細胞培養(yǎng)知識點

DAPI

即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料教届,常用于熒光顯微鏡觀測.
因為DAPI可以透過完整的細胞膜,它可以用于活細胞和固定細胞的染色忿项。(流式檢測熒光病毒感染細胞時加DAPI去死活)

三抗

有些抗生素會在一周內降解家夺,培養(yǎng)基最好現(xiàn)用現(xiàn)配榨为。

丙酮酸鈉

丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源矩乐,但是如果沒有葡萄糖的話透葛,細胞也可以代謝丙酮酸鈉硫椰。

谷氨酰胺

幾乎所有的細胞對谷氨酰胺都有較高的要求蹄胰。谷氨酰胺脫掉氨基后,可作為培養(yǎng)細胞的能量來源,參與蛋白質的合成和能量代謝庆猫。在缺少谷氨酰胺時,細胞生長不良而死亡。所以,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺拌蜘。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定烤芦,應置-20℃冰凍保存铜涉,用前加入培養(yǎng)基中盖彭。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲存兩周以上時,應重新加入原來量的谷氨酰胺。

GlutaMAX-Ⅰ

GlutaMAX-Ⅰ是一個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩(wěn)定的a-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽父丰,釋放L-谷氨酰胺供利用攘烛。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常穩(wěn)定坟漱,即使在121℃滅菌20min成翩, GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最小的降解麻敌;而在相同條件下赢赊,L-谷氨酰胺幾乎完全降解。

L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的寥殖,但其在溶液中不穩(wěn)定趋观,經(jīng)過一段時間后會降解豆巨,確切的降解率一直沒有最終確定贩猎。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成吭服,而氨對于一些細胞具有毒性沼琉。因此GlutaMAX-Ⅰ是細胞培養(yǎng)中谷氨酰胺的替代品

NaHCO3的作用

與CO2一起形成緩沖系統(tǒng)打瘪,保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定闺骚。

NRDC基因

在細胞表面,NRDc能夠結合HB-EGF并能促進其誘導的細胞遷移葛碧。 NRDc基因敲除的小鼠,大部分在出生后48小時內死亡,神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育滯后进泼。 我們研究發(fā)現(xiàn),NRDc是第一個特異結合組蛋白H3K4me2的蛋白,并且具有調控基因轉錄的功能洋措。

Dispase II-分散酶II

中文名分散酶II滓鸠,一種非特異性金屬蛋白酶啤挎,細胞生物學中常被用來從各種不同組織或器官中消化細胞外基質织盼,釋放并制備原代單細胞杨何;或用于細胞培養(yǎng)中的細胞收獲或接種轉移;也被用于防止懸浮細胞培養(yǎng)時的細胞意外結團沥邻。危虱,如原代細胞的分離,細胞傳代等唐全。另外埃跷,Dispase II還可用于消除懸浮細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生的細胞聚集。與其他細胞生物學常用蛋白酶(如胰蛋白酶邮利、膠原酶弥雹、鏈霉蛋白酶等)相比,該酶具有以下優(yōu)勢:1)一種快速有效且溫和的細胞消化酶延届,對細胞損傷小剪勿,且能維持細胞膜完整性;2)來源于細菌方庭,無支原體或其他動物病毒污染厕吉;3)穩(wěn)定性強酱固,不受溫度、pH及血清組分的影響头朱;4)可用于多種類型組織和細胞的分離等运悲。
本品非無菌Dispase II,來源于Bacillus polymyxa髓窜,使用時需對其除菌處理扇苞,用于細胞培養(yǎng)時常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。

Accutase?-細胞消化液

是包含蛋白水解酶和膠原酶活性的一種細胞消化液寄纵,是胰酶/EDTA消化液的完美替換產(chǎn)品鳖敷,用于從常規(guī)組織培養(yǎng)器皿和粘附培養(yǎng)器皿中消化細胞,消化為單個細胞程拭。與傳統(tǒng)的胰酶消化液相比定踱,本品具有以下優(yōu)勢:
1)適用于絕大多數(shù)原代細胞和哺乳動物細胞系的消化,以及昆蟲細胞恃鞋;
2)溫和有效的消化干細胞(hESCs和mESCs)崖媚,凍存后細胞具更高復蘇率;
3)幾分鐘內實現(xiàn)粘附細胞的分離恤浪,不需清洗或中和反應畅哑,節(jié)省細胞傳代時間;
4)對細胞消化較為溫和水由,能增加細胞產(chǎn)量和存活率荠呐;增強細胞貼壁效率拧略;改善細胞形態(tài)和細胞生長特性等昔园。
注意事項:Accutase?融化后4℃保存,至少2個月穩(wěn)定种蘸。不可室溫保存鞠值。也可分裝成單次用量媚创,放到-80 ℃凍存,有效期2年彤恶。

mTeSR?1

cGMP mTeSR?1是使用最為廣泛的钞钙,用于培養(yǎng)人胚胎干細胞(ES 細胞)和誘導多能干細胞(hiPS 細胞)的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)基。從iPS的生成声离、培養(yǎng)到誘導分化歇竟,使用mTeSR?1培養(yǎng)細胞均建立了成熟的實驗流程;該培養(yǎng)基已在50多個國家成功用于維持上千種ES細胞系和iPS細胞系抵恋,應用此培養(yǎng)基的研究成果發(fā)表于頂級的多能干細胞雜志焕议,并為干細胞研究人員提供了強大的支持。
mTeSR?1是一款高度專業(yè)化、不含血清的完全培養(yǎng)基盅安。mTeSR?1培養(yǎng)基選用的原材料經(jīng)過嚴格的預篩選唤锉,確保了批次間的一致性,同時為ES 和iPS細胞的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)提供穩(wěn)健的實驗環(huán)境别瞭,這為研究人員提供具有高度一致性的窿祥、表型均一、未經(jīng)分化的高質量ES/iPS細胞培養(yǎng)物提供了保障蝙寨。
mTeSR1在符合cGMP質量管理體系下生產(chǎn)晒衩,確保最高的質量和一致性以及可重復性。

AGM-S3細胞

建立體外AGM-S3基質細胞共培養(yǎng)體系,以揭示AGM-S3細胞對終末分化中性.

菌落形成單位(cfu,colony forming units)

是指在瓊脂平板上經(jīng)過一定溫度和時間培養(yǎng)后形成的每一個菌落墙歪,是計算細菌或霉菌數(shù)量的單位听系。這個單位比“菌落數(shù)”更準確地反映問題的實質。理論上虹菲,一個活細菌可以在條件合適的固體表面上形成一個菌落靠胜,但是吸附于微小顆粒上的兩個以上菌體或粘連在一起的菌團可能共同形成一個菌落,而且不同環(huán)境因素作用下毕源,細菌的生活能力各不相同浪漠,會影響其在該條件下形成菌落的能力,致使形成的菌落數(shù)遠低于實際的活菌數(shù)霎褐。因此可用菌落形成單位代替以往常用的“菌落數(shù)”作為平板計數(shù)的數(shù)量單位址愿。

ReLeSR?

消化試劑。一種無酶試劑冻璃,適用于將人胚胎干(ES)細胞或人誘導多能干(iPS)細胞集落解離為細胞聚集體响谓,且無需對已發(fā)生分化的集落進行手工挑選。

Matrigel Basement Membrane Matrix

Matrigel是一種細胞外基質的混合物俱饿,其中包含laminin和多種生長因子歌粥,用于細胞培養(yǎng)塌忽。

基底膠是從富含胞外基質蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質拍埠,其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原土居、巢蛋白枣购、肝素糖蛋白,還包含生長因子和基質金屬蛋白酶等擦耀。在室溫條件下棉圈,基底膠聚合形成具有生物學活性的三維基質,模擬體內細胞基底膜的結構眷蜓、組成分瘾、物理特性和功能,有利于體外細胞的培養(yǎng)和分化吁系,可用于對細胞形態(tài)德召、生化功能白魂、遷移、侵染和基因表達等的研究上岗。
用途:培養(yǎng)細胞時可無需稀釋直接包被福荸,包被厚度可為0.5 mm(薄層)或1.0 mm(厚層)。Matrigel也可以在無血清培養(yǎng)基中稀釋后用于包被培養(yǎng)器皿表面肴掷,根據(jù)細胞類型和應用目的確定相應Matrigel濃度敬锐。

Gentle Cell Dissociation Reagent (GCDR)

溫和細胞解離試劑(GCDR)是一種無酶試劑,適用于將人胚胎干(ES)細胞或人誘導多能干(iPS)細胞解離為細胞聚集體以進行常規(guī)傳代或單細胞懸浮液呆瞻。它也適用于分離腸隱窩以建立腸道類器官台夺,以及用于在傳代類器官培養(yǎng)物時分解康寧?基質凝膠?圓頂。GCDR不含酶或其他蛋白質栋烤。

GCDR現(xiàn)在也在經(jīng)過認證的質量管理體系下按照相關的cGMP制造谒养,以確保可重復結果的最高質量和一致性明郭。

Essential 8? 培養(yǎng)基(E8)

基于最原始的配方买窟,是我們成分明確、一致性高的無滋養(yǎng)層培養(yǎng)基薯定,用于培養(yǎng)誘導多能干細胞(iPSC)始绍。也可用于ESC培養(yǎng)。(* DOI: 10.1111/cpr.13002

STEMdiff? APEL?

人多能干細胞基礎培養(yǎng)基话侄,是完全確定的亏推、不含血清和動物源成份的培養(yǎng)基,用于人ES和iPS細胞的分化年堆。它是基于AndrewElefanty博士發(fā)表的APEL配方(缺乏不確定的成份吞杭,如不含蛋白的雜交瘤培養(yǎng)基)
該培養(yǎng)基可用于貼壁或EB操作流程。 可與多種不同的誘導因子或細胞因子一起使用变丧,支持外胚層芽狗,中胚層和內胚層譜系的分化。

培養(yǎng)基里的“四大金剛”—MEM痒蓬、DMEM童擎、1640、F-12

它們基本參與了90%以上種類細胞的培養(yǎng)過程攻晒。

MEM

作為帶頭大哥顾复,能力非常全面,號稱是應用最廣泛的細胞培養(yǎng)液鲁捏。

DMEM

作為隨時緊跟老大MEM的二弟芯砸,青出于藍而勝于藍,濃度要高出2~4倍,可分為高糖型(含葡萄糖4500mg/L)和低糖型(含葡萄糖1000mg/L)假丧。

1640

老三中規(guī)中矩末购,營養(yǎng)成分比較簡單,比DMEM少一點糖和谷光甘肽虎谢,常用于淋巴細胞的培養(yǎng)盟榴。

F12培養(yǎng)基

起初是作為一種無血清配方設計的,常補加血清用于支持各種正常的和轉化細胞的增殖婴噩。F12常和DMEM以I:I結合擎场,稱為DMEM/F12培養(yǎng)基,作為開發(fā)無血清配方的基礎几莽,以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營養(yǎng)成分的優(yōu)點迅办。
小兄弟F12常用來支持CHO、Hela和L-細胞生長以及原代大鼠肝細胞和前列腺上皮細胞的培養(yǎng)章蚣。MEM和F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2站欺,即可形成神經(jīng)生物學最通用的培養(yǎng)基。

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