操作步驟 （ 請(qǐng)自行準(zhǔn)備無水乙醇、異丙醇和 1.5mL 滅菌 RNase-free 離心管 ）
1. 取出洗滌液，按以下操作：
a) 洗滌液 A：按終濃度 30%比例加入無水乙醇剖煌，如 7mL 加入 3mL 無水乙醇诚些；21mL 加入 9mL 無水乙醇，充分混勻织鲸。
b) 洗滌液 B：按終濃度 70%比例加入無水乙醇句占，如 3mL 加入 7mL 無水乙醇沪摄；9mL 加入 21mL 無水乙醇，充分混勻纱烘。
2. 取 1.5mLRNase-free 滅菌離心管杨拐，加入 200μL 血液樣本，再加入 180μL 裂解液凹炸、3μL 消化液 A 和 20μL 消化液 B，振蕩混勻昼弟，65℃水浴10 分鐘啤它。
3. 加入 400μL 異丙醇，混合均勻舱痘，如有半透明懸浮物变骡，不影響 RNA 的提取與后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4. 將吸附柱放入收集管內(nèi)芭逝，將上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi)塌碌，12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液旬盯；
5. 將吸附柱放回收集管內(nèi)台妆，加 500μL 洗滌液 A 至吸附柱內(nèi)翎猛，靜置 1 分鐘，12,000 rpm 離心 1 分鐘接剩，棄收集管內(nèi)廢液切厘。
6. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加 500μL 洗滌液 B 至吸附柱內(nèi)懊缺，靜置 1 分鐘疫稿，12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液鹃两。
7. 將吸附柱放回收集管內(nèi)遗座，加 500μL 洗滌液 B 至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 離心 1 分鐘俊扳，棄收集管內(nèi)廢液途蒋。
8. 按每份樣本 40μL 取洗脫液（如 10 份提取樣本，即取 400μL 洗脫液）拣度，放置于滅菌 1.5mL 離心管碎绎，65℃預(yù)熱。
9. 將吸附柱放回收集管內(nèi)抗果，12,000 rpm 離心 2 分鐘筋帖，離去殘留的洗滌液。
10. 取出吸附柱冤馏，放入新的 1.5mL RNase-free 滅菌離心管內(nèi)日麸，在吸附柱中心加入 40 μL 預(yù)熱洗脫液，靜置 2 分鐘逮光，12,000 rpm 離心 1 分鐘代箭，收集 RNA 溶液。提取的 RNA 即可用于下一步實(shí)驗(yàn)或-70℃保存涕刚。
注意事項(xiàng)：
1.裂解液嗡综、洗滌液含有刺激性化學(xué)物質(zhì)，操作過程請(qǐng)做好防護(hù)措施杜漠，避免直接接觸皮膚极景，防止吸入口鼻。洗滌液加入乙醇后要充分混勻驾茴，最好現(xiàn)用現(xiàn)配盼樟，每次根據(jù)所要提取的樣本量計(jì)算后適量配制。
2.如血液量不足200μL锈至，請(qǐng)用0.85% 生理鹽水補(bǔ)至200μL晨缴；如需血液量超出200μL，請(qǐng)使用BIOG中大量血液RNA提取試劑峡捡。
3.如果提取的血液為鳥類击碗、禽類的血液筑悴，因有核紅細(xì)胞較多，提取血液量應(yīng)適當(dāng)減少延都，研究者應(yīng)先進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)雷猪，選擇合適用量。
4.為防 RNA 酶污染晰房，實(shí)驗(yàn)過程中最好戴一次性干凈手套求摇、口罩，使用處理過的無 RNA 酶的容器和無 RNA 酶的超純水殊者。
5.提取的 RNA 如暫不使用与境，應(yīng)-70℃保存，可適當(dāng)加入 RNA 保護(hù)因子（貨號(hào)：51090猖吴，一般 40μLRNA 溶液加入 2μL）摔刁。
