文獻(xiàn)

2023?

Nature Plants

Uncovering the transcriptional regulatory network involved in boosting wheat regeneration and transformation

研究背景

1-在擬南芥中疫粥，通過側(cè)根起始途徑在CIM上激活全能性：生長(zhǎng)素誘導(dǎo)WOX11 和 WOX12將具有再生能力的細(xì)胞轉(zhuǎn)為founder cell溉贿，然后辜贵，WOX5 和 LBD16 將founder cell轉(zhuǎn)為愈傷組織。

2-除了轉(zhuǎn)錄因子宙橱，許多表觀遺傳修飾已被證實(shí)參與了擬南芥再生，如H3K27me3、H3K36me3和H3K4me3都已經(jīng)被證實(shí)影響再生過程栽惶，DNA甲基轉(zhuǎn)移酶MET1也參與了再生過程的調(diào)控迅脐。

3-與擬南芥相比芍殖，小麥的再生更加困難。在小麥中谴蔑，授粉后約14 天的未成熟胚可作為外植體围小，且不同基因型小麥的再生效率不同。目前最容易完成再生的小麥品種是Fielder.

本文亮點(diǎn)

1-作者利用RNA-seq树碱、ATAC-seq以及CUT&TAG技術(shù)分析了最容易遺傳轉(zhuǎn)化的六倍體小麥品種“Fielder”未成熟胚再生過程的轉(zhuǎn)錄水平和染色質(zhì)狀態(tài)肯适。

2-發(fā)現(xiàn)在再生過程中，生長(zhǎng)素誘導(dǎo)了介導(dǎo)細(xì)胞命運(yùn)轉(zhuǎn)變的基因的順序表達(dá)成榜，并與染色質(zhì)可及性框舔、H3K27me3和H3K4me3狀態(tài)的變化相協(xié)調(diào)。

3-構(gòu)建了小麥再生的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)(TRN)赎婚，通過對(duì)比小麥和擬南芥的再生過程刘绣，發(fā)現(xiàn)了DOF轉(zhuǎn)錄因子在擬南芥和小麥中表達(dá)模式不同。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明挣输，TaDOF5.6 和TaDOF3.4 是不同小麥品種轉(zhuǎn)化效率的潛在促進(jìn)劑纬凤。

結(jié)論01?小麥再生過程轉(zhuǎn)錄和表觀圖譜的描述

Fig 1a

Fig 1b

作者選擇了最容易做成遺傳轉(zhuǎn)化的小麥品種——Fielder，作為研究材料撩嚼。取開花后14天收集的未成熟胚的盾片用作再生的外植體停士，誘導(dǎo)后3d，盾片開始進(jìn)行細(xì)胞分裂并形成愈傷組織完丽，6 d后愈傷組織繼續(xù)發(fā)育并形成突起恋技。誘導(dǎo)12天后，觀察到莖尖分生組織的形成逻族。作者測(cè)定了該過程了15份轉(zhuǎn)錄組（DAI0-3-6-9-12,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)3份重復(fù)）蜻底，8份ATAC-seq（DAI0-3-6-9,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)2份重復(fù)），以及3種組蛋白修飾的24份CUT&TAG數(shù)據(jù)（Fig1a）聘鳞。

數(shù)據(jù)有良好的重復(fù)性薄辅，并反映了再生進(jìn)程（Fig 1b）要拂。

Fig 1c

Fig 1d

大部分開放染色質(zhì)區(qū)域和組蛋白修飾位于基因間區(qū)（Fig 1c).

開放染色質(zhì)和H3K27ac的信號(hào)主要位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(TSS)附近，而H3K27me3和H3K4me3存在于整個(gè)基因中(Fig 1d).

Fig 1e

Fig S1d

在再生過程中站楚，共鑒定了40146個(gè)差異表達(dá)基因(Fig 1e)宇弛，展示了轉(zhuǎn)錄組重編程的程度。

此外源请，38%的ATAC-seq峰是差異可及的(Fig 1e)枪芒，而只有一小部分組蛋白修飾峰顯示差異標(biāo)記(Fig S1d)。這表明染色質(zhì)可及性在小麥再生過程中起著至關(guān)重要的作用谁尸。

Fig 1f-i

為了研究小麥再生過程中的轉(zhuǎn)錄變化舅踪，使用K-均值聚類分析將DEGs分成六個(gè)簇(Fig 1f），對(duì)每一簇的基因做了轉(zhuǎn)錄因子富集分析（Fig 1h）和GO富集分析（Fig 1i）良蛮，以揭示每一簇基因的潛在功能抽碌。Fig 1g展示了每一簇的典型再生相關(guān)基因表達(dá)量。

01 生信分析

主成分分析

差異peak的鑒定及注釋

基因鄰近的metaplot

基因表達(dá)的聚類分析

轉(zhuǎn)錄因子富集分析

GO富集分析

結(jié)論2-染色質(zhì)狀態(tài)改變與基因表達(dá)相協(xié)調(diào)

Fig 2a

為了研究小麥再生過程中轉(zhuǎn)錄譜决瞳、染色質(zhì)可及性和組蛋白修飾之間的關(guān)系货徙，作者評(píng)估了基因的轉(zhuǎn)錄水平與各種染色質(zhì)特征之間的皮爾森相關(guān)系數(shù)(Fig 2a)。Fig 2a展示了六簇基因的表達(dá)量皮胡、染色質(zhì)可及性以及三種組蛋白修飾在再生過程種的變化痴颊，每個(gè)小圖中右上角的數(shù)字代表了相應(yīng)特征和轉(zhuǎn)錄水平的皮爾森相關(guān)系數(shù)。

染色質(zhì)可及性與所有簇的基因轉(zhuǎn)錄變化呈正相關(guān)屡贺，而H3K27me3在大多數(shù)簇(C2蠢棱、C3、C4和C6)中呈負(fù)相關(guān)甩栈。H3K4me3在C1泻仙、C3和C4與轉(zhuǎn)錄正相關(guān)。在大多數(shù)簇中量没，H3K27ac與轉(zhuǎn)錄的相關(guān)性較低玉转。

Fig 2b, c

作者定義，如果染色質(zhì)可及性或組蛋白修飾與轉(zhuǎn)錄水平的皮爾森相關(guān)系數(shù)大于0.7或小于-0.7殴蹄，則認(rèn)為染色質(zhì)可及性或組蛋白修飾可以調(diào)節(jié)基因表達(dá)究抓。在再生過程中，97%的差異表達(dá)基因在其啟動(dòng)子或基因區(qū)域至少有一個(gè)ATAC-seq峰（Fig 2b中ATAC）饶套，其中55%受染色質(zhì)可及性的調(diào)節(jié)（Fig 2b中ATAC.reg）漩蟆，對(duì)于H3K27me3垒探，36%的差異表達(dá)基因在啟動(dòng)子或基因區(qū)域至少有一個(gè)峰妓蛮，只有11%受H3K27me3調(diào)控。

3299個(gè)基因受到染色質(zhì)可及性及H3K27me3修飾的共同調(diào)控（Fig 2b, c）,其中大約一半屬于C3和C4圾叼，它們?cè)谟鷤M織誘導(dǎo)后期被激活蛤克∞囫考慮到C3和C4中的差異表達(dá)基因也受H3K4me3調(diào)控，作者共確定了1116個(gè)受染色質(zhì)可及性构挤、H3K27me3和H3K4me3調(diào)控的差異表達(dá)基因髓介。

Fig 2d-e

考慮到C3和C4中的差異表達(dá)基因也受H3K4me3調(diào)控，作者共確定了1116個(gè)受染色質(zhì)可及性筋现、H3K27me3和H3K4me3調(diào)控的差異表達(dá)基因唐础。這些基因在生長(zhǎng)素信號(hào)傳導(dǎo)、根發(fā)育矾飞、分生組織起始和芽系統(tǒng)發(fā)育等過程中發(fā)揮重要作用(Fig 2d)一膨，F(xiàn)ig 2e展示了已知與再生過程相關(guān)的幾個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄水平、染色質(zhì)可及性以及組蛋白修飾洒沦。以上分析強(qiáng)調(diào)了再再生過程中豹绪，染色質(zhì)可及性和組蛋白修飾可以協(xié)同調(diào)控基因表達(dá)。

02 生信分析

相關(guān)性的計(jì)算

旭日?qǐng)D

GO富集

結(jié)論3-生長(zhǎng)素促進(jìn)愈傷組織誘導(dǎo)并與細(xì)胞分裂素相互作用

Fig 3a

生長(zhǎng)素是植物再生過程的關(guān)鍵激素申眼。在具有再生潛能的細(xì)胞中瞒津，生長(zhǎng)素可以直接激活WOX11的表達(dá)，將具有再生潛能的細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)楦鶆?chuàng)始細(xì)胞括尸。然后巷蚪，WOX11可以激活WOX5等基因的表達(dá)，促使根創(chuàng)始細(xì)胞分裂形成根原基濒翻。所以钓辆，根據(jù)WOX11和WOX5的表達(dá)，作者將再生過程分成了根創(chuàng)始細(xì)胞的形成（DAI3）和根原基的形成(DAI6肴焊、9前联、12)兩個(gè)階段(Fig 3a)。

根創(chuàng)始細(xì)胞的形成需要大量的局部生長(zhǎng)素娶眷，這可能是由生長(zhǎng)素運(yùn)輸基因（如TaABCB1似嗤、TaABCB3和TaLAX1）的表達(dá)所促進(jìn)的。生長(zhǎng)素信號(hào)對(duì)刺激根原基的形成和維持也至關(guān)重要届宠，作者觀察到的生長(zhǎng)素信號(hào)通路相關(guān)基因（如TaTIR1烁落、TaIAA3和TaARF5）的激活支持了這一點(diǎn)。

Fig 3b, c

生長(zhǎng)素信號(hào)通路的轉(zhuǎn)錄調(diào)控依賴于生長(zhǎng)素響應(yīng)因子（ARF）豌注，ARF能夠與生長(zhǎng)素響應(yīng)基因的順式作用元件(AuxRE)結(jié)合進(jìn)而調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)伤塌。接下來(lái)，作者想知道生長(zhǎng)素信號(hào)轧铁，特別是ARF每聪，是如何參與小麥再生的。

確定ARF靶基因的兩個(gè)指標(biāo)：1、基因啟動(dòng)子或基因區(qū)域的ATAC-seq peak包含ARF結(jié)合基序（AuxRE）药薯；2绑洛、施加生長(zhǎng)素后表達(dá)上調(diào)（位于C2-C6中的任何一組）。

共鑒定出9471個(gè)與生長(zhǎng)素信號(hào)通路童本、細(xì)胞周期和芽部發(fā)育相關(guān)的靶基因（Fig 3b）真屯，可以分成三組：第一組包括已知參與植物再生的基因，如分生組織識(shí)別基因TaWOX5穷娱、TaBBM绑蔫、TaSCR和細(xì)胞周期相關(guān)基因，表明生長(zhǎng)素信號(hào)在驅(qū)動(dòng)愈傷組織誘導(dǎo)過程中的作用泵额；第二組基因與細(xì)胞分裂素相關(guān)晾匠，包括TaIPT2、TaAHK3和TaARR10等梯刚，這表明生長(zhǎng)素信號(hào)可以激活細(xì)胞分裂素途徑凉馆，從而啟動(dòng)隨后的器官分化；第三組基因包括生長(zhǎng)素合成基因TaYUC3亡资、轉(zhuǎn)運(yùn)基因TaPIN1和生長(zhǎng)素F-BOX蛋白5 (TaAFB5)信號(hào)通路基因澜共。

因此，在小麥再生的不同階段锥腻，ARFs可能在維持生長(zhǎng)素濃度和信號(hào)傳導(dǎo)平衡中發(fā)揮作用嗦董。

Fig 3d, e

ARF的靶基因中包含許多與細(xì)胞分裂素相關(guān)的基因，細(xì)胞分裂素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑包含多種蛋白質(zhì)瘦黑，包括B型ARR京革，已經(jīng)被證實(shí)參與調(diào)控?cái)M南芥離體苗再生。通過ChromVar評(píng)估幸斥，B型ARR結(jié)合基序的活性在DAI 6時(shí)顯著升高（Fig 3d）匹摇，用類似前面提到的方法鑒定了2924個(gè)B型ARR的潛在靶基因，這些基因包括參與根發(fā)育的TaWOX5和TaLBD13甲葬。

并且廊勃，一些參與生長(zhǎng)素運(yùn)輸和信號(hào)傳導(dǎo)的基因，如TaPIN1和TaARF10经窖，同時(shí)受到B-ARR和ARF的調(diào)節(jié)(圖3e)坡垫，表明生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素信號(hào)傳導(dǎo)之間存在串?dāng)_。

03 生信分析

轉(zhuǎn)錄因子靶基因的鑒定

motif活性

結(jié)論4-構(gòu)建轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)TRN

Fig 4a

為了構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子和靶基因的對(duì)應(yīng)關(guān)系画侣，作者利用ATAC-seq數(shù)據(jù)進(jìn)行了足跡（footprints）分析冰悠。所謂ATAC-seq足跡，即轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合配乱，從而阻止Tn5在結(jié)合位點(diǎn)切割溉卓，所以形成了一個(gè)被保護(hù)的區(qū)域皮迟，反映在比對(duì)上，會(huì)形成一個(gè)低覆蓋度的區(qū)域的诵。

參與植物再生的已知調(diào)節(jié)因子万栅，如LEC2佑钾、DOF5.6西疤、WOX11和BBM，其轉(zhuǎn)錄因子足跡的染色質(zhì)可及性在再生過程中發(fā)生了顯著變化(Fig 4a)休溶，表明它們具有潛在的功能重要性代赁。

Fig S4a

Fig 4b

基于以下三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建了該轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)：1、TF與靶基因存在調(diào)控關(guān)系兽掰；2芭碍、TF與靶基因共表達(dá)；3孽尽、只考慮六個(gè)cluster中可以顯著富集到的轉(zhuǎn)錄因子（Fig S4a和Fig 4b）窖壕。其中1是根據(jù)ATAC-seq鑒定到的足跡，利用擬南芥中已知的TF調(diào)控motif來(lái)初步確定TF與靶基因的調(diào)控杉女，2是根據(jù)表達(dá)對(duì)1根據(jù)序列得到的結(jié)果進(jìn)一步篩選瞻讽，3是為了構(gòu)建再生過程的核心調(diào)控關(guān)系。

最終熏挎，得到一個(gè)包含31,272個(gè)節(jié)點(diǎn)和8,856,326條邊的網(wǎng)絡(luò)速勇，其中有1,766個(gè)轉(zhuǎn)錄因子。

04 生信分析

ATAC-seq足跡鑒定

轉(zhuǎn)錄因子靶基因鑒定

轉(zhuǎn)錄因子富集分析

結(jié)論5-利用轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)TRN發(fā)掘核心轉(zhuǎn)錄因子

Fig 4c, d

Fig S4h

為了確定基因表達(dá)的時(shí)間順序坎拐，我們進(jìn)行了偽時(shí)間分析烦磁。不同簇的時(shí)間序列表達(dá)模式清晰，順序?yàn)镃1-C5-C6-C2-C3-C4(Fig 4c), 然后生成一個(gè)集群內(nèi)的監(jiān)管網(wǎng)絡(luò)哼勇，以探索不同集群之間的監(jiān)管關(guān)系(Fig 4d)都伪。

在DAI 0特異性高表達(dá)的C1與其他簇之間沒有調(diào)節(jié)關(guān)系，進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了生長(zhǎng)素處理的作用积担。C5-C6-C2-C3-C4集群之間的調(diào)控關(guān)系遵循基因表達(dá)的時(shí)間軸院溺，作者推測(cè)兩種不同的調(diào)控模式共存驅(qū)動(dòng)小麥再生（Fig S4h）：第一類指每個(gè)簇中的基因受同一簇中的TF調(diào)控，第二類指后表達(dá)簇中的基因受前表達(dá)簇中的TF調(diào)控磅轻。

Fig 4f

Fig 4g, h

結(jié)合這兩種調(diào)控模式珍逸，作者確定了446個(gè)核心轉(zhuǎn)錄因子，它們要么富集于其自身集群的靶基因上游（I型調(diào)控模式）聋溜，要么在下一簇靶基因上游富集（II型調(diào)控模式）谆膳。

其中AP2、ERF撮躁、HD-ZIP漱病、DOF、G2-like和NAC家族富集(Fig 4f)， 40個(gè)轉(zhuǎn)錄因子是在擬南芥中功能性測(cè)試的再生因子的同源物(Fig 4g) 杨帽，并且這些基因在小麥再生過程中表現(xiàn)出順序調(diào)控(Fig 4h)漓穿，如TaWOX11、TaDOF5.6和TaWIND3先被激活注盈，然后再激活TaBBM晃危、TaAIL5和TaSCR來(lái)促進(jìn)愈傷組織的形成。

Fig S6a

Fig S6b

Fig S6c, d

進(jìn)一步老客，作者使用來(lái)自12個(gè)小麥品種的已發(fā)表表型和基因型數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)估位于446個(gè)核心TF的啟動(dòng)子和基因區(qū)域的DNA變異對(duì)再生效率的影響僚饭。三個(gè)基因的DNA變異與愈傷組織分化率呈顯著相關(guān)，其中胧砰，WOX基因開放染色質(zhì)區(qū)域內(nèi)的單核苷酸多態(tài)性與12個(gè)品種間愈傷組織分化差異顯著相關(guān)(Fig S6c,d)鳍鸵。

這些結(jié)果表明，來(lái)自TRN核心TFs的因素可能導(dǎo)致小麥品種間再生效率的差異尉间。

05 生信分析

偽時(shí)間分析

轉(zhuǎn)錄因子富集分析

結(jié)論6-小麥和擬南芥誘導(dǎo)愈傷過程的比較

Fig 5a, b

由于驅(qū)動(dòng)再生的核心TRN在小麥和擬南芥中含有保守的TFs偿乖，我們比較了這兩個(gè)物種的過程，特別是愈傷組織誘導(dǎo)哲嘲。對(duì)每個(gè)物種的不同階段進(jìn)行了差異表達(dá)分析贪薪，并從DEG中鑒定了同源基因。根據(jù)有無(wú)同源基因以及差異表達(dá)情況撤蚊，可以分成三組（Fig 5a）：group1即物種特異性的DEG古掏，group2即在某一物種中是DEG但是在另一物種中不表達(dá)或者不差異表達(dá)的基因，group3即在某物種中差異表達(dá)并且在另一個(gè)物種的同源基因也差異表達(dá)侦啸。

為了進(jìn)行比較槽唾，重點(diǎn)研究了group3，利用物種內(nèi)Z-score標(biāo)準(zhǔn)化基因表達(dá)和染色質(zhì)可及性譜光涂，然后進(jìn)行了聚類（Fig 5b）庞萍，盡管使用的外植體不同，小麥為未成熟胚忘闻，擬南芥為下胚軸钝计，但愈傷組織誘導(dǎo)過程是保守的，這一點(diǎn)可以從兩個(gè)物種之間同一誘導(dǎo)階段的樣品比同一物種內(nèi)不同誘導(dǎo)階段的樣品更相似的事實(shí)中得到證明（Fig 5b）齐佳。

Fig 5c

許多已知參與再生的基因私恬，如BBM、SHR炼吴、REV本鸣、AIL5和激素相關(guān)基因AHK4、PIN1硅蹦、ARF5和ARR12荣德，在小麥和擬南芥的愈傷組織形成過程中表現(xiàn)出相似的表達(dá)模式(Fig5c)闷煤。

然而，一些再生因子在兩個(gè)物種中表現(xiàn)出不同的表達(dá)模式涮瞻，如LBD17和ANAC011(Fig5c)鲤拿。因此，雖然同源基因參與了小麥和擬南芥的早期再生過程署咽，但可能存在物種特異性表達(dá)模式和轉(zhuǎn)錄調(diào)控途徑近顷。

Fig 5d

Fig 5e

根據(jù)表達(dá)模式的相關(guān)性，將同源基因分為兩類:表達(dá)模式相似或不同的同源基因艇抠∧宦基因久锥。達(dá)模式的相似性或差異與同源物近端區(qū)域的染色質(zhì)可及性密切相關(guān)（Fig5d）家淤。為了深入了解這兩類基因，作者在c1-c6的同源基因中進(jìn)行了over-representation analysis （Fig5e）瑟由，具有相似表達(dá)模式的同源基因主要富集在C1和C6中絮重。

Fig 5f, g

具有不同表達(dá)模式的同源基因在愈傷組織誘導(dǎo)早期被生長(zhǎng)素短暫誘導(dǎo)的C5中被發(fā)現(xiàn)豐富，C5主要富集DOF 和 G2-like家族 (Fig 5f)歹苦，例如青伤，DOF5.6在小麥愈傷組織誘導(dǎo)早期表達(dá)水平上調(diào)，而在擬南芥愈傷組織誘導(dǎo)后期表達(dá)水平上調(diào) (Fig 5g)

Fig S7d

Fig S7g

為了擬南芥和小麥更好的對(duì)比殴瘦，作者也對(duì)擬南芥的轉(zhuǎn)錄組做了K均聚類（Fig S7d）狠角，并確定了擬南芥中的A3簇和小麥的C5簇表達(dá)類似。然而蚪腋，與DOF家族在小麥C5中富集不同丰歌，LBD和NAC家族在擬南芥簇A3中富集(Fig S7g).

小麥和擬南芥在愈傷組織誘導(dǎo)早期所觀察到的差異可能是由于所使用外植體的種特異性造成的。之前的研究發(fā)現(xiàn)屉凯，LBD和NAC在擬南芥再生中發(fā)揮重要作用立帖，所以DOF和G2-like對(duì)小麥再生的影響值得進(jìn)一步研究。

06 生信分析

基因的聚類分析

基因功能富集分析

結(jié)論7-轉(zhuǎn)錄因子DOF提高了小麥的再生效率

Fig 6a

Fig 6b, c

文章的最后一部分悠砚，作者探究了DOF轉(zhuǎn)錄因子對(duì)再生的影響晓勇。小麥中， 生長(zhǎng)素處理后TaDOF5.6和TaDOF3.4的表達(dá)水平上調(diào)最為顯著(DAI 3)灌旧，同時(shí)H3K27me3被去除 （Fig6a）绑咱，并且TaDOF5.6和TaDOF3.4屬于前面鑒定到的446個(gè)核心轉(zhuǎn)錄因子，因此選擇這兩個(gè)基因用于后續(xù)驗(yàn)證枢泰。

對(duì)小麥品種Fielder的未成熟胚胎進(jìn)行的TaDOF5.6和TaDOF3.4 的共轉(zhuǎn)(Fig 6b)描融，發(fā)現(xiàn)與GUS陰性對(duì)照相比，愈傷組織誘導(dǎo)效率和轉(zhuǎn)化效率均有顯著提高宗苍。

Fig 6d, e

與GUS相比稼稿，轉(zhuǎn)化TaDOF5.6和TaDOF3.4的愈傷組織誘導(dǎo)效率分別從52%提高到88%和85%(Fig 6d)薄榛，在相同處理下，轉(zhuǎn)化效率分別從26%提高到50%和55% (Fig 6e).

把小麥品種擴(kuò)展到JM22 和 KN199让歼，也能發(fā)現(xiàn)明顯的再生能力提升（Fig6d, e）敞恋，上述結(jié)果表明，TaDOF5.6和TaDOF3.4可以提高不同小麥品種的轉(zhuǎn)化效率谋右。

Fig 6f

Fig 6g

Fig 6h

有研究發(fā)現(xiàn)DOF3.4可以通過激活細(xì)胞增殖基因參與再生硬猫。在我們的TRN中，TaDOF5.6和TaDOF3.4可以直接調(diào)節(jié)與根和莖分生組織形成相關(guān)的基因改执，如LBDs啸蜜、YABs和SCL2的表達(dá)提高小麥的再生效率。

原位雜交證實(shí)辈挂，TaDOF5.6僅在DAI 3的原形成層區(qū)表達(dá)衬横，而TaDOF3.4在DAI 3的表皮下三到四層、DAI 6的愈傷組織和DAI 9的芽原基的中表達(dá)(Fig 6f)终蒂。

隨后蜂林，從轉(zhuǎn)化的TaDOF5.6、TaDOF3.4和GUS對(duì)照中收集材料拇泣，我們發(fā)現(xiàn)與GUS相比噪叙，TaLBD4和TaSCL27在TaDOF3.4或TaDOF5.6轉(zhuǎn)化的組織中表達(dá)水平更高(Fig 6g), 轉(zhuǎn)錄報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了TaDOF3.4對(duì)TaLBD4和TaSCL27的調(diào)控作用(Fig 6h)。

綜上霉翔，TaDOF5.6和TaDOF3.4可以作為小麥轉(zhuǎn)化的新型促進(jìn)劑來(lái)提高轉(zhuǎn)化效率睁蕾。

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