核心區(qū)域與蛋白質(zhì)的疏水表面結(jié)合，形成可溶性的蛋白質(zhì)-去垢劑復(fù)合物烦衣。
去垢劑根據(jù)其親水基團的不同分為：陰/陽離子去垢劑歹河、非離子型兩性去垢劑、兩性去垢劑花吟。
a 陰/陽離子型去垢劑：作用強烈秸歧，會更大程度的改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，更容易受到pH衅澈、離子強度和反離子的性質(zhì)等因素影響键菱；
b 非離子型去垢劑：作用溫和，由于不分離蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)鍵今布，非離子型去垢劑使得蛋白質(zhì)可以保留其天然的結(jié)構(gòu)和功能经备，不易變形（疏水鏈長度較短的去垢劑更易引起蛋白質(zhì)失活）；
c 兩性去垢劑：相對于離子型去垢劑其更少產(chǎn)生變性部默，相對于非離子型去垢劑侵蒙，又可以更有效的破壞蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)鍵并減少聚集。
（2）配置裂解液都需要Tris緩沖液傅蹂，又是什么呢纷闺？
a. Tris學(xué)名叫三羥甲基氨基甲烷算凿，它和Tris-base是一個東西，1M的Tris溶液的pH值大約是10～11犁功，即常說的Tris堿氓轰；
b. Tris-cl和Tris-HCl是一個東西，就是寫法上有所不同浸卦，即常說的Tris酸署鸡；
c. Tris-HCl就是在Tris-base的溶液中加入適當量的鹽酸，調(diào)成你所需要的PH值限嫌。
2. ?? 常用裂解液種類：
（1）NP40 lysis buffer：
a. 主要成分50mM Tris(pH7.4)靴庆，150mM NaCl，1% NP-40萤皂。
b. 概述：NP-40是一種很溫和的非離子型去垢劑撒穷，1%濃度基本可以破壞掉細胞膜，而對核膜的破壞作用較弱裆熙，結(jié)合特定的緩沖液可以獲得胞漿蛋白端礼。與蛋白結(jié)合力強，用于防止物質(zhì)分子疏水間相互作用入录，確保蛋白的充分溶解和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定蛤奥。
c. 用途：常規(guī)的Western、IP和co-IP和ELISA僚稿，本實驗室是做核蛋白的凡桥，由于獲取核蛋白需要裂解細胞核膜，因此本lab WB實驗用1%NP40+0.1%SDS（可使蛋白變形）蚀同，IP/pull down實驗用1%NP40+超聲（保留蛋白結(jié)構(gòu)）缅刽。
（2）SDS lysis buffer：
a. 主要成分：50mM Tris (pH8.1)，1% SDS
b. 概述：是一種比較強烈的細胞組織裂解液蠢络，可裂解核膜衰猛。在SDS-PAGE電泳中，SDS能使蛋白氫鍵和疏水鍵打開并結(jié)合蛋白分子刹孔，使各種蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物都帶上相同密度電荷且遠遠超過蛋白分子原有電荷啡省，從而掩蓋蛋白間電荷差別，使得電泳遷移率只取決于分子大小這一因素髓霞。
c. 用途：用于常規(guī)Western卦睹、ChIP等
各種常用裂解液的比較推薦參考碧云天網(wǎng)頁：https://www.beyotime.com/lysis-buffer.htm
