第四部分 臨床免疫學(xué)檢驗

一吹散、免疫學(xué)概論

（一）免疫的概念

1近上、免疫概念

現(xiàn)代免疫的概念是機(jī)體免疫系統(tǒng)識別和排斥抗原性異物的一種特異性生理功能。這種反應(yīng)在生理條件下對機(jī)體有利钧栖，在病理條件下對機(jī)體有害锋爪。

2、免疫功能

免疫功能主要表現(xiàn)為以下三種生理功能：

（1）免疫防御：指機(jī)體排斥微生物的侵襲及其他外源性抗原異物的能力姥宝。過高產(chǎn)生超敏反映翅萤；過低引起免疫缺陷病。

（2）免疫自穩(wěn)：機(jī)體識別和清除自身衰老殘損的組織腊满、細(xì)胞的能力套么，借以維持正常內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，失調(diào)時引起自身免疫病碳蛋。

（3）免疫監(jiān)視：機(jī)體殺傷和清除異常突變細(xì)胞的能力胚泌，一旦功能低下可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生或病毒持續(xù)感染。

二疮蹦、免疫應(yīng)答反應(yīng)

1、免疫應(yīng)答概念茸炒、特征

? ? 免疫應(yīng)答是機(jī)體免疫系統(tǒng)接受抗原刺激發(fā)生一系列反應(yīng)愕乎，并以排出或分解該抗原物質(zhì)為目的的反應(yīng)過程阵苇。免疫應(yīng)答反應(yīng)的重要特征是識別自身和非己、特異性和記憶性感论。免疫應(yīng)答包括固有免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答绅项。

（1）固有免疫應(yīng)答：在正常機(jī)體內(nèi)任何時段均以抗原非特異性方式識別和清除各抗原異物和病原體，稱為非特異性免疫應(yīng)答比肄，如人體的血腦屏障快耿、胎盤屏障、皮膚屏障芳绩。

（2） 適應(yīng)性免疫應(yīng)答：免疫細(xì)胞在機(jī)體選擇識別某種抗原后掀亥，自身活化、增殖妥色、分化為免疫效應(yīng)細(xì)胞搪花，產(chǎn)生免疫效應(yīng)分子，排除該抗原的全過程嘹害，也稱為特異性免疫應(yīng)答撮竿。

2、免疫應(yīng)答過程

? ? 免疫應(yīng)答的基本過程分為識別階段笔呀、淋巴細(xì)胞活化階段和效應(yīng)階段幢踏。

（1）識別階段：指巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和活化B細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞攝取和加工處理抗原并提呈抗原肽供T細(xì)胞識別许师，此過程又稱為感應(yīng)階段房蝉。

（2）淋巴細(xì)胞活化階段：指接受抗原信號后的T、B淋巴細(xì)胞在一系列免疫分子參與下枯跑，發(fā)生活化恼除、增殖和分化的階段。其中T淋巴細(xì)胞接受抗原刺激和協(xié)同刺激信號后活化佑稠、增殖和分化為效應(yīng)T細(xì)胞晤揣，并合成細(xì)胞因子；B淋巴細(xì)胞接受抗原刺激后活化纳击、增殖和分化為漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體续扔。此過程又稱為反應(yīng)階段。

（3）效應(yīng)階段：抗體焕数、Tc纱昧、TD或細(xì)胞因子等對抗原發(fā)揮免疫效應(yīng)的階段。

3堡赔、體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答

? ? 適應(yīng)性免疫應(yīng)答根據(jù)淋巴細(xì)胞發(fā)揮的效應(yīng)可分為B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫和T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫识脆。

（1）B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫：根據(jù)抗原性質(zhì)不同分為對胸腺依賴性抗原（TD抗原）和對胸腺非依賴性抗原（TI抗原）。經(jīng)抗原刺激后，B淋巴細(xì)胞活化灼捂、增殖分化為漿細(xì)胞离例，由漿細(xì)胞合成分泌抗體發(fā)揮作用。）

（2）T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫：是由抗原提呈細(xì)胞攝取加工TD抗原悉稠，并選擇相應(yīng)抗原肽提呈給T細(xì)胞宫蛆；T細(xì)胞接受抗原信號和協(xié)同刺激信號后，活化的猛、增殖和分化為效應(yīng)T細(xì)胞耀盗。其中Th1細(xì)胞合成分泌多種細(xì)胞因子，可引起遲發(fā)型超敏反應(yīng)卦尊；Tc細(xì)胞則直接殺傷表達(dá)相應(yīng)抗原的靶細(xì)胞及誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡叛拷。細(xì)胞免疫主要發(fā)揮抗細(xì)胞內(nèi)寄生菌感染、抗病毒感染猫牡、抗寄生蟲感染與抗腫瘤免疫效應(yīng)胡诗。

三、免疫組織及免疫器官

1淌友、免疫系統(tǒng)概念

免疫系統(tǒng)是由免疫器官煌恢、免疫組織、免疫細(xì)胞和免疫分子組成震庭，是機(jī)體免疫應(yīng)答發(fā)生的場所瑰抵。

2、免疫器官

? ? 分為中樞免疫器官和外周免疫器官器联。

（1）中樞免疫器官：是免疫細(xì)胞發(fā)生二汛、分化和發(fā)育成熟的場所，包括骨髓拨拓、胸腺和鳥類法氏囊肴颊。

? ? ①骨髓：在骨髓中，多能造血干細(xì)胞分化渣磷、發(fā)育生成B淋巴細(xì)胞婿着。

? ? ②胸腺：是T淋巴細(xì)胞分化成熟的場所。

（2）外周免疫器官：是免疫細(xì)胞聚集增殖和免疫應(yīng)答發(fā)生的場所醋界。包括淋巴結(jié)竟宋、脾及粘膜相關(guān)淋巴組織等。

①淋巴結(jié)：是成熟T細(xì)胞和B細(xì)胞定居增殖的組織形纺。

②脾：是富含血管的最大的外周淋巴器官丘侠。

③伴隨的淋巴組織：如扁桃體、小腸Peger集合淋巴結(jié)逐样、闌尾等蜗字。

四打肝、免疫細(xì)胞

? ? 凡參與免疫應(yīng)答以及與免疫應(yīng)答有關(guān)的細(xì)胞統(tǒng)稱為免疫細(xì)胞。按作用方式可分為淋巴細(xì)胞挪捕、單核-巨噬細(xì)胞以及其它免疫細(xì)胞（包括粒細(xì)胞闯睹、嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞和肥大細(xì)胞等）担神，其中免疫活性細(xì)胞主要指淋巴細(xì)胞。

? ? 免疫細(xì)胞依其參與免疫應(yīng)答類型不同可分為非特異性的固有免疫細(xì)胞和特異性的適應(yīng)性免疫細(xì)胞兩大類始花，其中適應(yīng)性免疫細(xì)胞主要包括專職抗原提呈細(xì)胞妄讯、T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞。

1酷宵、T細(xì)胞

? ? 外周血中T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的70%～75%亥贸，主要功能是：抗原識別、細(xì)胞免疫浇垦、免疫調(diào)節(jié)炕置。T細(xì)胞表面標(biāo)志分表面受體及表面抗原兩類。

（1）T細(xì)胞受體（TCR）：又稱T細(xì)胞抗原受體男韧，由膜分子TCR和CD3構(gòu)成的復(fù)合體朴摊，是所有成熟T細(xì)胞的獨(dú)特標(biāo)志性膜蛋白分子，可表達(dá)于所有成熟T細(xì)胞表面此虑，接受并轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞活化的抗原信號（第一信號）甚纲。人類免疫缺陷病毒（HIV）選擇性感染CD4+T細(xì)胞，使CD4+T細(xì)胞減少朦前。而致有絲分裂原受體可使絲裂原刺激靜止期淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為原淋巴細(xì)胞介杆，發(fā)生有絲分裂而增殖。實驗室常用植物血凝素（PHA）和刀豆蛋白A（ConA）作原淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的試驗韭寸。

（2）簇分化抗原（CD）：是有核細(xì)胞在分化成熟過程中春哨，不同的發(fā)育階段和不同亞類的淋巴細(xì)胞可表達(dá)不同的分化抗原，是區(qū)別淋巴細(xì)胞的重要標(biāo)志恩伺。T細(xì)胞主要CD抗原有：

①CD2：表達(dá)于全部人T細(xì)胞和NK細(xì)胞表面赴背，是成熟T細(xì)胞的特有標(biāo)志，主要配體是CD58莫其，又稱綿羊紅細(xì)胞受體（E受體）癞尚，可利用結(jié)合綿羊紅細(xì)胞的E花環(huán)試驗測定外周血中T細(xì)胞總數(shù)。

②CD3：表達(dá)在全部T細(xì)胞表面乱陡，是T細(xì)胞共同的表面標(biāo)志浇揩，與TCR構(gòu)成復(fù)合體共同識別抗原并傳導(dǎo)活化第一信號。

③CD4/CD8：MHC分子受體表達(dá)于外周血不同T細(xì)胞亞群表面憨颠，是區(qū)別T細(xì)胞亞群的重要標(biāo)志胳徽，成熟TCRαβ-T細(xì)胞依據(jù)細(xì)胞膜的CD4/CD8分子分為CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞2個亞群积锅。表達(dá)CD4主要是輔助性T細(xì)胞（Th）：Th細(xì)胞膜表達(dá)CD4分子，可特異識別結(jié)合MHC-II類分子提呈的相應(yīng)外源性抗原肽养盗，活化為Th1和Th2細(xì)胞缚陷。表達(dá)CD8主要是細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL或Tc）：Tc細(xì)胞膜表達(dá)CD8分子，可特異識別結(jié)合MHC-I分子提呈的相應(yīng)內(nèi)源性抗原肽而被活化往核。

③協(xié)同刺激分子及受體：CD28：與抗原提呈細(xì)胞膜表面配體CD80/ CD86分子結(jié)合后箫爷，接受T細(xì)胞活化的第二信號。CD154（CD40L）：與B細(xì)胞膜表面的CD40結(jié)合后聂儒，提供B細(xì)胞活化第二信號虎锚。

④絲裂原受體：T細(xì)胞膜上特有植物血凝素（PHA）受體和刀豆蛋白A（ConA）受體，此外T細(xì)胞與B細(xì)胞膜上都表達(dá)有美洲商陸(PWM)受體衩婚，靜息T細(xì)胞與PHA/ConA/PWM結(jié)合后可活化窜护、增殖和分化。

T細(xì)胞表面具有SRBC受體非春、絲裂原受體柱徙、抗原受體及白細(xì)胞介素受體。

⑤T細(xì)胞功能

Th細(xì)胞：主要功能是免疫調(diào)節(jié)：①Th1細(xì)胞奇昙，主要通過分泌多種細(xì)胞因子參與細(xì)胞免疫护侮；②Th2細(xì)胞，主要功能是調(diào)節(jié)體液免疫應(yīng)答储耐，通過提供B細(xì)胞活化第二信號（協(xié)同信號）和細(xì)胞因子概行，輔助B細(xì)胞活化及轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞合成抗體。

Tc細(xì)胞：主要效應(yīng)是直接殺傷帶有相應(yīng)Ag的靶細(xì)胞（如病毒感染細(xì)胞弧岳、腫瘤細(xì)胞等）或誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡凳忙。具有特異殺傷、溶解靶細(xì)胞作用禽炬。

2涧卵、B細(xì)胞

? ? B細(xì)胞受抗原刺激后分化為漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體，主要免疫功能有：產(chǎn)生抗體腹尖；攝取柳恐、加工與提呈抗原；分泌細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)热幔。

（1）B細(xì)胞的表面標(biāo)志

①膜免疫球蛋白（mIg）：又稱BCR乐设，是由膜免疫球蛋白（mIg）與CD79聚合構(gòu)成，是B細(xì)胞最具特性的表面標(biāo)志绎巨，接受并轉(zhuǎn)導(dǎo)B細(xì)胞活化的抗原信號（第一信號）近尚，主要作用是結(jié)合抗原，未成熟B細(xì)胞膜一般只表達(dá)mIgM场勤，成熟B細(xì)胞的mIg主要為mIgM戈锻、mIgD歼跟。

②CD5分子：根據(jù)有無表達(dá)CD5，可將B細(xì)胞區(qū)分為B1（CD5+）格遭、B2（CD5-）細(xì)胞兩個亞群哈街。

③CD21分子：是B細(xì)胞上的EB病毒受體，是B細(xì)胞活化輔助受體的一個組成部分拒迅。

④絲裂原受體：B細(xì)胞膜特有的絲裂原受體是脂多糖（LPS）受體和葡萄球菌A蛋白（SPA）受體骚秦，也表達(dá)美洲商陸（PWM）受體。靜息B細(xì)胞與LPS/SPA/PWM結(jié)合后可活化璧微、增殖和分化骤竹。

⑤CD32：B細(xì)胞抑制性輔助受體，EAC花環(huán)往毡。

⑥協(xié)同刺激分子及受體：CD40：表達(dá)于成熟B細(xì)胞膜表面。CD40與活化T細(xì)胞膜上的CD154（CD40L）結(jié)合后靶溜，接受B細(xì)胞活化必需的第二信號开瞭；CD80/CD86（也分別命名為B7-1/B7-2）：主要表達(dá)于活化B細(xì)胞。CD80/CD86與T細(xì)胞膜CD28結(jié)合后罩息，T細(xì)胞獲得活化第二信號嗤详。

（2）B細(xì)胞功能：①分化為漿細(xì)胞合成抗體；②攝取瓷炮、加工與提呈抗原葱色；③分泌細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)。

3娘香、免疫輔助細(xì)胞

? ? 吞噬細(xì)胞包括單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)和中性粒細(xì)胞苍狰，其共同特性是表達(dá)MHC-II類分子及具有吞噬作用。

（1）NK細(xì)胞

? ? 自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）是一類不表達(dá)特異性抗原受體的大顆粒淋巴細(xì)胞烘绽，沒有獨(dú)特的膜標(biāo)志淋昭， NK細(xì)胞無需抗原刺激，可分泌穿孔素和細(xì)胞因子直接殺傷微生物感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞（靶細(xì)胞）安接，可通過“抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）”殺傷靶細(xì)胞翔忽，也可誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡，是執(zhí)行免疫監(jiān)視功能的重要細(xì)胞盏檐。目前將CD56+歇式、CD16+、CD94+胡野、TCR-材失、BCR-、CD3-的淋巴樣細(xì)胞鑒定為NK細(xì)胞硫豆。NK細(xì)胞是固有免疫應(yīng)答細(xì)胞豺憔，其主要功能有：①抗腫瘤免疫额获；②抗細(xì)胞內(nèi)感染免疫；③分泌IFN-γ恭应、TNF-β等細(xì)胞因子抄邀，參與免疫調(diào)節(jié)作用。

（2）單核-巨噬細(xì)胞

? ? 吞噬細(xì)胞包括血液中的單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞以及組織中的巨噬細(xì)胞昼榛。單核-巨噬細(xì)胞的免疫功能有：①吞噬作用：單核-巨噬細(xì)胞能直接吞噬和殺傷病原微生物境肾；②攝取、加工和提呈抗原：Mφ是一類專職抗原提呈細(xì)胞胆屿，可利用MHC-П分子給CD4+T細(xì)胞提呈外源性抗原肽奥喻；③調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答：Mφ對免疫應(yīng)答具有正調(diào)節(jié)或負(fù)調(diào)節(jié)的雙向調(diào)節(jié)作用；④抗腫瘤作用：充分活化的Mφ能直接吞噬腫瘤細(xì)胞或殺傷腫瘤細(xì)胞非迹；⑤參與局部炎癥反應(yīng)：Mφ合成分泌TNF-α环鲤、IL-1、IL-6及LTB4等炎性介質(zhì)引起局部炎癥反應(yīng)憎兽。

免疫學(xué)常見考點(diǎn)（二）

五冷离、免疫球蛋白

1、基本概念

（1）抗體(Ab)：是B淋巴細(xì)胞受抗原刺激纯命、增殖分化為漿細(xì)胞后合成并分泌至血液和體液中西剥，能與該抗原特異性結(jié)合具有免疫功能的球蛋白。

（2）免疫球蛋白（Ig）：是所有具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白亿汞。免疫球蛋白可分為分泌型（sIg）及膜型(mIg)瞭空。所有的抗體均是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗體疗我。

2咆畏、Ig基本結(jié)構(gòu)

? ? Ig分子是一“Y”字形四肽鏈結(jié)構(gòu)，由4條肽鏈借鏈間二硫鍵連接組成吴裤。單體Ig分子是由2條相同重鏈（H鏈）借二硫建在中部相連鳖眼，而2條相同輕鏈（L鏈）又借二硫建各與一條重鏈（H鏈）連接，形成一種對稱性四肽鏈分子嚼摩。

① L鏈：按抗原性差異分為κ和λ型钦讳，其中λ型又分為4個亞型。同一種Ig分子的2條L鏈都是同型的枕面，即都是κ型或都是λ型愿卒，不會是混型的。

② H鏈：按抗原性差異分為γ潮秘、α琼开、δ、ε枕荞、μ五類柜候，因此Ig也相應(yīng)地分為IgG搞动、IgA、IgM渣刷、IgD鹦肿、IgE。分別是重鏈為γ類型的IgG（分為IgG1辅柴、2箩溃、3、4亞類）碌嘀、重鏈為α類型的IgA（分為IgA1涣旨、2亞類）、重鏈為μ類型的IgM股冗、重鏈為δ類型的IgD霹陡、重鏈為ε類型的IgE。每一個Ig單體分子的2條H鏈也是同類型的止状，不會是混型的烹棉。

3、Ig功能區(qū)

? ? Ig的三維結(jié)構(gòu)含有若干功能區(qū)导俘，每一功能區(qū)大約由110個氨基酸殘基的區(qū)段組成，該區(qū)段內(nèi)有一對鏈內(nèi)二硫鍵剔蹋，使這一區(qū)段肽鏈折疊構(gòu)成一個球狀結(jié)構(gòu)域旅薄，每一結(jié)構(gòu)域都有一定的功能。

①易變區(qū)（V區(qū)）：Ig的L鏈和H鏈N端的第一個結(jié)構(gòu)域因氨基酸順序多變稱為易變區(qū)泣崩，分別為VL和VH少梁。VL和VH經(jīng)β折疊形成抗原結(jié)合腔，能與對應(yīng)抗原決定基在空間構(gòu)象上精確互補(bǔ)而特異結(jié)合矫付。

②恒定區(qū)（C區(qū)）：V區(qū)以外的部分凯沪，Ig的L鏈和H鏈C端氨基酸組成和排列較恒定稱為恒定區(qū)，分別為CL和CH买优。CL的抗原性是Ig分型或亞型的依據(jù)妨马，而CH的抗原性是Ig分類或亞類的依據(jù)。此外CL和CH還可能分布有個體遺傳標(biāo)志抗原位點(diǎn)杀赢，C1區(qū)由CL與CH1區(qū)構(gòu)成烘跺；C2由兩個CH2構(gòu)成，IgG的CH2與補(bǔ)體C1q結(jié)合可激活補(bǔ)體脂崔；C3由兩個CH3構(gòu)成滤淳，IgG的CH 3與IgG FCR結(jié)合發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用，IgM的C3區(qū)有補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)砌左；IgM和IgE還有一個C4區(qū)脖咐，由兩個CH4構(gòu)成铺敌，IgE的CH4與肥大細(xì)胞膜上IgE FCR結(jié)合則引發(fā)Ⅰ型超敏反應(yīng)。

③鉸鏈區(qū)：是Ig的CH1 和CH2間的結(jié)構(gòu)松散可展開改變Ig構(gòu)型的肽段屁擅。鉸鏈區(qū)不易形成α螺旋偿凭，富有彈性，張合自如煤蹭，抗體分子的這種變構(gòu)性質(zhì)使補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)易于暴露笔喉。

4、Ig的水解片段

IgG的鉸鏈區(qū)二硫鍵兩端有木瓜蛋白酶和胃蛋白酶的水解位點(diǎn)硝皂。

木瓜蛋白酶在IgG的鉸鏈區(qū)二硫鍵的N端裂解使之成為三個片段：兩個相同的Fab和一個Fc段常挚。Fab由L鏈和VH- CH1構(gòu)成，保留了可變區(qū)完整的抗原結(jié)合區(qū)稱為抗原結(jié)合片段稽物；Fc由兩條H鏈的CH2 和CH3區(qū)構(gòu)成稱為可結(jié)晶片段奄毡，F(xiàn)c段可與細(xì)胞膜表面相應(yīng)Fc受體結(jié)合，介導(dǎo)免疫細(xì)胞發(fā)揮免疫效應(yīng)贝或。

胃蛋白酶水解IgG分子吼过，則從鉸鏈區(qū)雙硫鍵的近C端裂解，將IgG裂解為大小兩個片段咪奖。大片段F（ab’）由2個Fab借鉸鏈區(qū)二硫鍵連接而成盗忱，保持完整IgG與抗原結(jié)合的功能；小片段PFc’進(jìn)一步酶解為無抗原性羊赵、無任何生物活性的小分子肽趟佃。

5、各類免疫球蛋白的特征與功能

（1）IgG：IgG是血清和組織液中含量最多的免疫球蛋白（約占血清Ig總量的80%）昧捷，多為單體闲昭，少量以多聚體形式存在，約有50%IgG在血清中靡挥，其余廣泛分布于各組織的細(xì)胞外液中序矩。分子量最小。

其重要作用有：

①IgG是主要的抗感染抗體跋破，大多數(shù)抗菌抗體簸淀、細(xì)菌毒素或病毒的中和抗體都是IgG，是再次免疫應(yīng)答的主要抗體也是唯一能通過胎盤的抗體毒返。

②保護(hù)胎兒和新生兒啃擦，是胎兒和新生兒的被動抗感染抗體。

③激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑饿悬，IgG1令蛉、IgG3與抗原特異結(jié)合后，可高效激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，導(dǎo)致溶血及溶細(xì)胞效應(yīng)珠叔。而IgG4只能參與替代途徑蝎宇。

④介導(dǎo)免疫細(xì)胞效應(yīng)，IgGV區(qū)特異性結(jié)合抗原后祷安，其Fc段可與Mф姥芥、NK細(xì)胞表面的Fc受體結(jié)合，發(fā)揮免疫調(diào)理和ADCC作用等汇鞭。

⑤參與免疫病理損傷凉唐，IgG1技潘、2最楷、3可參與II饰序、III型超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病刘急，而IgG4可參與Ⅰ型超敏反應(yīng)。

（2）IgA：IgA有2種存在形式：①血清型：主要由腸系膜淋巴組織的漿細(xì)胞產(chǎn)生宾舅，血清中絕大多數(shù)IgA是單體骇径。具有抗菌臀规、抗毒米间、抗病毒作用强品。②分泌型（SIgA）：由呼吸道、消化道屈糊、泌尿生殖道等處黏膜固有層中的漿細(xì)胞產(chǎn)生的榛，為二聚體，每一SIgA分子含一個J鏈和一個分泌片逻锐。SIgA是各種粘膜細(xì)胞外分泌液中的主要抗體夫晌，也存在于部分腺體分泌液中，如乳汁（初乳中含量最多的抗體是SIgA）谦去、唾液慷丽、淚液蹦哼。嬰兒可從母乳中獲得SIgA鳄哭，是一種重要的被動免疫。SIgA性能穩(wěn)定纲熏，局部濃度大妆丘，是參與黏膜局部免疫的主要抗體。

（3）IgM：是初次體液免疫應(yīng)答早期階段產(chǎn)生的主要Ig局劲，主要產(chǎn)生于脾和淋巴結(jié)抗全身感染的作用較強(qiáng)勺拣。IgM主要有2種存在形式：①單體IgM：是表達(dá)于B細(xì)胞

膜表面mIgM，參與構(gòu)成BCR復(fù)合體鱼填，選擇識別與結(jié)合抗原药有。②血清型IgM：5個單體IgM借J鏈鏈接為五聚體，是分子量最大的抗體（970kD）不能通過血管壁，主要存在與血清中愤惰。其重要免疫功能有：血液抗感染抗體苇经，因含10個抗原結(jié)合區(qū)，具有很強(qiáng)的抗原結(jié)合能力宦言，是重要的血液抗感染抗體扇单；激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，

IgM的CH3區(qū)共有10個補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)奠旺，是激活補(bǔ)體的能力最強(qiáng)的抗體蜘澜；宮內(nèi)感染診斷依據(jù)，在胎兒發(fā)育后期（約20周）開始有合成IgM的能力响疚，由于母體IgM不能通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)鄙信，因此如果臍帶血或新生兒血液中特異性IgM量較高的話，則提示新生兒曾受到宮內(nèi)感染稽寒；早期感染診斷依據(jù)扮碧，機(jī)體受抗原刺激后

最先合成IgM，接著是 IgG杏糙。當(dāng)大量IgG合成時慎王，IgM合成量則相應(yīng)減少。因此宏侍，檢查血清特異性IgM含量可用作傳染病的早期診斷赖淤。

（4）IgE：IgE主要由黏膜下淋巴組織的漿細(xì)胞分泌，單體結(jié)構(gòu)谅河，其重鏈含5個功能區(qū)咱旱，是正常人血清中含量最少的Ig（0.3μg/ml）。IgE具有很強(qiáng)的親細(xì)胞性绷耍，其Fc段可與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面的FcεRⅠ結(jié)合吐限，介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)。此外IgE還參與機(jī)體抗寄生蟲免疫褂始。

（5）IgD：IgD為單體結(jié)構(gòu)诸典，血清IgD的生物學(xué)功能尚不清楚，僅占血清總量的0.2%崎苗。mIgD參與構(gòu)成BCR狐粱，成熟B細(xì)胞同時表達(dá)。mIgM和mIgD胆数。

5類免疫球膽白在人體的含量順序IgG＞IgA＞IgM＞IgD＞IgE肌蜻。

6、目前臨床上免疫球蛋白（除IgE外）定量的最佳方法是：免疫濁度試驗（速率散射比濁法）必尼。免疫球蛋白測定最常用的方法為免疫比濁法蒋搜。

六、抗原

1、概念

抗原是指能啟動機(jī)體免疫應(yīng)答豆挽，并能與相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物（抗體或效應(yīng)靶細(xì)胞）在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)酸休。

一個完整的抗原一般具有兩個特性：免疫原性和免疫反應(yīng)性（抗原性），免疫原性是指抗原能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答祷杈，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體或效應(yīng)淋巴細(xì)胞的能力斑司。抗原性是指抗原與所誘導(dǎo)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體或效應(yīng)淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的能力但汞。具有免疫原性和抗原性的物質(zhì)稱為完全抗原宿刮，僅具備抗原性而無免疫原性的物質(zhì)稱為不完全抗原或半抗原。

2私蕾、人體的隱蔽抗原有眼球內(nèi)部的晶體蛋白僵缺、甲狀腺球蛋白、腦組織踩叭、精子等磕潮。

3、抗原的分子量越大容贝、化學(xué)結(jié)構(gòu)越復(fù)雜自脯，免疫原性越強(qiáng)。

4斤富、抗原特異性的決定因素是抗原決定簇膏潮。

5、不同抗原具有相同或相似抗原決定簇是導(dǎo)致抗原與抗體結(jié)合發(fā)生交叉反應(yīng)的主要原因满力。

6焕参、抗原的分類：

（1）異種抗原：指來自于另一物種的抗原，如病原微生物油额、細(xì)菌外毒素和類毒素叠纷、動物免疫血清等。

（2）同種異型抗原：指同一種屬不同個體之間存在的抗原性物質(zhì)潦嘶。如血型抗原涩嚣、HLA。

（3）異嗜性抗原：是一類與種屬特異性無關(guān)衬以，存在于人缓艳、動植物和微生物之間的共同抗原校摩，如溶血性鏈球菌表面成分與人腎小球基底膜及心肌組織具有共同抗原看峻。

（4）自身抗原：在正常情況下，機(jī)體對自身組織細(xì)胞不會產(chǎn)生免疫應(yīng)答衙吩，即自身耐受互妓。

七、補(bǔ)體系統(tǒng)

1、概念

? ? 補(bǔ)體系統(tǒng)是存在于人和脊椎動物正常新鮮血清及組織液中的一組具有酶樣活性的糖蛋白冯勉，包括30余種可溶性蛋白和膜結(jié)合蛋白澈蚌，當(dāng)被某種物質(zhì)激活后，表現(xiàn)出多種酶活性和其他生物學(xué)效應(yīng)灼狰。血清中90%的補(bǔ)體是在肝臟中合成的宛瞄，肝細(xì)胞和庫普弗（Kupffer cell）細(xì)胞是主要合成細(xì)胞。

2交胚、補(bǔ)體的理化特性

補(bǔ)體的化學(xué)成分是糖蛋白份汗，在電泳時，大多數(shù)屬于β球蛋白蝴簇，少數(shù)屬α（如C1s和D因子）和γ球蛋白（C1q）杯活。補(bǔ)體化學(xué)性質(zhì)很不穩(wěn)定，易受各種理化因素影響熬词；在0～10℃下活性只保持3～4天旁钧，冷凍干燥可較長時間保持其活性；不耐熱互拾，56℃ 30min可滅活歪今；強(qiáng)酸強(qiáng)堿、強(qiáng)烈振蕩颜矿、乙醚彤委、乙醇、蛋白酶等均可使其滅活或衡，甚至離體存放時間稍長焦影，活性也會逐漸喪失。

3封断、補(bǔ)體激活途徑

? ? 補(bǔ)體激活主要有經(jīng)典途徑斯辰、甘露聚糖結(jié)合凝集素（MBL）途徑和旁路途徑等三條途徑。

（1）經(jīng)典途徑：補(bǔ)體C1～C9共11種成分全部參與的激活途徑坡疼，可分為識別階段彬呻、活化階段、膜攻擊階段柄瑰。

①識別階段：激活物質(zhì)是抗原抗體復(fù)合物闸氮，從激活C1q開始，由C1q激活C1r教沾，最后形成蛋白酶C1s蒲跨，底物是C4和C2。

②活化階段：C1s順序水解C4和C2授翻，由C4和C2的水解大片段組成C4b2b復(fù)合物或悲，此即C3轉(zhuǎn)化酶孙咪；C3轉(zhuǎn)化酶水解C3，大片段C3b與C4b2b組成C4b2b3b巡语，此即C5轉(zhuǎn)化酶翎蹈。

③膜攻擊階段：C5轉(zhuǎn)化酶將C5水解成C5a和C5b，C5b結(jié)合于細(xì)胞膜并依次激活C6男公、7荤堪、8、9枢赔。多個C9分子聚合形成一管狀結(jié)構(gòu)插入膜內(nèi)逞力，穿透細(xì)胞膜導(dǎo)致細(xì)胞溶解。

經(jīng)典途徑的補(bǔ)體激活順序：C1糠爬、4寇荧、2、3执隧、5揩抡、6、7镀琉、8峦嗤、9。

⑵替代途徑：又稱旁路途徑屋摔，由病原微生物等細(xì)胞壁成分（脂多糖烁设、肽聚糖等）直接提供接觸面直接激活補(bǔ)體C3，然后完成C5～C9的激活過程钓试。

①激活物質(zhì)：主要是微生物細(xì)胞壁糖類物質(zhì)（如脂多糖装黑、酵母多糖、葡聚糖等）弓熏、

聚合IgA和IgG4等恋谭。

（3）甘露聚糖結(jié)合凝集素（MBL）途徑：由急性炎癥期產(chǎn)生的甘露糖結(jié)合凝集素（MBL）與病原體結(jié)合后啟動激活。MBL首先與細(xì)菌細(xì)胞壁的甘露糖殘基結(jié)合挽鞠，然后與絲氨酸蛋白酶結(jié)合疚颊，形成MBL相關(guān)的絲氨酸蛋白酶（MASP），MASP可水解C4和C2分子信认，產(chǎn)生C4b2b共同構(gòu)成與經(jīng)典途徑相同的C3轉(zhuǎn)化酶材义，其后續(xù)激活階段與經(jīng)典途徑相同。

4嫁赏、補(bǔ)體的生物學(xué)功能

（1）補(bǔ)體的溶細(xì)胞作用：能溶解細(xì)菌（但一般不溶解革蘭氏陽性菌）其掂、真菌、包膜病毒橄教、寄生蟲清寇，也可溶解自身組織細(xì)胞。

（2）溶解免疫復(fù)合物（IC）：防止免疫復(fù)合物在體內(nèi)沉積护蝶。

（3）介導(dǎo)免疫細(xì)胞效應(yīng)

? ? 免疫調(diào)理作用：如中性粒細(xì)胞华烟、巨噬細(xì)胞等通過其膜表面CR1與細(xì)菌細(xì)胞膜表面的C3b結(jié)合，把細(xì)菌固定在吞噬細(xì)胞表面持灰，有利于吞噬盔夜。C3b+C4b參與吞噬調(diào)理作用。

? ? 免疫黏附作用：紅細(xì)胞膜上有CR1堤魁，當(dāng)C3b與Ag-Ab免疫復(fù)合物（IC）結(jié)合后喂链，紅細(xì)胞通過CR1將C3b-IC黏附在其膜表面，攜帶至肝臟交給庫普弗細(xì)胞吞噬清除妥泉。

炎癥介質(zhì)效應(yīng)：①過敏毒素作用：補(bǔ)體活化過程中產(chǎn)生多種具有炎癥介質(zhì)的活性片段椭微，如C5a、C4a盲链、C3a等蝇率，C5a和C3a被稱為過敏毒素，它們可與肥大細(xì)胞或嗜堿粒細(xì)胞表面C3aR和C5aR結(jié)合導(dǎo)致肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞脫顆粒刽沾，引起超敏反應(yīng)本慕；②趨化作用：C5a和C3a和C567具有吸引吞噬細(xì)胞到炎癥部位聚集發(fā)揮吞噬作用，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)侧漓，因此也稱為趨化因子锅尘；③激肽樣作用：C2a和C4a可直接引起血管擴(kuò)張和通透性增加，造成炎癥性充血布蔗。

5藤违、補(bǔ)體測定

（1）補(bǔ)體總活性測定-CH50以50%溶血作為終點(diǎn)指標(biāo)，它比100%溶血更為敏感纵揍，稱為補(bǔ)體50%溶血實驗纺弊，即CH50。?

（2）CH50試驗是測定經(jīng)典途徑總補(bǔ)體溶血活性骡男，所反映的是補(bǔ)體9種成分的綜合水平淆游。

（3）補(bǔ)體結(jié)合試驗中有5種成分參與反應(yīng)，分屬3個系統(tǒng)：①反應(yīng)系統(tǒng)隔盛；②補(bǔ)體系統(tǒng)犹菱；③指示系統(tǒng)。其反應(yīng)系統(tǒng)（抗原與抗體）與指示系統(tǒng)（綿羊紅細(xì)胞與溶血素）爭奪補(bǔ)體系統(tǒng)吮炕。出現(xiàn)溶血腊脱，為補(bǔ)體結(jié)合試驗陰性。

（4）C3缺陷可導(dǎo)致嚴(yán)重感染龙亲；C1抑制物缺陷與遺傳性血管性水腫有關(guān)陕凹；

（5）補(bǔ)體含量顯著降低的疾埠芬帧：①補(bǔ)體消耗增多見于SLE、自身免疫性溶血性貧血杜耙、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎搜骡、移植排斥反應(yīng)；②細(xì)菌感染佑女，特別是革蘭陰性菌感染時记靡；③大量喪失見于大面積燒傷、大出血和腎病綜合征团驱；④合成不足則見于急摸吠、慢性肝炎，肝硬化嚎花、肝癌和營養(yǎng)不良等寸痢。

6、血清中含量最多的補(bǔ)體是C3紊选，最少的是C2轿腺。

八、細(xì)胞因子

1丛楚、概念

? ? 細(xì)胞因子（CK）是指由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞經(jīng)刺激而合成族壳、分泌的一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)，是細(xì)胞間的信息傳遞分子趣些。

2仿荆、生物學(xué)作用

? ? CK主要參與調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、免疫細(xì)胞分化發(fā)育（IL2）坏平、組織修復(fù)拢操、介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、刺激造血功能（IL3）舶替、抗病毒及抗腫瘤等令境。

? ? ? 細(xì)胞因子的特點(diǎn)：（1）無抗原特異性，通過與受體結(jié)合發(fā)揮效應(yīng)顾瞪。（2）高效應(yīng)性舔庶；（3）多源性，一種因子可以由多種細(xì)胞分泌陈醒；（4）以旁分泌惕橙、自分泌、內(nèi)分泌的形式發(fā)揮作用钉跷；（5）多效性弥鹦，一種因子可以作用于不同的細(xì)胞。

3爷辙、細(xì)胞因子的分類

按生物學(xué)功能可分為六大類：

（1）白細(xì)胞介素（IL）：在多種細(xì)胞間發(fā)揮廣泛作用的細(xì)胞因子彬坏。IL2可以促進(jìn)T朦促、B淋巴細(xì)胞的增值分化，IL3可以刺激造血功能栓始，IL6可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成α1-AAT务冕。IL2在腎移植排斥有診斷意義。

（2）干擾素（IFN）：具有干擾病毒復(fù)制的作用混滔，是細(xì)胞受病毒核酸或某些誘生劑刺激后合成分泌的細(xì)胞因子洒疚，人干擾素分為IFN-α 歹颓、IFN-β坯屿、 IFN-γ。

（3）腫瘤壞死因子（TNF）：是一種能使腫瘤發(fā)生出血性壞死的細(xì)胞因子巍扛。TNF-α主要由活化的單核-巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生领跛，可參與炎癥、疾病進(jìn)展及惡病質(zhì)形成撤奸、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡吠昭、抗腫瘤作用等。TNF-β主要由活化的Th1細(xì)胞產(chǎn)生胧瓜，具有細(xì)胞毒作用矢棚，又稱淋巴毒素。

（4）集落刺激因子（CSF）：是一種能夠刺激多能干細(xì)胞和前體免疫細(xì)胞進(jìn)行增殖分化的細(xì)胞因子府喳。種類有粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）蒲肋、單核-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）钝满。IL3也是CSF兜粘，可刺激所有未成熟的免疫前體細(xì)胞發(fā)育分化成熟，也稱為多能集落刺激因子弯蚜。

（5）趨化因子：主要由白細(xì)胞與造血微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞分泌孔轴，具有對中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞碎捺、淋巴細(xì)胞路鹰、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的趨化和激活活性。

（6）生長因子（GF）：指具有刺激或抑制細(xì)胞生長作用的細(xì)胞因子收厨，如表皮細(xì)胞生長因子（EGF）悍引、神經(jīng)生長因子（NGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等帽氓。

免疫學(xué)常見考點(diǎn)（三）

九趣斤、抗原抗體反應(yīng)

（一）抗原抗體反應(yīng)概念與原理

1、概念

? ? 體外抗原抗體反應(yīng)是指抗體與相應(yīng)抗原在體外特異性結(jié)合后黎休，可因抗原或抗體的物理性狀不同以及參與反應(yīng)的物質(zhì)不同而出現(xiàn)各種反應(yīng)現(xiàn)象浓领，如凝集玉凯、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合及中和反應(yīng)等联贩。由于抗原與抗體反應(yīng)具有高度特異性漫仆，因此可以利用已知抗體鑒定標(biāo)本中的未知抗原（或反過來）。

2泪幌、抗原抗體反應(yīng)原理

（1）抗原抗體結(jié)合力：指抗原依賴抗原決定基（表位）和抗體的抗原結(jié)合部位的空間構(gòu)象精確互補(bǔ)特異結(jié)合盲厌，這是一種非共價鍵的可逆結(jié)合亚铁，不形成共價鍵措译，取決于抗體的親和性和親和力，需要四種分子間引力參與来累。①靜電引力（庫倫引力）没隘；②范德華引力（作用最卸蟆）；③氫鍵結(jié)合力（最具有特異性）右蒲；④疏水作用力（是這些結(jié)合力中最強(qiáng)的阀湿，對維系抗原抗體結(jié)合作用最大）。

（2）抗原抗體親和力：抗原抗體的親和性取決于兩者空間構(gòu)型互補(bǔ)的程度瑰妄。用平衡常數(shù)K表示陷嘴。親和力指抗體結(jié)合部位與抗原表位間結(jié)合的強(qiáng)度，它是抗原抗體間固有的結(jié)合力间坐。

（3）親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體：抗體是球蛋白灾挨，多數(shù)抗原亦為蛋白質(zhì)，溶解在水中皆為膠體溶液眶诈，不會發(fā)生自然沉淀涨醋。如果溶液pH偏高，形成水化層逝撬，蛋白質(zhì)由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體浴骂。此時，如再加入電解質(zhì)宪潮，如0.85%NaCl溯警，則進(jìn)一步使疏水膠體物相互靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物狡相，發(fā)生凝集或沉淀梯轻。抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物的原理主要是蛋白質(zhì)由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體尽棕。

（二）抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)

1喳挑、特異性

? ? 抗原與抗體的結(jié)合具有高度特異性，其中抗原的特異性取決于抗原表位的化學(xué)基團(tuán)性質(zhì)、數(shù)目伊诵、及其立體構(gòu)型单绑，而抗體的特異性取決于V區(qū)的抗原結(jié)合部位空間構(gòu)象，應(yīng)與抗原表位精確互補(bǔ)吻合曹宴÷С龋抗原表位與抗體超變區(qū)結(jié)合的特異性如：外-斐試驗—變形桿菌OX。

2笛坦、比例性

? ? 只有當(dāng)抗原抗體分子比例合適時抗原抗體充分結(jié)合区转，沉淀物形成快而多，稱為抗原抗體反應(yīng)的等價帶版扩；若抗原或抗體極度過剩則無沉淀形成废离，稱為帶現(xiàn)象；抗體過量時资厉，稱為前帶厅缺；抗原過剩時蔬顾，稱為后帶宴偿。

3、可逆性

? ? 抗原與抗體結(jié)合僅是非共價鍵結(jié)合诀豁，穩(wěn)定但可逆窄刘。復(fù)合物在一定條件下可發(fā)生解離，動態(tài)平衡過程舷胜。

4娩践、階段性

抗原抗體反應(yīng)可分為2個階段：

? ? （1）第一階段為特異性結(jié)合階段，反應(yīng)取決于抗原表位與相應(yīng)抗體的抗原結(jié)合部位的空間構(gòu)象互補(bǔ)吻合烹骨，與外界因素?zé)o關(guān)翻伺。反應(yīng)進(jìn)行較快，大多在幾秒鐘至數(shù)分鐘內(nèi)即可完成沮焕，但無肉眼可見反應(yīng)出現(xiàn)吨岭。

? ? （2）第二階段為可見反應(yīng)階段，在抗原與抗體特異結(jié)合的基礎(chǔ)上峦树，受環(huán)境中電解質(zhì)辣辫、溫度、pH魁巩、補(bǔ)體等因素的參與和影響急灭，表現(xiàn)為凝集、沉淀谷遂、補(bǔ)體結(jié)合葬馋、細(xì)胞溶解等可見反應(yīng)。此階段較長，歷時數(shù)分鐘畴嘶、數(shù)小時乃至數(shù)天扫尖。但若為單價抗體或半抗原則仍不出現(xiàn)可見反應(yīng)。2個階段并無嚴(yán)格界限掠廓，往往第一階段反應(yīng)還未完全完成换怖，即開始第2階段反應(yīng)。

（三）影響抗原抗體反應(yīng)的因素

1蟀瞧、反應(yīng)物自身的因素

（1）抗體：抗體類型沉颂、特異性、親和力和濃度都影響抗體抗原反應(yīng)悦污，等價帶的寬窄影響抗原抗體復(fù)合物的形成铸屉，單克隆*抗體不適用于沉淀反應(yīng)∏卸耍抗體結(jié)合價：一個Ig的抗原結(jié)合部位的數(shù)目即是抗體的結(jié)合價彻坛。IgG為2價，SIgA為4價踏枣，IgM理論結(jié)合價是10價昌屉。 抗體一般是雙價的。

（2）抗原：抗原的分子量茵瀑、理化性狀间驮、抗原表位的種類及數(shù)目均可影響反應(yīng)結(jié)果。顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應(yīng)马昨，可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應(yīng)竞帽，單價抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象『枧酰抗原結(jié)合價：一個抗原分子所攜帶的功能性抗原表位的數(shù)目即是該抗原的結(jié)合價屹篓。半抗原是1價，天然抗原是多價匙奴。由于天然抗原一般是大分子堆巧，由多種多個抗原表位組成，可以和多個抗原分子交聯(lián)形成大分子免疫復(fù)合物饥脑。

2恳邀、反應(yīng)環(huán)境條件

（1）電解質(zhì)：電解質(zhì)可以中和膠體粒子表面所帶電荷，進(jìn)一步使疏水粒子相互靠攏灶轰，形成可見的抗原抗體復(fù)合物谣沸，發(fā)生凝集或沉淀。為了促成沉淀物或凝集物的形成笋颤，常用0.85%NaCl或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液乳附。

（2）酸堿度：當(dāng)pH達(dá)到或接近抗原的等電點(diǎn)時内地，即使無相應(yīng)抗體存在，也會發(fā)生非特異性凝集或沉淀赋除≮寤海抗原抗體反應(yīng)一般在pH6～9進(jìn)行，有補(bǔ)體參與的反應(yīng)最適pH為7.2～7.4举农。

（3）溫度：常用的抗原抗體反應(yīng)溫度為37℃荆针。在一定范圍內(nèi)，溫度升高抗原與抗體碰撞機(jī)會增多颁糟，使反應(yīng)加速航背，此外適當(dāng)振蕩也可促進(jìn)抗原抗體分子的接觸，加速反應(yīng)棱貌。

十玖媚、免疫原和抗血清的制備

（一）免疫原的制備

1、顆粒性抗原的制備

? ? 顆粒性抗原如各種細(xì)胞婚脱、細(xì)菌今魔、寄生蟲等。一般情況下細(xì)胞抗原（如綿羊紅細(xì)胞）經(jīng)生理鹽水或其它溶液洗凈障贸，配制一定濃度即可错森。顆粒性抗原大多用靜脈內(nèi)注射免疫法。 細(xì)菌抗原（如鞭毛抗原惹想、菌體抗原问词、毒素抗原）督函；多用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)嘀粱，經(jīng)生理鹽水集菌后處理，如菌體抗原加溫100℃辰狡，2～2.5h去除锋叨，而鞭毛抗原需用0.3%～0.5%甲醛處理。

2宛篇、可溶性抗原制備

? ? 提取細(xì)胞的可溶性抗原娃磺，需將細(xì)胞破碎。根據(jù)細(xì)胞類型不同叫倍，選擇破碎的方法也有一定的差異偷卧，幾種常用的細(xì)胞破碎方法：酶處理法、凍融法吆倦、超聲破碎法听诸、表面活性劑處理法。

蛋白質(zhì)蚕泽、糖蛋白晌梨、脂蛋白、酶、補(bǔ)體仔蝌、細(xì)菌毒素泛领、免疫球蛋白片段、核酸等皆為可溶性抗原敛惊。免疫前需純化和鑒定渊鞋。可溶性抗原的純化方法有：超速離心分離法瞧挤，選擇沉淀法篓像，凝膠過濾法，離子交換層析法皿伺，親和層析法等员辩。

純化抗原的鑒定方法常有：①物理分析法：如鑒定抗原分子量和純度可用聚丙烯酰胺凝膠電泳法等；②化學(xué)分析法：如可用酚試劑法測定抗原蛋白質(zhì)含量鸵鸥；③免疫學(xué)方法：如可用瓊脂擴(kuò)散法奠滑、免疫電泳法等鑒定抗原的免疫學(xué)性質(zhì)、含量等妒穴。

3宋税、半抗原性免疫原的制備

（1）某物質(zhì)在獨(dú)立存在時只具有反應(yīng)原性而無免疫原性，稱為半抗原讼油。如多肽杰赛、多數(shù)的多糖、甾族激素矮台、脂肪胺乏屯、類脂質(zhì)、核苷瘦赫、某些小分子量的藥物等辰晕。

（2）半抗原與蛋白質(zhì)載體或高分子聚合物結(jié)合后才有免疫原性。

（3）載體的選擇：適用于做半抗原載體的有：①蛋白質(zhì)類：常用的有人血清白蛋白确虱、牛血清白蛋白含友、牛甲狀腺球蛋白等，以牛血清白蛋白（ELISA板包被后最常用的封閉物質(zhì)）最常用校辩。②多肽類聚合物：常用多聚賴氨酸窘问。③大分子聚合物和某些顆粒：多用活性炭。

（二）免疫佐劑

? ? 免疫佐劑：與抗原同時或預(yù)先注射于機(jī)體宜咒，起增強(qiáng)機(jī)體對抗原免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的輔助物質(zhì)惠赫。

1、佐劑種類

（1）具備免疫原性的佐劑：如卡介苗荧呐、枯草分枝桿菌汉形、短小棒狀桿菌纸镊、百日咳桿菌、脂多糖概疆、細(xì)胞因子等逗威。

（2）不具備免疫原性的佐劑：如氫氧化鋁佐劑、石蠟油岔冀、羊毛脂凯旭、表面活性劑、藻酸鈣使套、多聚核苷酸等罐呼。

（3）應(yīng)用最多的是福氏佐劑、細(xì)胞因子佐劑侦高。福氏佐劑：分完全福氏佐劑（石蠟油嫉柴、羊毛脂和卡介苗混合而成）、不完全福氏佐劑（石蠟油和羊毛脂混合而成）兩種奉呛，不含免疫原性物質(zhì)计螺。福氏完全佐劑可提高佐劑效能，但注射后易產(chǎn)生局部持久性潰瘍和肉芽腫瞧壮。

2登馒、免疫佐劑的作用 （不能改變抗原的特異性）

（1）把無抗原性的物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)橛行У目乖鰪?qiáng)免疫原性咆槽。

（2）增強(qiáng)循環(huán)抗體的水平或產(chǎn)生更有效的保護(hù)性免疫陈轿，增強(qiáng)抗體的滴度；

（3）改變所產(chǎn)生的循環(huán)抗體的類型秦忿；

（4）增強(qiáng)細(xì)胞介導(dǎo)的超敏反應(yīng)的能力麦射，引起或增強(qiáng)遲發(fā)型超敏反應(yīng)；

（5）保護(hù)抗原（特別是DNA小渊，RNA）不受體內(nèi)酶的分解法褥。

3、免疫佐劑與抗原的比例為1:1酬屉。

（三）抗血清的制備

1、免疫動物的選擇

（1）免疫動物必須適齡揍愁、健壯呐萨、體重達(dá)標(biāo)、無病原微生物感染莽囤。

（2）抗原與免疫動物的種屬差異越遠(yuǎn)越好谬擦。

（3）根據(jù)抗原的免疫原性選擇，針對不同性質(zhì)的免疫原選擇相應(yīng)的動物朽缎。如蛋白質(zhì)抗原大部分動物皆適合惨远。

（4）制備H血清用馬谜悟，制備R血清用兔。

2北秽、免疫方法與途徑

? ? 根據(jù)免疫目的的要求葡幸、抗原性質(zhì)、佐劑種類來制定免疫方案贺氓∥颠叮可采用全量免疫法、微量免疫法辙培、或混合免疫法蔑水。免疫接種途徑通常有靜脈、腹腔扬蕊、肌肉搀别、皮下、淋巴結(jié)等接種途徑尾抑，對抗原的吸收速度為：靜脈＝脾臟＝淋巴結(jié)＞腹腔＞肌肉＞皮下＞皮內(nèi)领曼。若抗原寶貴可采用淋巴結(jié)內(nèi)微量注射法；半抗原宜皮內(nèi)多點(diǎn)注射蛮穿。免疫接種劑量則應(yīng)根據(jù)抗原分子量大小庶骄、免疫原性強(qiáng)弱、動物個體狀態(tài)和免疫時間決定践磅。

3单刁、免疫間隔時間

第一次與第二次免疫的時間間隔一般以10～20天最佳，二次以后間隔時間一般為7～10天府适。

4羔飞、動脈采血法

? ? 有頸動脈放血法、心臟采血法檐春、靜脈多次采血法逻淌。分離血清采用室溫自然凝固、靜置4℃冰箱待血清析出后收取疟暖。小鼠取血通常用摘除眼球或斷尾法卡儒，應(yīng)選擇在末次免疫后5～7天及時采血。

（四）抗血清的鑒定和保存

1俐巴、抗體特異性鑒定

? ? 常用雙向免疫瓊脂擴(kuò)散技術(shù)骨望。

2、血清抗體效價測定

? ? 可用試管凝集試驗欣舵、瓊脂擴(kuò)散試驗擎鸠、ELISA和放射免疫分析等測定。目前最常用的是放射免疫法和瓊脂雙向擴(kuò)散缘圈。

3劣光、抗體的純度鑒定

? ? 常用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法袜蚕。

4、抗血清的純化

? ? 最常見的純化方式是提取特異性IgG或單價特異性抗血清绢涡。特異性IgG抗血清制備：首先用硫酸銨或硫酸鈉鹽析法粗提丙種球蛋白牲剃，再進(jìn)一步純化。粗提法提取γ球蛋白：大多用硫酸銨鹽析法或硫酸鈉鹽析法垂寥，硫酸銨鹽析須經(jīng)多次沉淀颠黎，經(jīng)三次提取后的γ球蛋白大多屬于IgG。親和層析法：交叉雜抗原與瓊脂糖珠4B交聯(lián)制成層析柱（將交叉抗原交聯(lián)到瓊脂糖珠4B上）滞项。

5狭归、抗血清的保存

? ? 4℃保存，可保存3個月～半年文判；-70～-20℃保存可保存2～3年左右过椎，但需防止反復(fù)凍融；真空冰凍干燥保存戏仓，可保存4～5年疚宇。

（五）單克隆抗體的制備

1、單克隆抗體

? ? 由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的針對抗原分子上某一單個抗原決定簇的抗體赏殃，稱為單克隆抗體敷待。其理化性狀高度均一（純度高、有效抗體含量高）仁热、生物活性單一榜揖、與抗原結(jié)合的特異性強(qiáng)、且來源容易抗蠢，可用于診斷和治療举哟。

2、多克隆抗體

? ? 天然的抗原注入機(jī)體后迅矛，多產(chǎn)生多克隆抗體（PoAb）妨猩。天然抗原常有多種不同抗原表位，因此可刺激體內(nèi)多個B細(xì)胞克隆活化并產(chǎn)生針對多種不同抗原表位的抗體秽褒、其混合物即為多克隆抗體壶硅，血清及組織液中的抗體就是多克隆抗體。

細(xì)胞融合的選擇培養(yǎng)基中有三種關(guān)鍵成分：次黃嘌呤（H）震嫉、氨基蝶呤（A）森瘪、胸腺嘧啶核苷（T），所以稱為HAT培養(yǎng)基票堵。B細(xì)胞雜交瘤可在HAT選擇培養(yǎng)基中生長、繁殖和傳代逮栅。

3悴势、動物免疫制備抗體窗宇，最常用的注射器官是小鼠腹腔。

4特纤、克隆化培養(yǎng)后的陽性雜交瘤細(xì)胞應(yīng)及時凍存军俊，最好保存在-196℃液氮中。

5捧存、用單克隆抗體測定細(xì)胞膜上的分化抗原粪躬，可將淋巴細(xì)胞分成不同的亞群。

6昔穴、雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生抗體的遺傳信息來自脾細(xì)胞镰官。

7、單克隆抗體的特點(diǎn)是高特異性吗货、高度的均一性泳唠、具有單一的生物學(xué)功能、弱凝集反應(yīng)和不呈現(xiàn)沉淀反應(yīng)宙搬。

制備單克隆抗體用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)笨腥，制備淋巴因子用T淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)。組合抗體庫技術(shù)可以使抗體的輕勇垛、重鏈可變區(qū)隨機(jī)組合脖母，產(chǎn)生新的輕重鏈配對。

十一闲孤、凝集反應(yīng)

（一）直接凝集反應(yīng)

? ? 細(xì)菌谆级、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合崭放，抗體可將顆粒性抗原交叉連接哨苛，出現(xiàn)凝集，稱直接凝集反應(yīng)币砂。參加凝集反應(yīng)的抗原稱凝集原建峭，抗體稱凝集素。

1决摧、玻片凝集試驗：一般用來鑒定菌種或分型亿蒸；也用于人類ABO血型的測定。

2掌桩、試管凝集反應(yīng)是定性和半定量試驗边锁，用于肥達(dá)反應(yīng)、外斐反應(yīng)等波岛。

（二）間接凝集反應(yīng)

1茅坛、間接凝集反應(yīng)的概念

? ? 間接凝集試驗又稱被動凝集試驗，是將可溶性抗原或抗體吸附或者偶聯(lián)在一種與免疫無關(guān)的顆粒上则拷，使之成為致敏顆粒贡蓖，與相應(yīng)的抗體或者抗原特異性結(jié)合曹鸠，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。凝集為陽性斥铺，不凝集反之彻桃。

2、間接凝集反應(yīng)的分類

? ? 間接凝集反應(yīng)可分為正向間接凝集反應(yīng)晾蜘、反向間接凝集反應(yīng)邻眷、間接凝集抑制反應(yīng)和協(xié)同凝集反應(yīng)4類。

? （1）正向間接凝集反應(yīng)：診斷試劑為標(biāo)準(zhǔn)抗原致敏顆粒剔交，如果被檢樣品與抗原致敏顆了寥模混合后出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，說明標(biāo)本中含有對應(yīng)抗體省容，此為凝集陽性反應(yīng)抖拴。

? （2）反向間接凝集反應(yīng)：診斷試劑為診斷抗體致敏顆粒，如果被檢樣品與抗體致敏顆列冉罚混合后阿宅，凝集陽性反應(yīng)說明標(biāo)本中含有與診斷抗體對應(yīng)的抗原。

? （3）間接凝集抑制反應(yīng)：診斷試劑為抗原致敏的顆粒載體及相應(yīng)的抗體笼蛛，檢測標(biāo)本中是否存在與致敏抗原相同的抗原洒放。如果標(biāo)本中存在相應(yīng)原，則凝集反應(yīng)被抑制滨砍，無凝集產(chǎn)生為陽性結(jié)果方妖。

? （4）反向間接凝集抑制試驗：是用抗體致敏的載體及相應(yīng)的抗原作為診斷試劑企锌，以檢測標(biāo)本中的抗體。如果標(biāo)本中存在相應(yīng)抗體，則凝集反應(yīng)被抑制睬涧，無凝集產(chǎn)生為陽性結(jié)果真朗。

? （5）協(xié)同凝集反應(yīng)：診斷試劑為診斷抗體致敏的SPA+咆课、金黃色葡萄球菌唤崭。大多數(shù)金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁上有葡萄球菌的A蛋白（SPA），SPA具有能與特異性抗體IgG的Fc段結(jié)合（IgG3除外）的特性舔亭。當(dāng)SPA與IgG-Fc結(jié)合后些膨，IgG-Fab與相應(yīng)抗原分子特異性結(jié)合使葡萄球菌凝集，凝集陽性反應(yīng)說明標(biāo)本中含有與診斷抗體對應(yīng)的可溶性抗原钦铺。

十二订雾、沉淀反應(yīng)

（一）概念與特點(diǎn)

1、概念

? ? 沉淀反應(yīng)是可溶性抗原與相應(yīng)抗體在特定條件下特異性結(jié)合所出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象矛洞。沉淀反應(yīng)屬于體外抗原抗體反應(yīng)洼哎。

2、特點(diǎn)

（1）參加沉淀反應(yīng)的抗原可以是蛋白質(zhì)、多糖谱净、血清窑邦、毒素等擅威，但其物理性狀必須是可溶性的壕探。

（2）沉淀反應(yīng)分兩個階段

①第一階段為抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合，幾秒到幾十秒完成郊丛，出現(xiàn)可溶性小復(fù)合物李请，肉眼不可見；

②第二階段為形成可見的免疫復(fù)合物厉熟，如沉淀線导盅、沉淀環(huán)。

（二）凝膠內(nèi)沉淀試驗

凝膠內(nèi)沉淀試驗是利用可溶性抗原和相應(yīng)抗體在凝膠內(nèi)擴(kuò)散揍瑟，形成濃度梯度白翻，在抗原與抗體濃度比例恰當(dāng)?shù)奈恢眯纬扇庋劭梢姷某恋砭€或沉淀環(huán)。 凝膠支持物的種類有瓊脂绢片、瓊脂糖滤馍、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝膠等。

1底循、單向擴(kuò)散試驗

? ? 將已知抗體混于瓊脂凝膠中制成瓊脂板巢株，在適當(dāng)位置打孔加入抗原，在合適的溫度和一點(diǎn)時間后熙涤，孔內(nèi)抗原環(huán)裝擴(kuò)散形成濃度梯度阁苞，在抗原抗體比例合適處形成沉淀環(huán)。沉淀環(huán)的直徑或面積的大小與抗原量呈正相關(guān)祠挫。本方法檢查靈敏度低那槽，檢測時間長達(dá)48～72小時。最常用于抗原定量等舔。

? ? 單向擴(kuò)散試驗檢測時的注意點(diǎn)：抗血清必須特異性強(qiáng)骚灸、效價高、親和力強(qiáng)软瞎；每次測定都必須作標(biāo)準(zhǔn)曲線逢唤；每次測定必須用質(zhì)控血清做質(zhì)控；

2涤浇、雙向擴(kuò)散試驗

? ? 免疫瓊脂雙向擴(kuò)散是將可溶性抗原和抗體分別加到瓊脂板上相應(yīng)的小孔中鳖藕，兩者各自向四周擴(kuò)散，如抗原與抗體相對應(yīng)只锭，兩者相遇即發(fā)生待異性結(jié)合著恩，并在比例適合處形成白色沉淀線。觀察沉淀線的位置、形狀和對比關(guān)系喉誊，可以對抗原或者抗體進(jìn)行定性分析：

? （1）無沉淀線產(chǎn)生邀摆，說明無相對應(yīng)的抗原（抗體）或抗原（抗體）過量；

? （2）兩條沉淀線互相吻合相連——兩個抗原性質(zhì)完全相同伍茄；

? （3）兩條沉淀線交叉——表明兩個抗原完全不同栋盹；

? （4）兩條沉淀線相切——表明兩個抗原部分相同；

? （5）沉淀線彎向分子量大的一方敷矫；

? （6）沉淀線靠近濃度低的一方例获。

定時散射比濁法與速率散射比濁法的最大區(qū)別在于采集的測定信號不同。

免疫比濁法的前體條件是要保證抗體過量曹仗。

十三榨汤、免疫電泳技術(shù)

1、免疫電泳技術(shù)實質(zhì)上是在直流電場作用下的凝膠擴(kuò)散試驗怎茫。

2收壕、免疫電泳的影響因素：

（1）抗原與抗體特性；

（2）電場因素：①電場強(qiáng)度轨蛤；②溶液pH值蜜宪；③離子強(qiáng)度；④電滲（指在電場中水對固相介質(zhì)的相對移動不影響蛋白質(zhì)的分離俱萍，但影響其遠(yuǎn)點(diǎn)位置）端壳。

3、最常用于M蛋白的鑒定枪蘑。

（一）對流免疫電泳

1损谦、實質(zhì)上是雙向免疫擴(kuò)散試驗與電泳相結(jié)合在直流電場中的定向加速免疫擴(kuò)散技術(shù)。

2岳颇、實驗是在瓊脂板上打兩排孔照捡，兩側(cè)分別加待測抗原和相應(yīng)抗體，在兩者之間或者抗體測形成沉淀線话侧。

常用于抗原或抗體的性質(zhì)栗精、效價和純度測定。

（二）火箭免疫電泳

1瞻鹏、火箭電泳是免疫單向擴(kuò)散與電泳相結(jié)合的一種定向加速的單向擴(kuò)散試驗悲立。

2、試驗是將抗體混于瓊脂中新博，電泳使抗原由負(fù)極向正極移動薪夕，并隨抗原濃度的減少，抗原抗體復(fù)合物形成的沉淀線也越來越窄赫悄，最后形成一個火箭狀的不溶性復(fù)合物沉淀峰原献。

3馏慨、瓊脂中抗體濃度不變時，沉淀峰的高度與抗原量呈正比姑隅。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可計算出待測樣品的含量写隶，反向火箭電泳（固定抗原濃度）可測抗體的含量。

（三）免疫電泳

1讲仰、免疫電泳是區(qū)帶電泳和免疫雙向擴(kuò)散相結(jié)合的技術(shù)慕趴。

2、實驗是在瓊脂中央縱向挖槽叮盘，將待測標(biāo)本與標(biāo)準(zhǔn)抗原分別加入兩側(cè)孔內(nèi)進(jìn)行瓊脂區(qū)帶電泳秩贰。然后在槽內(nèi)加入抗血清，進(jìn)行雙向擴(kuò)散柔吼。

（四）免疫固定電泳

1、實質(zhì)是將凝膠電泳的高分辨率與免疫化學(xué)方法的高靈敏度結(jié)合起來的電泳技術(shù)丙唧。（區(qū)帶電泳+沉淀反應(yīng)+化學(xué)染色）愈魏。

2、實驗原理是先將待檢樣品在凝膠板上作區(qū)帶電泳想际，將蛋白質(zhì)分離成不同區(qū)帶培漏，然后在其上覆蓋抗血清，當(dāng)抗血清與某區(qū)帶中的單克隆免疫球蛋白結(jié)合胡本，便形成抗原抗體復(fù)合物而沉淀牌柄。然后用氨基黑，參考泳道和抗原抗體沉淀區(qū)帶被著色侧甫。

3珊佣、最常用于M蛋白的鑒定，也用于尿液中本周蛋白的檢測及κ/λ分型披粟。

（五）區(qū)帶電泳

1咒锻、帶電荷的分子在具有滲透能力的介質(zhì)上遷移。

2守屉、常用電泳介質(zhì)：醋酸纖維薄膜惑艇、瓊脂糖、聚丙烯酰胺凝膠拇泛。其中聚丙烯酰胺凝膠的分辨率最高滨巴。

免疫學(xué)常見考點(diǎn)（四）

十三、免疫電泳技術(shù)

1俺叭、免疫電泳技術(shù)實質(zhì)上是在直流電場作用下的凝膠擴(kuò)散試驗恭取。

2、免疫電泳的影響因素：

（1）抗原與抗體特性绪颖；

（2）電場因素：①電場強(qiáng)度秽荤；②溶液pH值甜奄；③離子強(qiáng)度；④電滲（指在電場中水對固相介質(zhì)的相對移動不影響蛋白質(zhì)的分離窃款，但影響其遠(yuǎn)點(diǎn)位置）课兄。

3、最常用于M蛋白的鑒定晨继。

（一）對流免疫電泳

1烟阐、實質(zhì)上是雙向免疫擴(kuò)散試驗與電泳相結(jié)合在直流電場中的定向加速免疫擴(kuò)散技術(shù)。

2紊扬、實驗是在瓊脂板上打兩排孔蜒茄，兩側(cè)分別加待測抗原和相應(yīng)抗體，在兩者之間或者抗體測形成沉淀線餐屎。

常用于抗原或抗體的性質(zhì)檀葛、效價和純度測定。

（二）火箭免疫電泳

1腹缩、火箭電泳是免疫單向擴(kuò)散與電泳相結(jié)合的一種定向加速的單向擴(kuò)散試驗屿聋。

2、試驗是將抗體混于瓊脂中藏鹊，電泳使抗原由負(fù)極向正極移動润讥，并隨抗原濃度的減少，抗原抗體復(fù)合物形成的沉淀線也越來越窄盘寡，最后形成一個火箭狀的不溶性復(fù)合物沉淀峰楚殿。

3、瓊脂中抗體濃度不變時竿痰，沉淀峰的高度與抗原量呈正比脆粥。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可計算出待測樣品的含量，反向火箭電泳（固定抗原濃度）可測抗體的含量菇曲。

（三）免疫電泳

1冠绢、免疫電泳是區(qū)帶電泳和免疫雙向擴(kuò)散相結(jié)合的技術(shù)。

2常潮、實驗是在瓊脂中央縱向挖槽弟胀，將待測標(biāo)本與標(biāo)準(zhǔn)抗原分別加入兩側(cè)孔內(nèi)進(jìn)行瓊脂區(qū)帶電泳。然后在槽內(nèi)加入抗血清喊式，進(jìn)行雙向擴(kuò)散孵户。

（四）免疫固定電泳

1、實質(zhì)是將凝膠電泳的高分辨率與免疫化學(xué)方法的高靈敏度結(jié)合起來的電泳技術(shù)岔留。（區(qū)帶電泳+沉淀反應(yīng)+化學(xué)染色）夏哭。

2、實驗原理是先將待檢樣品在凝膠板上作區(qū)帶電泳献联，將蛋白質(zhì)分離成不同區(qū)帶竖配，然后在其上覆蓋抗血清何址，當(dāng)抗血清與某區(qū)帶中的單克隆免疫球蛋白結(jié)合，便形成抗原抗體復(fù)合物而沉淀进胯。然后用氨基黑用爪，參考泳道和抗原抗體沉淀區(qū)帶被著色。

3胁镐、最常用于M蛋白的鑒定偎血，也用于尿液中本周蛋白的檢測及κ/λ分型。

（五）區(qū)帶電泳

1盯漂、帶電荷的分子在具有滲透能力的介質(zhì)上遷移颇玷。

2、常用電泳介質(zhì)：醋酸纖維薄膜就缆、瓊脂糖帖渠、聚丙烯酰胺凝膠。其中聚丙烯酰胺凝膠的分辨率最高违崇。

十四阿弃、免疫細(xì)胞分離檢測技術(shù)

（一）免疫細(xì)胞的分離

1、外周血單個核細(xì)胞（PBMC）分離

（1）原理：外周血中單個核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）的比重與紅細(xì)胞羞延、多核白細(xì)胞及血小板不同，介于1.075～1.090之間脾还，血小板在1.030～1.035之間伴箩，紅細(xì)胞及粒細(xì)胞在1.092左右，因而可以用一種比重介于1.075～1.092之間近于等滲的溶液作密度梯度離心法分離鄙漏。

（1）試劑：常用的分層液有Ficoll與Percoll種嗤谚。

①Ficoll分層液法：主要用于分離外周血中單個核細(xì)胞，是一種單次密度梯度離心分離法怔蚌，其分布由上到下依次為：稀釋的血漿層和血小板層巩步、單個核細(xì)胞層、粒細(xì)胞層和紅細(xì)胞層桦踊。

②Percoll分層液法：是連續(xù)密度梯度離心分離法椅野，由上到下依次為：死細(xì)胞層和血小板層、血漿層籍胯、富含單核細(xì)胞組分層竟闪、富含淋巴細(xì)胞的組分層及紅細(xì)胞與粒細(xì)胞組分層。Percoll分層液法是純化分離單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的一種較好方法杖狼。

2炼蛤、淋巴細(xì)胞的分離

（1）純淋巴細(xì)胞群的采集：從單個核細(xì)胞懸液中除去單核細(xì)胞，從而獲得純淋巴細(xì)胞群蝶涩。主要方法有：①黏附貼壁法理朋；②吸附柱過濾法絮识；③磁鐵吸引法。

（2）淋巴細(xì)胞亞群的分離常用的方法：①E花環(huán)沉降法嗽上；②尼龍毛柱分離法次舌；③親和板結(jié)合分離法；④磁性微球分離法及熒光激活細(xì)胞分離儀分離法炸裆。

3垃它、淋巴細(xì)胞的保存及活力測定

（1）淋巴細(xì)胞保存技術(shù)：①短期保存：用適量含10～20%滅活小牛血清的Hanks或其他培養(yǎng)液稀釋重懸。②長期保存：液氮深低溫（-196℃）環(huán)境保存細(xì)胞烹看，加入二甲亞砜作為保護(hù)劑国拇。

（2）淋巴細(xì)胞活力測定：最簡便常用的為臺盼藍(lán)染色法。這種染料不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜惯殊，故活細(xì)胞不著色酱吝。但死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加，可使染料通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)土思，使死細(xì)胞著色呈藍(lán)色务热，通過死亡細(xì)胞與活細(xì)胞的百分比可反映細(xì)胞活力。

（二）免疫細(xì)胞檢測

1己儒、T細(xì)胞表面有特異性綿羊紅細(xì)胞（E）受體崎岂，當(dāng)人的T細(xì)胞與綿羊紅細(xì)胞懸液按一定比例混合后，T細(xì)胞表面的E受體可與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合形成玫瑰花樣的花環(huán)闪湾，稱為活性E花環(huán)冲甘。檢測活性E花環(huán)形成細(xì)胞可反映受檢者的細(xì)胞免疫水平。

2途样、E玫瑰花環(huán)形成率代表T細(xì)胞百分率江醇。

3、E玫瑰花環(huán)試驗可以檢測T細(xì)胞數(shù)量何暇。

4陶夜、利用E花環(huán)沉降法可分離B細(xì)胞和T細(xì)胞。

5裆站、溶血空斑形成試驗（PFC）中条辟，每一個空斑表示一個抗體形成細(xì)胞，用來檢測B細(xì)胞功能遏插。

6捂贿、硝基四氮唑藍(lán)（NBT）還原試驗用以檢測中性粒細(xì)胞的胞內(nèi)殺菌能力。

7胳嘲、炭粒廓清試驗判斷巨噬細(xì)胞的吞噬功能厂僧。

十五、臨床常用免疫技術(shù)

（一）放射免疫分析

1了牛、概念：放射免疫技術(shù)分析是利用放射性核素作為示蹤物來檢測反應(yīng)體系中的抗原抗體復(fù)合物的標(biāo)記免疫技術(shù)颜屠。放射免疫技術(shù)的基本類型有放射免疫分析（RIA）辰妙、免疫放射分析（IRMA）和放射受體（或配基）分析（RRA）。

2甫窟、放射免疫分析優(yōu)缺點(diǎn)：①優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高密浑、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好粗井、樣品及試劑用量小尔破，可以用于極微量（ng甚至pg水平）抗原的檢測。②缺點(diǎn)：對工作人員和環(huán)境易造成危害或污染浇衬。

3懒构、放射免疫分析常用的放射性核素有：①產(chǎn)生γ射線的I125、I131和Cr51等耘擂，其中最常用的是I125胆剧；②產(chǎn)生β射線的H3、C14和P32等醉冤，其中最常用的是H3秩霍。

4、放射性核素使用最廣泛的是I125蚁阳。其優(yōu)點(diǎn)有：①I125的化學(xué)性質(zhì)較活潑铃绒，容易用較簡便的方法制備標(biāo)記物；②其衰變過程不產(chǎn)生電離輻射強(qiáng)的β射線螺捐，對標(biāo)記多肽匿垄、蛋白抗原分子的免疫活性影響小归粉；③I125釋放的γ射線測量方法簡便，易于推廣應(yīng)用漏峰；④I125的半衰期長糠悼、核素豐度及計數(shù)率較I131更為適用。

5浅乔、放射免疫分析（RIA）

? （1）原理：標(biāo)記抗原（Ag*）和非標(biāo)記抗原（Ag）對有限量特異性抗體（Ab）競爭性結(jié)合反應(yīng)倔喂，以測定待測抗原的性質(zhì)和含量。 Ag*與Ag的免疫活性完全相同靖苇，對Ab具有同樣的親和力席噩。

? （2）RIA測定包括3個步驟：：①待測標(biāo)本中未標(biāo)記抗原，標(biāo)記抗原和抗體進(jìn)行競爭抑制反應(yīng)贤壁；②將B和F的分離（分離方法有第二抗體法悼枢、聚乙二醇沉淀法、活性炭吸附法等）脾拆。③對B進(jìn)行放射性強(qiáng)度的測定馒索。

? （3）Ag的量與B（標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物）成反比莹妒，與F（游離的Ag*）成正比。B/F或B/B+F值與待測抗原濃度呈反比绰上。

6旨怠、免疫放射分析（IRMA）

? （1）原理：用過量放射性核素標(biāo)記抗體（Ab）與待測抗原進(jìn)行非競爭性免疫結(jié)合反應(yīng)。再加入固相標(biāo)準(zhǔn)抗原吸附除去游離標(biāo)記標(biāo)本蜈块，離心沉淀后鉴腻，通過測定上清液（含待測Ag-Ab）的放射性強(qiáng)度與待測抗原成正比，可推算出樣品中待測抗原含量百揭。

7爽哎、IRMA與RIA的異同點(diǎn)：①RIA使用標(biāo)記抗原（限量），IRMA使用標(biāo)記抗體（過量）信峻；②RIA中抗體結(jié)合標(biāo)記抗原的量與被測抗原濃度成反比關(guān)系倦青，而IRMA呈正比；③RIA需對B盹舞、F分別作放射強(qiáng)度測定产镐，IRMA只測定上清液的放射強(qiáng)度； ④IRMA為非競爭結(jié)合踢步，RIA為競爭抑制癣亚。⑤RIA的反應(yīng)速度較慢，IRMA較快获印。

8述雾、放射免疫分析由于敏感度高、特異性強(qiáng)兼丰、精密度高玻孟，常用于測定各種激素（如甲狀腺素）、微量蛋白質(zhì)鳍征、腫瘤標(biāo)志物（AFP黍翎、CEA、CA125艳丛、CA199）和藥物（巴比妥匣掸、氨丙嗪）。但核素的放射性對人體有一定的危害

性氮双。核素有半衰期碰酝，試劑盒的貨存期較短，有諸多不便之處戴差，近年來有被取代的趨勢送爸。

（二）熒光免疫技術(shù)

1、熒光物質(zhì)

（1）異硫氰酸熒光素（FITC）應(yīng)用最廣，最大吸收波長為490～495nm碱璃，最大反射光波長為520～530nm弄痹，呈明亮的黃綠色熒光。

（2）四乙基羅丹明（RB200）：最大吸收波長為570nm嵌器，最大發(fā)射波長為595～600nm肛真，呈橘紅色熒光。

（3）四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC）：最大吸引光波長為550nm爽航，最大發(fā)射光波長為620nm蚓让，呈橙紅色熒光。

（4）藻紅蛋白（PE）：呈紅色熒光讥珍，最大吸收波長為546/565nm最大發(fā)射光波長為578nm历极，呈明亮的橙色熒光。與FITC的翠綠色熒光對比鮮明衷佃，廣泛用于對比染色或用于兩種不同顏色的熒光抗體的雙重染色趟卸。

（5）鑭系螯合物：某些三價稀土鑭系元素，以Eu3+應(yīng)用最廣氏义。Eu3+激發(fā)光波長范圍窄锄列，熒光衰變時間長，最適合用于時間分辨熒光免疫測定惯悠。

2邻邮、熒光技術(shù)中有關(guān)的概念和參數(shù) （了解內(nèi)容）

（1）發(fā)射光譜：即熒光分子的熒光光譜，值用固定波長的激發(fā)光激發(fā)樣品時克婶，檢測儀器用不同檢測光波長檢測到的樣品發(fā)射熒光的相對強(qiáng)度筒严。

（2）激發(fā)光譜：即熒光分子的吸收光譜，指用不同波長的激發(fā)光激發(fā)樣品時情萤，檢測儀器用固定檢測光波長檢測到的相應(yīng)熒光發(fā)射強(qiáng)度鸭蛙。

（3）熒光效率：是指熒光分子將吸收的光能轉(zhuǎn)變成熒光的百分率，與發(fā)射熒光光量子的數(shù)值成正比筋岛。熒光發(fā)射的特點(diǎn)是：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光规惰。

（4）熒光壽命：指熒光物質(zhì)被一瞬時光脈沖激發(fā)后產(chǎn)生的熒光隨時間而衰減到一定程度時所用的時間。

（5）熒光的猝滅：指在受到激發(fā)光較長時間照射后泉蝌，熒光物質(zhì)的熒光輻射能力發(fā)生減弱的現(xiàn)象。

3揩晴、免疫熒光技術(shù)的不足之處在于：有非特異性熒光的干擾勋陪、熒光會淬滅。

4硫兰、影響熒光強(qiáng)度的因素：

? （1）溫度：溫度≥20℃時诅愚，熒光效率會降低。

? （2）熒光素的濃度：熒光物質(zhì)濃度太高會發(fā)生自熄滅（淬滅）現(xiàn)象。

? （3）溶劑：增大溶劑的極性會使熒光強(qiáng)度減弱违孝。

? （4）pH

5刹前、間接熒光法靈敏度高，為目前公認(rèn)的最有效的檢測抗核抗體（ANA）的方法雌桑，且在不同抗原的檢測中只需應(yīng)用一種熒光抗體喇喉。常用于檢測血清中自身抗體和多種病原體抗體。

6校坑、直接熒光法的特點(diǎn)是特異性強(qiáng)而靈敏度低拣技。

7、熒光素與蛋白質(zhì)結(jié)合比率（F/P）值越高耍目，說明抗體分子上結(jié)合的熒光素越多膏斤，反之越少。用于固定標(biāo)本的熒光抗體以F/P=1.5為宜邪驮，用于活細(xì)胞染色的以F/P=2.4為宜莫辨。

（三）酶免疫技術(shù)

1、定義

? ? 酶免疫技術(shù)是利用酶標(biāo)記抗體（或抗原）與檢測標(biāo)本中的相應(yīng)抗原（或抗體）特異性結(jié)合毅访，利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用顯示免疫復(fù)合物的存在沮榜，提高檢測抗原-抗體復(fù)合物敏感性的一種免疫標(biāo)記技術(shù)。酶免疫技術(shù)包括酶免疫組化技術(shù)和酶免疫測定俺抽。

2敞映、酶和酶作用的底物

（1）辣根過氧化酶（HRP）：是ELISA和酶免疫組化技術(shù)中最常用的酶。等電點(diǎn)pH為5.5～9.0磷斧，最常用的底物為四甲基聯(lián)苯胺（TMB）振愿，TMB經(jīng)過HRP作用后呈藍(lán)色，用H2SO4終止后變?yōu)辄S色弛饭，在450nm處有最大吸收峰冕末。

（2）堿性磷酸酶（AP）：最適合pH為8.0。常用的底物是對硝基苯磷酸酯侣颂，其反應(yīng)產(chǎn)物為黃色對硝基酚档桃，最大吸收波長為405nm猪腕。

3撒犀、酶標(biāo)記抗體或抗原

? 酶標(biāo)記的抗體或抗原稱為酶結(jié)合物，制備抗體酶結(jié)合物的方法常用戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法间学。

（1）戊二醛交聯(lián)法：戊二醛可以使與蛋白質(zhì)的氨基偶聯(lián)拒担，方法有一步法和二步法嘹屯。

（2）過碘酸鹽氧化法：此法只用于HRP與蛋白交聯(lián)。

（3）標(biāo)記抗體鑒定和最佳工作濃度選擇通常采用棋盤滴定法進(jìn)行滴定从撼。

4州弟、固相載體

（1）酶免疫技術(shù)的主要試劑：為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。

（2）最常用的固相載體：是聚苯乙烯婆翔，其有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能拯杠，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。在測定過程中啃奴，它作為載體和容器潭陪，不參與化學(xué)反應(yīng)。最常用的載體為微量反應(yīng)板纺腊，如ELISA板畔咧，國際通用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8×12的96孔式。

（3）良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好揖膜，空白值低誓沸，孔底透明度高，各板之間和同一板各孔之間性能相近壹粟。

5拜隧、免疫吸附劑

（1）概念：將抗原或抗體固相化的過程稱為包被，而被固相化的抗原或抗體稱為免疫吸附劑趁仙。

（2）封閉：為避免由于免疫吸附劑（抗原或抗體）濃度過低而不能完全覆蓋固相載體表面洪添，可能使其后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也吸附于固相載體表面，產(chǎn)生非特異性顯色而導(dǎo)致本底偏高雀费，應(yīng)在包被后再用1%～5%牛血清清蛋白包被一次干奢，以消除這種干擾，這一過程稱為封閉盏袄。

6忿峻、酶免疫技術(shù)的分類

（1）酶免疫組化技術(shù)

? ? 免疫組織化學(xué)技術(shù)是借助可檢測的標(biāo)記抗體（或抗原），在組織細(xì)胞原位進(jìn)行特異性抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)辕羽，對相應(yīng)抗原（或抗體）進(jìn)行定性逛尚、定位或定量檢測。

（2）酶免疫測定

? ? 酶免疫測定用于液體標(biāo)本中抗原或抗體的測定刁愿。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合酶標(biāo)記物與游離酶標(biāo)記物分為均相和異相法兩類绰寞。

①均相酶免疫測定：均相酶免疫測定屬于競爭結(jié)合分析方法，其基本原理：將標(biāo)準(zhǔn)半抗原與酶結(jié)合成酶標(biāo)半抗原铣口，半抗原與酶活性均不變滤钱。當(dāng)酶標(biāo)半抗原與相應(yīng)抗體特異結(jié)合后，由于半抗原與抗體接觸太緊密脑题，使抗體分子在酶活性中心形成空間位阻菩暗，阻隔酶與底物結(jié)合，標(biāo)記酶的活性被抑制旭蠕。當(dāng)樣品中的待測半抗原與標(biāo)準(zhǔn)半抗原同質(zhì)時，待測半抗原與酶標(biāo)半抗原競爭結(jié)合抗體，待測半抗原濃度越高掏熬，游離的酶標(biāo)半抗原就越多佑稠，酶活性就越高，即反應(yīng)后酶活性與標(biāo)本中的半抗原量成正比旗芬。由于在抗原抗體反應(yīng)后結(jié)合態(tài)標(biāo)記酶失去活性舌胶，就不需要分離結(jié)合態(tài)酶（Ag-Ab-E）與游離態(tài)酶（Ab-E或Ag-E），直接測定游離態(tài)酶的活性變化疮丛，即可推算出標(biāo)本中Ag含量幔嫂。均相酶免疫測定主要用于藥物和小分子物質(zhì)的檢測。

②異相酶免疫測定：異相法又根據(jù)反應(yīng)介質(zhì)的物理狀態(tài)分為液相酶免疫測定和固相酶免疫測定（常用ELISA）誊薄。異相酶免疫測定原理：在抗原反應(yīng)后履恩，先分離結(jié)合酶標(biāo)抗體（E-Ab），然后測定E-Ab-Ag或E-Ab中的酶活性呢蔫，推算出標(biāo)本中的抗原量切心。

7、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

（1）雙抗體夾心法：未標(biāo)記固相診斷抗體與待檢抗原反應(yīng)后片吊，加酶標(biāo)診斷抗體绽昏，反應(yīng)后加底物顯色。顏色深淺與待測抗原呈正相關(guān)俏脊。雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法全谤。

雙位點(diǎn)一步法：應(yīng)用針對同一抗原分子上的2個不同抗原決定基的單克隆抗體，分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體爷贫，在測定時可同時加入標(biāo)本和酶標(biāo)抗體（兩步并作一步）认然。顯色反應(yīng)后顏色深淺與待測抗原量呈正相關(guān)。但要注意沸久，如果標(biāo)本中抗原含量過高季眷，會出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，可能影響結(jié)果的準(zhǔn)確性卷胯。

（3）間接法：固相已知標(biāo)準(zhǔn)抗原與待檢抗體反應(yīng)后加酶標(biāo)羊抗人IgG抗體子刮，反應(yīng)后加底物顯色。顏色深淺與待測抗體量呈正相關(guān)窑睁。是檢測抗體最常用的方法挺峡。

（4）競爭法：可測定抗原或抗體，以抗原為例担钮，受檢抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合橱赠，結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比。

（5）捕獲法測IgM抗體：先將所有血清IgM固定在固相上箫津，在去除IgG后再測定特異性IgM狭姨。測定IgM抗體多用捕獲法宰啦。

雙抗體夾心法檢測抗原A時，固相載體的包被物是未標(biāo)記的抗A抗體饼拍。

酶免疫技術(shù)中的酶結(jié)合物是酶標(biāo)記抗原或抗體赡模。

雙抗體夾心法、雙位點(diǎn)一步法师抄、間接法測抗體漓柑、捕獲法 待測孔（管）最后顯示的顏色深淺與標(biāo)本中的待測抗原或抗體呈正相關(guān)。

8叨吮、免疫印跡法在艾滋病病毒感染中作為確診試驗辆布。

9、生物素-親和素免疫放大技術(shù)

? （1）生物素又稱維生素H或輔酶R茶鉴，分子量244.31锋玲，存在于蛋黃中。 生物素有I與II兩個環(huán)狀結(jié)構(gòu)蛤铜，I環(huán)為咪唑酮環(huán)嫩絮，與親和素結(jié)合；II環(huán)是吩噻環(huán)围肥，其C2位上有一戊酸側(cè)鏈剿干，戊酸的羧基是與蛋白質(zhì)分子結(jié)合的結(jié)構(gòu)。

（2）每個親和素分子由4個亞基組成穆刻，可以和4個生物素分子穩(wěn)定結(jié)合置尔，形成一種類似晶格的復(fù)合體，此為生物素-親和素免疫放大作用的主要機(jī)制氢伟。親和素（鏈霉親和素）的與生物素咪唑酮環(huán)結(jié)合的活性基團(tuán)都是色氨酸榜轿。親和素（鏈霉親和素）的標(biāo)記幾乎可與所有標(biāo)記示蹤物（HRP、熒光素朵锣、放射性核素谬盐、膠體金等）、抗原诚些、抗體飞傀、酶、鐵蛋白和熒光蛋白等結(jié)合诬烹。

（3）標(biāo)記蛋白質(zhì)氨基的活化生物素：N-羥基丁二酰亞胺酯（BNHS）砸烦。

? ? 標(biāo)記蛋白質(zhì)醛基的活化生物素：生物素酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BCHZ）。

? ? 標(biāo)記蛋白質(zhì)巰基的活化生物素：3-（N-馬來酰亞胺-丙酰）-生物胞素（MPB）绞吁。

? ? 標(biāo)記蛋白質(zhì)核酸的活化生物素：光生物素幢痘、生物素脫氧核苷三磷酸、BNHS和BHZ家破。

十六颜说、細(xì)胞因子測定及應(yīng)用

1购岗、細(xì)胞因子的共同特性：為糖蛋白；可以旁分泌门粪、自分泌或內(nèi)分泌的方式發(fā)揮作用藕畔；一種細(xì)胞可產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，不同類型的細(xì)胞可產(chǎn)生一種或幾種相同的細(xì)胞因子庄拇。

3、細(xì)胞因子的類型

（1）細(xì)胞因子：①IL-1：主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生韭邓，有較強(qiáng)的致熱源作用和局部免疫調(diào)節(jié)作用措近。②IL-2：主要由T細(xì)胞（CD4+）受抗原或絲裂原刺激后合成。IL-2可刺激T細(xì)胞生長女淑，促進(jìn)B細(xì)胞生長分化瞭郑。

（2）干擾素：抗腫瘤、抗病毒鸭你、免疫調(diào)節(jié)屈张。抗病毒活性測定法主要用于檢測：干擾素（IFN）袱巨。

（3）腫瘤壞死因子（TNF）：抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能阁谆，對多種腫瘤細(xì)胞和病毒均有殺傷或抑制作用。

（4）造血生長因子：紅細(xì)胞生成素（EPO）可刺激紅祖細(xì)胞及早幼紅細(xì)胞形成成熟的紅細(xì)胞集落愉老。

（5）細(xì)胞因子受體场绿。

4、細(xì)胞因子測定的臨床應(yīng)用

可作為特定疾病診斷的輔助指標(biāo)嫉入，用于評估機(jī)體的免疫狀態(tài)焰盗、判斷治療及預(yù)后，作為臨床治療應(yīng)用時的監(jiān)測等咒林。

十七熬拒、自身抗體的檢測及應(yīng)用

1、檢測方法：常用間接免疫熒光法垫竞。

2澎粟、常見ANA熒光圖形及意義：①均質(zhì)型（H）多是由抗DNP抗體所引起，也可由核小體抗體（抗組蛋白抗體）和抗雙鏈DNA抗體引起件甥，主要見于活動期SLE捌议、藥物性狼瘡。②斑點(diǎn)型：是由ENA抗體引起引有，高滴度的斑點(diǎn)型常見于MCTD瓣颅；③周邊型：主要由抗dsDNA的抗體所引起，主要見于SLE譬正；④核仁型：主要見于硬皮补埂檬姥；⑤著絲點(diǎn)型：主要見于局限性硬皮病及CREST綜合癥；⑥核膜型：主要由抗核膜抗體引起粉怕。

3健民、相關(guān)疾病

（1）抗Sm抗體：是SLE的血清標(biāo)志抗體。

（2）抗核RNP（nRNP）抗體：是診斷混合性結(jié)締組織财侗础（MCTD）的重要依據(jù)秉犹。

（3）抗SSA/Ro/抗SSB/La：是干燥綜合癥（SS）最常見的自身抗體。

（4）抗Jo-1抗體：最常見于多發(fā)性肌炎（PM）稚晚。

（5）抗Scl-70抗體：僅見于進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化渤缍隆（PSS），是PSS的標(biāo)志性抗體客燕。

（6）抗乙酰膽堿受體（AchR）：AchR是重癥肌無力患者的標(biāo)志抗體鸳劳。

（7）抗心磷脂抗體（ACLA）：ACLA抗體陽性常見于反復(fù)自然流產(chǎn)、SLE也搓、RA等赏廓。

（8）抗線粒體抗體（AMA）：AMA陽性見于原發(fā)性膽汁性肝硬化。

4傍妒、抗ENA抗體譜-抗ENA抗體主要包括Sm幔摸、RNP、SSA拍顷、SSB抚太、Jo-1、Scl-70 等抗原昔案。

5尿贫、抗雙鏈DNA（dsDNA）抗體屬ANA譜，是SLE的特征性標(biāo)記抗體踏揣，是SLE活動期的重要標(biāo)志庆亡。

6、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的自身抗體（變性IgG的自身抗體）以IgM為主捞稿，也就是說RF一般為IgM又谋。

十八、MHC與HLA檢測及應(yīng)用

主要組織相容性復(fù)合體（MHC）娱局，主要組織相容性抗原（MHA）彰亥，屬于同種異型抗原。

1衰齐、MHC-I類分子：廣泛表達(dá)于各種組織的有核細(xì)胞上任斋，以淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞表面的表達(dá)密度最高耻涛，成熟的紅細(xì)胞废酷、神經(jīng)細(xì)胞及滋養(yǎng)層細(xì)胞不表達(dá)瘟檩。

2、人類的MHC即HLA基因復(fù)合體位于人的第6對染色體的短臂上澈蟆，傳統(tǒng)上分為I墨辛、Ⅱ、Ⅲ三類基因趴俘。I類包括經(jīng)典的HLA-A睹簇、B、C寥闪。Ⅱ類包括經(jīng)典的HLA-DP带膀、DQ、DR橙垢，其中DR是移植排斥的主要抗原。Ⅲ類由一些與補(bǔ)體和某些炎癥因子編碼相關(guān)的基因組成伦糯。

3柜某、MHC-Ⅱ類分子與免疫應(yīng)答密切相關(guān)。

4敛纲、HLA-B27與強(qiáng)直性脊柱炎密切相關(guān)喂击。

5、HLA的分型技術(shù)包括血清型分型法（微量淋巴細(xì)胞毒試驗）和基因分型法淤翔。

十九翰绊、超敏反應(yīng)性疾病

1、超敏反應(yīng)是指機(jī)體再次接觸相同抗原時旁壮，發(fā)生的生理功能紊亂和（或）組織損傷监嗜。根據(jù)超敏反應(yīng)發(fā)生機(jī)制和臨床特點(diǎn)分為4型：I型（速發(fā)型超敏反應(yīng)）、II型（細(xì)胞毒型超敏反應(yīng)）抡谐、III型（免疫復(fù)合物型超敏反應(yīng)）裁奇、IV型（遲發(fā)型超敏反應(yīng)）。其中I型麦撵、II型和III型超敏反應(yīng)主要由抗體介導(dǎo)刽肠，IV型超敏反應(yīng)是由T細(xì)胞介導(dǎo)的。

2免胃、I型超敏反應(yīng)

（1）I型超敏反應(yīng)又稱速發(fā)型超敏反應(yīng)音五，是變應(yīng)原再次進(jìn)入機(jī)體內(nèi)后引發(fā)的超敏反應(yīng)。特點(diǎn)為發(fā)生迅速羔沙，消退也迅速躺涝；由IgE抗體介導(dǎo)；主要病變在小動脈撬碟，毛細(xì)血管擴(kuò)張诞挨，通透性增加莉撇，平滑肌收縮，不發(fā)生病理損傷惶傻，有明顯個體差異和遺傳傾向棍郎；補(bǔ)體不參與。

（2）常見的I型超敏反應(yīng)性疾病常見的I型超敏反應(yīng)性疾病包括過敏性休克银室、過敏性哮喘涂佃、過敏性鼻炎、過敏性胃腸炎和蕁麻疹蜈敢。

3辜荠、Ⅱ型超敏反應(yīng)

（1）II型超敏反應(yīng)又稱細(xì)胞毒型超敏反應(yīng)，是由IgG或IgM類抗體與靶細(xì)胞表面的抗原結(jié)合抓狭，在補(bǔ)體伯病、巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞參與下，引起細(xì)胞溶解和組織損傷的超敏反應(yīng)否过。

（2）常見的II型超敏反應(yīng)性疾参绲选：輸血反應(yīng)、新生兒溶血癥苗桂、自身免疫性溶血性貧血药磺、藥物過敏性血細(xì)胞減少、Graves病煤伟、重癥肌無力癌佩。

4、Ⅲ型超敏反應(yīng)

（1）Ⅲ型超敏反應(yīng)又稱免疫復(fù)合物型便锨，是由可溶性免疫復(fù)合物沉積于毛細(xì)血管基底膜围辙，通過激活補(bǔ)體以及在血小板、肥大細(xì)胞放案、嗜堿性粒細(xì)胞的參與下酌畜，引起充血水腫、中性粒細(xì)胞浸潤卿叽、組織壞死為特征的炎癥反應(yīng)和組織損傷桥胞。

（2）常見的Ⅲ型超敏反應(yīng)性疾病：局部免疫復(fù)合物病包括Arthus反應(yīng)和類Arthus反應(yīng)（局部反復(fù)注射胰島素）等考婴。全身免疫復(fù)合物病包括血清病贩虾、鏈球菌感染后腎小球腎炎、慢性免疫復(fù)合物擦ぺ濉（SLE缎罢、RF）、過敏樣休克反應(yīng)等。

5策精、Ⅳ型超敏反應(yīng)

（1）IV型超敏反應(yīng)又稱遲發(fā)型超敏反應(yīng)舰始，是由效應(yīng)T細(xì)胞再次接觸相同抗原后引起以單個核細(xì)胞（巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞）浸潤為主的炎癥性病理損傷咽袜。

（2）IV型超敏反應(yīng)特點(diǎn)：①發(fā)生慢丸卷，再次接觸抗原后24～72h發(fā)生。 ②與抗體询刹、補(bǔ)體無關(guān)谜嫉，而與效應(yīng)T細(xì)胞和吞噬細(xì)胞及其產(chǎn)生的細(xì)胞因子和細(xì)胞毒性介質(zhì)有關(guān)。③無明顯個體差異凹联，在抗感染免疫清除抗原同時損傷組織沐兰。

（3）IV型超敏反應(yīng)性疾病包括傳染性遲發(fā)型超敏反應(yīng)、接觸性皮炎蔽挠、移植排斥反應(yīng)等住闯。

二十、腫瘤免疫及檢測

（一）腫瘤抗原的分類

1澳淑、腫瘤特異性抗原

? ? 腫瘤抗原是指細(xì)胞癌變過程中所表達(dá)的新生物或過量表達(dá)產(chǎn)物寞秃。根據(jù)腫瘤抗原特異性分為腫瘤特異性抗原（TSA）和腫瘤相關(guān)抗原（TAA）。

腫瘤特異性抗原是指僅表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面偶惠，而不存在于正常細(xì)胞的新抗原。①化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)的TSA特點(diǎn)是特異性高朗涩，抗原性較弱忽孽，常表現(xiàn)出明顯的個體獨(dú)特性。②病毒誘發(fā)的TSA具有較強(qiáng)的抗原性谢床，瘤細(xì)胞表面的TSA多系病毒基因的表達(dá)產(chǎn)物兄一，同一種病毒誘發(fā)的不同類型腫瘤可表達(dá)相同的抗原。

2识腿、腫瘤相關(guān)性抗原

? ? 腫瘤相關(guān)性抗原是指非腫瘤細(xì)胞所特有出革，正常細(xì)胞也可表達(dá)的抗原物質(zhì)，但在腫瘤發(fā)生時的機(jī)體可異常表達(dá)渡讼。①胚胎抗原是在胚胎發(fā)育階段由胚胎組織產(chǎn)生的正常成分骂束，在胚胎后期減少，出生后逐漸消失成箫，或僅存留極微量展箱。當(dāng)細(xì)胞惡性變時，此類抗原可重新合成蹬昌。最常見的：甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA）混驰。

②分化抗原。③其他TAA，如免疫抑制酸性蛋白栖榨、組織多肽抗原昆汹、鐵蛋白、唾液酸等婴栽。

（二）腫瘤標(biāo)志物的檢測及臨床意義

1满粗、甲胎蛋白（AFP）：由卵黃囊和肝細(xì)胞合成，是胚胎期重要的血清成分居夹，胎兒出生后败潦，其濃度急劇下降。幾個月至一年可降至正常水平准脂。成人血清AFP含量升高可見于：①原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌：有輔助診斷劫扒、早期診斷、鑒別診斷的意義狸膏，動態(tài)觀察沟饥，AFP不高者不能排除原發(fā)性肝癌；②生殖系統(tǒng)胚胎瘤湾戳，如惡性畸胎瘤贤旷；③消化

道腫瘤肝轉(zhuǎn)移；④妊娠砾脑，急幼驶、慢性肝炎，肝硬化一過性AFP升高韧衣。正常值＜20μg/L盅藻；AFP＞400μg/L時，對原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌有較大的診斷價值畅铭。

2氏淑、癌胚抗原（CEA）：CEA是一種糖蛋白，作為成人結(jié)腸癌輔助診斷的重要項目

3硕噩、前列腺特異性抗原（PSA）：可用于前列腺癌的輔助診斷假残、療效監(jiān)測及預(yù)后判斷。正常值0～4μg/L(EIA)炉擅；0～2.5μg/L(RIA)辉懒，常以＞4μg/L作為前列腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)〉В總PSA（tPSA）耗帕，游離PSA（fPSA）升高，tPSA/fPSA降低袱贮，高度提示前列腺癌的可能仿便。PAS是器官特異性的癌抗原体啰。

4、CA125：卵巢癌時可增高嗽仪。

5荒勇、CA19-9：正常人＜37μg/L，是胰腺癌和結(jié)闻坚、直腸癌的標(biāo)志物沽翔。胰腺癌患者85～95%為陽性。

6窿凤、CA15-3：30～50%乳腺癌患者明顯增高仅偎，也是檢測乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)的最佳指標(biāo)。

7雳殊、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）：是神經(jīng)母細(xì)胞瘤和小細(xì)胞肺癌的標(biāo)志物橘沥。

8、細(xì)胞角蛋白19（Cyfra21-1）：非小細(xì)胞肺癌患者最有價值的腫瘤標(biāo)志物夯秃。

二十一座咆、移植免疫及檢測

1、移植的類型 ：

（1）自體移植：如燒傷后植皮仓洼；

（2）同系移植：同系移植是遺傳背景完全相同的個體間進(jìn)行的細(xì)胞介陶、組織或器官移植。如同卵雙生子或同類系動物不同個體間的移植色建，移植后不發(fā)生排斥反應(yīng)哺呜。；

（3）同種移植：同種異體移植箕戳；

（4）異種移植：移植后出現(xiàn)強(qiáng)烈排斥某残；

（5）胚胎組織移植。

2漂羊、目前認(rèn)為HLA-DR對移植排斥最為重要，而HLA-C在移植在移植免疫過程中沒有明顯作用卸留。

3走越、排斥反應(yīng)有兩種基本類型：宿主抗移植物反應(yīng)（HVGR）和移植物抗宿主反應(yīng)（GVHR）。HVGR又可分為3種類型：超急排斥反應(yīng)耻瑟、急性排斥反應(yīng)旨指、慢性排斥反應(yīng)。急性排斥反應(yīng)在同種移植中最常見喳整，多發(fā)生在移植后數(shù)周到1年內(nèi)谆构，病理特征為移植物實質(zhì)和小血管壁上有以單個核細(xì)胞為主的細(xì)胞浸潤、間質(zhì)水腫與血管損害框都，后期在大動脈壁上有急性纖維素樣炎癥搬素。

4、在器官缺乏的情況下，對受者施用免疫抑制劑熬尺，不再強(qiáng)調(diào)HLA配型摸屠，但ABO血型應(yīng)該相容，預(yù)存的細(xì)胞毒抗體必須陰性粱哼。

5季二、計數(shù)供者外周單個核細(xì)胞中分泌IL-2的特異性T細(xì)胞比值。此比值≥1/100000揭措，提示有可能發(fā)生

GVHR胯舷。

6、器官移植中最易發(fā)生移植排斥的是肝移植绊含。

7桑嘶、HLA-I類抗原血清學(xué)分型目前使用的是Terasaki改良的微量補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗，該方法被美國國立衛(wèi)生研究院認(rèn)可艺挪，成為國際通用的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)不翩。

黏附分子分為5個家族，分別為：整合素家族麻裳、選擇素家族口蝠、免疫球蛋白超家族、黏蛋白樣家族津坑、鈣黏素家族妙蔗。