間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal Stem Cells，MSC）是一類多能干細(xì)胞股缸，能夠分化為多種細(xì)胞類型，有極強(qiáng)的自我更新能力敦姻，具有免疫調(diào)節(jié)功能歧杏，且能分泌多種生物活性因子促進(jìn)組織修復(fù)和再生。因此犬绒，MSC在再生醫(yī)學(xué)兑凿、組織工程懂更、免疫調(diào)節(jié)急膀、藥物篩選等方面有著廣泛的應(yīng)用潛力。
MSC屬于貼壁依賴的細(xì)胞卓嫂，通常需要附著在培養(yǎng)表面才能保持干性以及有效增殖和生長(zhǎng)。為了進(jìn)一步發(fā)揮MSC的功能晨雳，通常會(huì)利用微載體或者片狀載體進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。在MSC的微載體/片狀載體培養(yǎng)過程中餐禁，常規(guī)使用的是胰酶消化后的細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，觀察MSC細(xì)胞濃度變化和活率變化帮非，但也面臨一些問題：
01、胰酶消化微載體上的細(xì)胞末盔，往往不能完全消化。
02陨舱、胰酶過度消化也容易造成細(xì)胞損傷，活性下降游盲。
艾貝泰Countleader?雙熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，搭配艾貝泰自產(chǎn)細(xì)胞裂解液A+B液益缎，可很好的解決胰酶消化操作復(fù)雜、結(jié)果準(zhǔn)確性低的問題链峭。
MSC微載體培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法
首先將培養(yǎng)的MSC樣本分為兩份：
一份樣本中按等體積加入Reagent A100 裂解緩沖液處理微載體懸浮培養(yǎng)物又沾，裂解緩沖液使細(xì)胞質(zhì)膜通透并從微載體上釋放細(xì)胞核熙卡。然后用等體積的Reagent B穩(wěn)定細(xì)胞核励饵，形成穩(wěn)定的細(xì)胞核懸液（樣品1）驳癌，取樣品1與AOPI染料1:1 混合役听，吸取15μL 染色后的細(xì)胞樣品加入到FL8-slides耗材的待測(cè)通道中(通道1)。
另外一份樣本（樣品2）同時(shí)與AOPI染料1:1 混合典予，吸取15μL染色后的細(xì)胞樣品加入到FL8-slides耗材的待測(cè)通道中(通道2)。
Countleader? FL 1000細(xì)胞計(jì)數(shù)儀內(nèi)置“Viabilityand Cell Count Assay A100 And B”分析方法瘤袖。通道1獲得總細(xì)胞濃度，通道2獲得死細(xì)胞濃度捂敌。
PI能夠與死細(xì)胞、細(xì)胞裂解后的細(xì)胞核染色泡嘴，呈現(xiàn)紅色熒光。無(wú)需手動(dòng)計(jì)算酌予，設(shè)備軟件自行運(yùn)算，直接快速霎终、準(zhǔn)確的獲得微載體培養(yǎng)MSC的活細(xì)胞濃度以及活率升薯。
MSC片狀載體培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法
收集2-3個(gè)片狀載體至50 mL離心管中莱褒，加入適量體積（淹沒整個(gè)片狀載體為準(zhǔn)）的Reagent A100 裂解緩沖液涎劈，裂解10min（按照不同載體材質(zhì)，裂解時(shí)間可分別設(shè)置5min蛛枚、10min、15min蹦浦、20min等，如果延長(zhǎng)時(shí)間后，細(xì)胞數(shù)量沒有顯著增加蝌诡，可以確定最佳孵育時(shí)間），加入等體積的Reagent B 穩(wěn)定細(xì)胞核浦旱，混合均勻。
取裂解完畢后的混合液與AOPI染料1:1 混合,吸取15μL 染色后的細(xì)胞樣品加入到FL8-slides耗材的待測(cè)通道中颁湖。Countleader? FL 1000細(xì)胞計(jì)數(shù)儀內(nèi)置“Viability and Cell Count Assay (AOPI)”分析方法例隆，設(shè)置樣本名稱甥捺、視野面積以及稀釋倍數(shù)镀层。PI能夠與細(xì)胞裂解后的細(xì)胞核染色，呈現(xiàn)紅色熒光鹿响。
細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果：片載體細(xì)胞濃度（cells/cm2）=
注：艾貝泰提供的Reagent A100和Reagent B也可用于結(jié)團(tuán)細(xì)胞的裂解計(jì)數(shù)，精確獲得結(jié)團(tuán)細(xì)胞的計(jì)數(shù)結(jié)果妈倔。
