1. 相關(guān)知識：
- 通道命名方式:
以FL(fluorescence)加數(shù)字命名昔穴，如FL1霹菊、FL2剧蚣、FL3等。以該通道接收的主要熒光素命名，如FITC通道鸠按、PE通道礼搁、APC通道等。
For example: FACSCalibur有 488nm和633nm兩根激光器目尖，488nm能檢測FSC馒吴、SSC、FL1(FITC)瑟曲、FL2(PE)饮戳、FL3(Perd635能檢測FL 4(APC),代表Calibur有6個通道，最多能同時檢測4個熒光测蹲，6種參數(shù)莹捡。 - 般FSC和SSC變異范圍較小鬼吵，故使用線性放大;熒光信號變異范圍較大扣甲，多使用對數(shù)放大。
- SSC方向與激光束和液流形成的平面相垂直齿椅，亦稱90度散射光琉挖，其信號強度反映細(xì)胞內(nèi)部顆粒度和精細(xì)結(jié)構(gòu)的變化。FSC信號方向與激光束平行涣脚，偏離度- -般在1 -6度范圍內(nèi),亦稱小角度散射光示辈，主要反映被測細(xì)胞的體積大小和活力。實驗中遣蚀，常利用FSC和SSC這兩種參數(shù)的組合矾麻，區(qū)分不同的細(xì)胞群體，去除碎片芭梯、死細(xì)胞和粘連細(xì)胞的干擾险耀。
- 曲線調(diào)整原則:粉色的曲線為模型曲線,黑色的為樣本曲線，理想狀況是粉色和黑色曲線吻合-致為
最佳玖喘。擬和的好壞可以根據(jù)右邊的RMS值來判斷甩牺。RMS(root mean square)值越小越好。但是這只是一
個相對值累奈，只在同樣本不同模擬情況下贬派，選取最小值來達(dá)到最佳擬和。你可以選中G1期的峰或G2期的
峰澎媒，根據(jù)調(diào)節(jié)按鈕調(diào)節(jié)峰的寬度 - 含義：
- G1期含義:細(xì)胞進行大量物質(zhì)合成時期搞乏，為DNA合成做準(zhǔn)備。
- S期含義:開始至完成DNA的合成以及合成組蛋白戒努。
- G2/M期的含義: DNA復(fù)制結(jié)束和開始有絲分裂之間的間隙请敦。
通常，根據(jù)G1期、S期冬三、G2期的百分含量來判斷細(xì)胞周期的變化匀油。相對于正常的細(xì)胞，加藥或者照射
的細(xì)胞的周期可能會發(fā)生變勾笆。- -般根據(jù)S+G2期的百分含量判斷處理后的細(xì)胞是促進增殖還是抑制增殖敌蚜。
凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生 DNA片段化(DNA fragmentation)導(dǎo)致部分基因組DNA片斷在染色過程中丟失，因此凋 亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染窝爪，即熒光強度小于1弛车，在流式檢測的熒光圖上出 現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細(xì)胞峰蒲每。
2. 軟件操作：
- 打開flowjo軟件纷跛，將要分析的fsc文件直接拖入軟件中
- 去除細(xì)胞碎片（圈主細(xì)胞）：雙擊其中一個，調(diào)節(jié)橫坐標(biāo)為“FSC-坐標(biāo)liner處理” 縱坐標(biāo)為“SSC-坐標(biāo)log處理”邀杏，并用像“箭頭”一樣的圈出待分析的細(xì)胞群贫奠，可將細(xì)胞命名或默認(rèn)為“l(fā)ymphcytes”
- 選單細(xì)胞（去除粘附細(xì)胞，多核細(xì)胞等）：橫坐標(biāo)設(shè)置“熒光指標(biāo)-A（A:面積）”望蜡，縱坐標(biāo)設(shè)置“熒光指標(biāo)-H（H:高度）” 【X軸選擇FL3-LIN,用來表示PI的線性信號唤崭。Y軸選擇FL3-PEAK,用來表示PI的峰值信號。本實驗數(shù)據(jù)采集采用的是貝克曼儀器采集的數(shù)據(jù)脖律。（如果是****BD的儀器采集的數(shù)據(jù)谢肾，X軸選擇FL2-W,用來表示PI的寬度信號。Y軸選****擇FL2-A,用來表示PI的面積信號）小泉，如上圖所示多倍體或異倍體細(xì)胞不予分析芦疏。】
- “tools” --- "cell cycle"
- 通常：G2是G1的兩倍微姊，也可以將G1的mean設(shè)定一個范圍
