經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種笆檀,其中 DMEM、 RPMI 1640盒至、 MEM 误债、 DMEM/F12 都是應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。其他 如 M199 妄迁、 IMDM 寝蹈、 L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。其具體的特征及應(yīng)用如下:
1登淘、BME細(xì)胞培養(yǎng)基
基礎(chǔ)Eagle培養(yǎng)基(Basal Medium Eagle)箫老,1955年Eagle設(shè)計(jì),BSS+12種氨基酸+谷氨酰胺+8種維生素黔州。簡(jiǎn)單耍鬓、便于添加阔籽,適于各種傳代細(xì)胞系和特殊研究用,在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM牲蜀、DMEM笆制、IMDM等。
2涣达、MEM細(xì)胞培養(yǎng)基
又稱低限量Eagle培養(yǎng)基(Minimal Essential Medium)在辆,1959年在Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)上修改而來(lái),刪去賴氨酸度苔、生物素匆篓,氨基酸濃度增加,適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)寇窑,有可高壓滅菌品種鸦概,是一種最基本、試用范圍最廣的培養(yǎng)基甩骏,但因其營(yíng)養(yǎng)成分所限窗市,針對(duì)生產(chǎn)之特定細(xì)胞培養(yǎng)與表達(dá)時(shí),并不一定是使用效果最佳或者最經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基饮笛。
3谨设、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基
DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基,起初是為小鼠成纖維細(xì)胞設(shè)計(jì)的缎浇。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍扎拣,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用素跺。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L二蓝,后來(lái)為了某些細(xì)胞的生長(zhǎng)需要,將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L指厌,這就是大家常說(shuō)的低糖和高糖了刊愚。
低糖適于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng),特別適用于生長(zhǎng)速度快踩验、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)鸥诽。高糖更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng),也適用于附著性較差箕憾,但又不希望它脫離原來(lái)生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng)牡借,也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。例如CHO細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗袭异、CHO細(xì)胞表達(dá)EPO钠龙。
4、IMDM細(xì)胞培養(yǎng)基
Guilber 和Iscove將Dulbecco' Medium 改良為 Iscove's Medium,用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體碴里。此種培養(yǎng)液含有硒沈矿、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES咬腋。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵羹膳。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞,LPS刺激的B細(xì)胞根竿,骨髓造血細(xì)胞陵像,T細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。IMDM為營(yíng)養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液犀填,因此可以用于高密度細(xì)胞的快速增殖培養(yǎng)。
5嗓违、RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基
Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制九巡,針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì),含BSS+21種氨基酸+維生素11種等□寮荆現(xiàn)也用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)冕广,如哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞偿洁、正橙龊海或惡性增生的白細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)涕滋,其它像K-562睬辐、HL-60、Jurkat宾肺、Daudi溯饵、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用锨用。
6丰刊、HamF10細(xì)胞培養(yǎng)基
1963年Ham設(shè)計(jì),含微量元素增拥,可在血清含量低時(shí)用啄巧,適用于克隆化培養(yǎng)。F10適用于倉(cāng)鼠掌栅、人二倍體細(xì)胞秩仆,特適于羊水細(xì)胞培養(yǎng)。
7猾封、DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基
Ham's F12是為在低血清濃度下克隆CHO細(xì)胞而設(shè)計(jì)的逗概,現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM等體積混合使用,得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物逾苫,這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細(xì)胞系的培養(yǎng)卿城。由于營(yíng)養(yǎng)成分豐富,且可以使用較少血清铅搓,故也常作為無(wú)血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)培養(yǎng)基瑟押。
8、M199細(xì)胞培養(yǎng)基
1950年Morgan等設(shè)計(jì)的具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液星掰,即M-199多望。除BSS外,含有53種成分氢烘,為全面培養(yǎng)基怀偷,主要用于雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)。此培養(yǎng)液必須輔以血清才能支持長(zhǎng)期培養(yǎng)播玖。M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來(lái)源的細(xì)胞椎工,并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。現(xiàn)廣泛用于病毒學(xué)蜀踏、疫苗生產(chǎn)维蒙。
9、McCoy5A培養(yǎng)基
1959年MeCoy為肉瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)果覆,BSS+40種成分颅痊。可支持多種(如骨髓局待、皮膚斑响、肺和脾臟等)的原代移植物的生長(zhǎng),除適于一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)外钳榨,主要用于作組織活檢培養(yǎng)恋捆、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纖維細(xì)胞重绷、人淋巴細(xì)胞沸停、HT-29、BHL-100等上皮細(xì)胞昭卓。
10愤钾、L15 細(xì)胞培養(yǎng)基
L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng),用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株候醒。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系能颁,氨基酸組成進(jìn)一步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖倒淫。
至于選擇何種培養(yǎng)基并沒(méi)有一定的標(biāo)準(zhǔn)伙菊,有幾點(diǎn)建議可供參考:
(1)建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首選的培養(yǎng)基。可以查閱參考文獻(xiàn)镜硕,或在購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞株時(shí)咨詢运翼。也可以在一些生物公司的網(wǎng)站上搜索,如Invitrogen網(wǎng)站上有一個(gè)Cell Line Database的工具兴枯,選擇你感興趣的細(xì)胞類型血淌,它就會(huì)彈出推薦的培養(yǎng)基、血清和轉(zhuǎn)染試劑等财剖,有時(shí)還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染步驟悠夯,很方便。
(2) 其它實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試躺坟,許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞沦补。
(3) 根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇培養(yǎng)基咪橙。如小鼠細(xì)胞株多選RPMI1640 夕膀。
(4) 用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞,觀察其生長(zhǎng)狀態(tài)匣摘,可以用生長(zhǎng)曲線店诗、集落形成率等指標(biāo)判斷裹刮,根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基音榜,這是最客觀的方法,但比較繁瑣捧弃。